甘肅pcr上崗證考試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術的中文名稱是（）A.聚合酶鏈反應B.核酸內(nèi)切酶反應C.連接酶反應D.反轉(zhuǎn)錄反應答案：A2.在PCR反應中，起模板作用的是（）A.dNTPB.引物C.待擴增的DNAD.Taq酶答案：C3.PCR反應中，Taq酶的作用是（）A.合成新的DNA鏈B.解開雙鏈DNAC.提供反應的緩沖環(huán)境D.連接DNA片段答案：A4.以下哪種不是PCR反應的基本成分（）A.模板DNAB.RNA聚合酶C.引物D.dNTP答案：B5.PCR反應的變性溫度一般為（）A.90-95℃B.72℃C.50-60℃D.37℃答案：A6.PCR反應中引物的長度一般為（）A.5-10個核苷酸B.15-30個核苷酸C.50-100個核苷酸D.100-200個核苷酸答案：B7.在PCR反應中，退火溫度主要取決于（）A.模板的長度B.引物的長度和GC含量C.Taq酶的活性D.dNTP的濃度答案：B8.PCR產(chǎn)物的特異性主要取決于（）A.模板的純度B.引物的特異性C.Taq酶的質(zhì)量D.反應的循環(huán)次數(shù)答案：B9.以下關于PCR反應循環(huán)次數(shù)的說法正確的是（）A.循環(huán)次數(shù)越多越好B.循環(huán)次數(shù)一般為20-30次C.循環(huán)次數(shù)由模板的量決定，與其他因素無關D.循環(huán)次數(shù)為10-15次就足夠答案：B10.PCR反應體系的體積一般為（）A.1-5μLB.10-50μLC.100-200μLD.500-1000μL答案：B二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術可應用于（）A.基因診斷B.基因克隆C.法醫(yī)學鑒定D.腫瘤研究答案：ABCD2.影響PCR反應的因素有（）A.模板的純度和量B.引物的設計C.Taq酶的活性D.反應體系的成分和條件答案：ABCD3.以下關于引物設計的原則正確的是（）A.引物長度合適B.避免引物自身形成二級結(jié)構(gòu)C.引物之間不能互補D.引物的GC含量在40%-60%之間答案：ABCD4.PCR反應中的污染來源可能有（）A.樣本間交叉污染B.試劑污染C.實驗室環(huán)境污染D.擴增產(chǎn)物的污染答案：ABCD5.在PCR實驗中，為避免污染可采取的措施有（）A.分區(qū)操作B.使用一次性耗材C.嚴格遵守操作規(guī)程D.定期對實驗室進行清潔和消毒答案：ABCD6.以下哪些是PCR反應中的緩沖液成分（）A.KClB.Tris-HClC.MgCl?D.(NH?)?SO?答案：ABC7.PCR技術的發(fā)展包括（）A.熒光定量PCRB.多重PCRC.反向PCRD.巢式PCR答案：ABCD8.熒光定量PCR的特點有（）A.定量準確B.靈敏度高C.可實時監(jiān)測反應進程D.不需要進行電泳檢測答案：ABCD9.在進行PCR實驗時，需要對以下哪些設備進行校準（）A.離心機B.擴增儀C.移液器D.溫度計答案：ABCD10.PCR產(chǎn)物的分析方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測序D.酶切分析答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應只能擴增DNA，不能擴增RNA。（）答案：錯誤2.引物在PCR反應中可以無限次使用。（）答案：錯誤3.Taq酶在高溫下容易失活。（）答案：錯誤4.PCR反應中，dNTP的濃度越高越好。（）答案：錯誤5.只要有足夠的模板，PCR反應就可以得到大量的特異性產(chǎn)物。（）答案：錯誤6.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應。（）答案：錯誤7.熒光定量PCR只能用于檢測DNA。（）答案：錯誤8.在PCR實驗中，不同的樣本可以在同一區(qū)域進行處理。（）答案：錯誤9.PCR反應的退火溫度是固定不變的。（）答案：錯誤10.PCR產(chǎn)物的長度只與模板的長度有關。（）答案：錯誤四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應的基本原理。答案：PCR反應是一種體外擴增特定DNA片段的技術。以待擴增的DNA為模板，在Taq酶的作用下，以四種dNTP為原料，按照堿基互補配對原則，在引物的引導下合成新的DNA鏈。通過變性（使模板DNA雙鏈解開）、退火（引物與模板結(jié)合）、延伸（合成新鏈）三個步驟的多次循環(huán)，使目的DNA片段得到大量擴增。2.簡述引物設計的重要性及主要注意事項。答案：引物設計非常重要，它決定PCR產(chǎn)物的特異性等。注意事項包括：長度15-30個核苷酸，避免自身二級結(jié)構(gòu)，引物間不能互補，GC含量在40%-60%等，這樣能保證引物有效結(jié)合模板，減少非特異性擴增。3.簡述PCR反應中的污染類型及如何避免污染。答案：污染類型有樣本間交叉污染、試劑污染、實驗室環(huán)境污染和擴增產(chǎn)物污染。避免污染的方法包括分區(qū)操作、使用一次性耗材、嚴格遵守操作規(guī)程、定期清潔消毒實驗室等。4.簡述熒光定量PCR與普通PCR的區(qū)別。答案：熒光定量PCR可實時監(jiān)測反應進程、定量準確、靈敏度高，不需要電泳檢測。普通PCR主要是對目的片段進行定性擴增，需要電泳等后續(xù)分析確定結(jié)果。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論在PCR實驗中如何保證結(jié)果的準確性。答案：要保證模板純度和量合適，精心設計引物，確保Taq酶活性，嚴格控制反應體系成分和條件，避免污染，規(guī)范操作流程并對設備進行校準等。2.討論PCR技術在疾病診斷中的應用前景。答案：PCR技術在疾病診斷中前景廣闊，可快速檢測病原體核酸，早期診斷疾病，還可用于腫瘤相關基因檢測等，有助于疾病的精準診斷和治療。3.討論在進行多重PCR時需要特別注意哪些方面。