產品中文名稱：十六項呼吸道病原體核酸聯合檢測試劑盒（熒光 3 3 3 3 4 4 5 9 13 一、申請人名稱廈門安普利生物工程有限公司二、申請人住所廈門市海滄區陽光路10號三、生產地址廈門市海滄區陽光路10號一、產品概述（一）產品主要組成成分試劑盒1：稀釋緩沖液、D-1反應緩沖液、B酶混合液、RVD16陽性對照。（具體內容詳見產品說明書）（二）產品預期用途本試劑盒定性檢測并區分人口咽拭子樣本中的甲型流感病毒、乙型流感病毒、人副流感病毒Ⅰ型、人副流感病毒Ⅱ型、人副流感病毒Ⅲ型、人腺病毒、人呼吸道合胞病毒、人冠狀病毒229E組、人冠狀病毒OC43組、人冠狀病毒NL63組、人冠狀病毒HKUI組、人博卡病毒、人偏肺病毒、人鼻病毒、肺炎支原體及肺炎衣原體核酸。適用于臨床人呼吸道感染的輔助診斷。（三）產品包裝規格24人份/盒（四）產品檢驗原理本試劑盒根據體外基因擴增原理，利用熒光共振能量轉移實時跟蹤熒光定量檢測方法，以人18SrRNA基因作為內標靶基因，并結合多熒光通道檢測方法，對人呼吸道病原體核酸進行定性分析。NMPA器審中心技術審評報告公開二、臨床前研究概述NMPA器審中心技術審評報告公開（一）主要原材料1.NMPA器審中心技術審評報告公開本產品主要原材料包括：引物、探針；dNTPs；TaqDNA聚合酶；M-MLV逆轉錄酶等。主要原材料TaqDNA聚合酶和M-MLV逆轉錄酶為申請人自制，引物、探針和dNTPs均為外購。申請人選擇有資質的供應商提供的原料，通過功能性試驗，篩選出最佳原材料和供應商，NMPA器審中心技術審評報告公開2.企業參考品和質控品的設置情況本試劑盒企業參考品包括陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品和精密性參考品。陽性參考品21支，包括三個濃度的樣本，由覆蓋試劑盒檢測范圍內病原體的常見基因型別的臨床樣本混合組成；陰性參考品10支，由試劑盒檢測范圍外的臨床陰性樣本及病原體培養物組成；精密性參考品11支，包括中陽性、弱陽性和陰性濃度水平的樣本；最低檢測限參考品10支，由包含試劑盒檢測范圍內病原體常見基因型別的臨床樣本本試劑盒設置了陰性對照為0.9%氯化鈉；陽性對照為含有檢測范圍內各病原體目標基因片段的質粒和假病毒，用于檢測過程中的質量（二）生產工藝及反應體系研究申請人對本試劑盒反應體系的研究包括拭子材質選擇研究、采樣條件研究、反應條件的確定、樣本處理方式和滅活適用性研究及樣本和核酸用量的確定等。通過功能性實驗，最終確定了申請人通過對試劑主要生產工藝的研究包括引物濃度、探針濃度、內標引物濃度、內標探針濃度、dNTPs濃度、BSA濃度、（NH4)2SO4濃度、MgCl2濃度、KCl濃度、TaqDNA聚合酶終濃度、M-M錄酶終濃度以及酶生產工藝研究，確定了最佳的生產工藝。（三）分析性能評估本試劑盒分析性能評估內容主要包括：核酸提取性能、準確度、精密度、最低檢測限、分析特異性、包容性等。申請人提交了有效運行的質量管理體系下生產的三批產品在適用機型上的性能評估資料。在核酸提取性能研究中，申請人比較評估了配套使用的核酸提取試劑與其他已上市核酸提取試劑的提取濃度、純度、提取效率、檢測準確度等性能，結果表明配套使用的核酸提取試劑的提取性能符合研制設計要求。準確度的研究中，申請人采用三批成品試劑盒，以臨床樣本為研究樣本，與已上市產品和Sanger測序方法進行對比。結果表明申報產品檢測結果與對比試劑、Sanger精密度研究中，申請人使用三批試劑，分別對中陽性、臨界陽性和陰性3個水平的樣本，進行了20天的多次檢測，對批內/間、操作者間、日內/間、室內精密度和室間精密度等進行了評價。