DB42Part1：Microbiologi湖北省市場監督管理局發布I V 2 3 3 4 5 5 6 7 8 9 本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定本文件是DB42/T2246《實驗用貓》的第1部分。DB42/T2246請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。藥品監督檢驗研究院、國藥集團動物保健股份有限公司、湖北逸摯誠生物科技有黎炎梅、張金明、王一茹、陳平平、楊祖麗、楊倩、譚無雙、V術等相關產業發展、保障公共安全等提供技術DB42/T2246《實驗用貓》旨在建立實驗用貓微生物學等級及監測、寄生蟲學等級及監測以及——第1部分：微生物學等級及監測。目的在于規定標、監測程序、監測方法、監測規則、結果判定、判定結論等——第2部分：寄生蟲學等級及監測。目的在于規定實驗用貓的等級分類、寄生蟲——第3部分：飼養與管理。目的在于規定實驗用貓的環境與設施、人員1實驗用貓第1部分：微生物學等級及監測GB/T14926.6實驗動物支氣管GB/T14926.50-2001實驗NY/T541獸醫診斷樣品采集、保存與運輸技術規范3.13.2普通級實驗用貓conventional（CV）experimen3.3無特定病原體級實驗用貓specificpathogenfree（SPF）experi4等級分類2實驗用貓按微生物與寄生蟲控制等級分類，包括普通級實驗用貓和無特定病原體5.1.1實驗用貓應體態豐滿、發育正常、毛濃密有光澤、眼睛明亮活潑、反應靈敏、食欲良好。b)耳：耳道無分泌物溢出，耳廓無缺陷。在安靜狀態下，對聲響反應靈敏；c)鼻：無漿液性、粘液性及膿性分泌物滲出；▲▲▲▲●皮膚病原真菌Pathogenicdermalfungi○級●●●●●貓免疫缺陷病毒Felineimmu●○3●○支氣管鮑特桿菌Bordetellab●●動物編號外觀檢查耳后、背部毛發或皮屑鼻拭子、肛拭子（或新鮮糞便）采血耳后、背部毛發或皮屑鼻拭子、肛拭子（或新鮮糞便）樣本檢測結果判定檢測結論4貓皰疹病毒1型8.2取樣要求8.2.2取樣數量：每個實驗用貓生產繁殖單元，5<100>5008.3取樣、送檢8.3.4樣本要求有明顯標識，寫明檢品名稱、動物品種、等級、數量及檢測項目等內容，安全送達實8.4檢測項目分類8.4.1必須檢測項目：指在進行實驗用貓質量8.4.2必要時檢測項目：指相關行政部門要求時、本病流行時、進出口時，或特定實驗要求時需要檢9結果判定在監測的各等級動物中，如有某項指標不符合該等級標6根據vp2基因序列（GenBank:AF015223）設計:）：）：A.3對照設立空白對照：在擴增反應階段設置。以滅菌雙A.4.1反應體系A.4.2反應條件A.6結果判定陽性對照出現301bp的目的片段，陰性對照無條帶，實驗成立；待檢樣品出現301bp目的片段，判定貓泛白細胞減少癥病毒陽性；未出現301bp目的片段，判定貓泛白細胞減少癥病毒陰性。7）：）：空白對照：在擴增反應階段設置。以滅菌雙95℃預變性2min，95℃變性15s，54℃退火30s（熒光信號采集）；第2到第3步40個循環。檢樣品有熒光擴增曲線，且Ct值≤35，判定貓皰疹病毒I8）：）：空白對照：在擴增反應階段設置。以滅菌雙判定貓皰疹病毒I型陽性；未出現288bp目的片段時，判定貓9）：）：c)探針序列（5′-3′FAM）AGATG空白對照：在擴增反應階段設置。以滅菌雙95℃預變性2min，95℃變性15s，54℃退火30s（熒光信號采集）；第2到第3步40個循環。檢樣品有熒光擴增曲線，且Ct值≤35，判定貓皰疹病毒I按照病毒RNA提取試劑盒操作方法進行，提取的RNA凍存于根據ORF2基因序列（GenBank:MZ712）：）：判定貓杯狀病毒陽性；未出現926bp目的片段時，判定）：）：空白對照：在擴增反應階段設置。以滅菌雙F.4.1反應體系（建議根據所用逆轉錄商品化試劑盒說ng/μL）1μL，模板RNA500F.4.2反應條件（建議根據所用逆轉錄商品化試劑盒說16μL體系反應條件：42℃反應2min。20μL體系反應條件：50℃反應15min，85℃反應2min。95℃預變性2min，95℃變性15s，54℃）；檢樣品有熒光擴增曲線，且Ct值≤35，判定貓皰疹病毒I按照病毒RNA提取試劑盒操作方法進行，提取的RNA凍存于）：）：）：）：使用逆轉錄試劑盒對所提RNA進行逆轉錄，判定貓狂犬病病毒陽性；未出現239bp目的片段時，判定貓狂犬按照病毒RNA提取試劑盒操作方法進行，提取的RNA凍存于）：）：判定貓傳染性腹膜炎病毒陽性；未出現223）：）：c)探針序列（5′-3′FAM）T空白對照：在擴增反應階段設置。以滅菌雙ng/μL）1μL，模板RNA50016μL體系反應條件：42℃反應2min。20μL體系反應條件：50℃反應15min，85℃反應2min。95℃預變性2min，95℃變性15s，58℃）；檢樣品有熒光擴增曲線，且Ct值≤35，判定貓皰疹病毒I將樣本按照RNA提取試劑盒的操作說明提取RNA，凍存于-70℃冰箱空白對照：在擴增反應階段設置。以滅菌雙蒸水作為）：）：判定貓傳染性腹膜炎病毒陽性；未出現172）：）：c)探針序列（5′-3′FAM）TTCTT空白對照：在擴增反應階段設置。以滅菌雙K.4.1反應體系（建議根據所用逆轉錄商品化試劑盒說明K.4.2反應條件（建議根據所用逆轉錄商品化試劑盒說明16μL體系反應條件：42℃反應2min。20μL體系反應條件：50℃反應15min，85℃反應2min。95℃預變性2min，95℃變性15s，56℃退火30s（熒光信號采檢樣品有熒光擴增曲線，且Ct值≤35，判定貓皰疹病毒I按照病毒RNA提取試劑盒操作方法進行，提取的RNA凍存于空白對照：在擴增反應階段設置。以滅菌雙蒸水作為根據Env基因序列（GenBank:MW731550）：）：判定貓白血病病毒陽性；未出現119bp目的片段時，判定貓白血根據Env基因序列（GenBank:MW731550）：）：c)探針序列（5′-3′FAM）CTT空白對照：在擴增反應階段設置。以滅菌雙M.4.1反應體系（建議根