結果表明：精密度良好，檢測結果CV均≤5%最低檢測限的研究中，申請人使用三批試劑，檢測不同濃度梯度的病原體培養物和臨床陽性樣本，研究樣本包含目標病原體的主要可檢測型別，將≥95%陽性檢出率的濃度水平作為確定的最低檢測限，并進行最低檢測限驗證。最終確定檢測范圍內16種病原體的最低檢測限為500copies/mL。分析特異性包含交叉反應研究及干擾研究。在交叉反應研究中，申請人使用三批試劑進行了試劑盒檢測范圍內及試劑盒檢測范圍外的呼吸道感染相關病原體的交叉反應研究，研究顯示：巨細胞病毒、單純皰疹病毒1型、水痘帶狀皰疹病毒、EB病毒、百日咳桿菌、白喉棒狀桿菌、流感嗜血桿菌、乳酸桿菌屬、嗜肺軍團菌、卡他莫拉菌、腦膜炎奈瑟菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌、唾液鏈球菌、肺孢子菌、白念珠菌、肺炎克雷伯菌、腸道病毒A組、腸道病毒B組、腸道病毒C組、腸道病毒D組、輪狀病毒、諾如病毒、結核分枝桿菌、隱球菌、煙曲霉、大腸桿菌、鮑曼不動桿菌、人基因組DNA、SARS病毒、MERS病毒、新冠病毒對于檢測結果無交叉。在干擾研究中，申請人采用三批成品試劑盒，進行了內源/外源干擾物質研究，結果顯示聲稱濃度下的血液（人類）、無水乙醇、粘蛋白、苯福林、羥甲唑啉、氯化鈉（含防腐劑）、倍氯美松、地塞米松、氟尼縮松、曲安奈德、布地奈德、莫米松、氟替卡松、鹽酸組胺、流感疫苗、苯佐卡因、薄荷腦、扎那米韋、利巴韋林、奧司他韋、帕拉米韋、洛匹那韋、利托那韋、阿比多爾、α-干擾素、莫匹羅星、左氧氟沙星、阿奇霉素、頭孢曲松、美羅培南、鹽酸頭孢甲肟、妥布霉素對試劑盒檢測結果無干擾。在進行的競爭性干擾研究中，使用一種低copies/mL）分析物評估同一反應體系中的病原體和常見混合感染病原體的競爭性干擾，檢測結果均為試劑盒檢測范圍內相應病原體陽性，結果顯示可檢測的病原體及亞型之間無競爭性干擾。在交叉污染研究中，對同管內多種病原體高濃度混合樣本（1.0×107copies/mL），所濃度、個別病原體低濃度混合樣本（其中一個病原體為500copies/mL，其他15種病原體為1.0×107copies/mL）的多種最差結果顯示在多種不同條件下，最差條件下（多種病原體高濃度混合）試劑盒檢測結果不存在交叉、干擾、抑制影響。包容性研究中，申請人采用三批成品試劑盒，收集不同時間和地區的各目標病原體陽性樣本進行檢測，包括：甲型流感病毒H7N9、H3N2、H5N1、H1N1；乙型流感病毒Victoria、Yamagata株；人腺病C組；人副流感病毒I型、人副流感病毒II型；人副流感病毒III型；人冠狀病毒229E、人冠狀病毒OC43、人冠狀病毒NL63、人冠狀病毒HKUI；人呼吸道合胞病毒A組、B組；人偏肺病毒A組、B組；人博卡病毒1型、2型、3型、4型；肺炎支原體和肺炎衣原體。檢測結果表明，本試劑檢測不同時間和地區收集的檢測范圍內病原體均能正（四）陽性判斷值研究申請人采用ROC曲線法進行試劑盒的陽性判斷值的研究，共收集880例陽性及280例陰性臨床樣本進行檢測，確定Ct=38為試劑盒的（五）穩定性研究申請人對本產品進行了穩定性研究，包括實時穩定性、使用穩定性、運輸穩定性等。研究結果表明：試劑盒在-30℃~8℃避光保存，有效期12個月。開瓶后2~8℃避光保存，不得超過7天。反復凍融次數不得超過5次。運輸穩定性研究結果支持說明書聲稱。樣本穩定性研究：為考察該產品對不同條件下儲存不同時間的樣本的檢出性能，申請人使用該產品分別對短期儲存、長期儲存的樣本進行測試，研究結果支持說明書聲稱。三、臨床評價概述申請人在徐州醫科大學附屬醫院、杭州市第一人民醫院、廣州醫科大學附屬清遠醫院（清遠市人民醫院）、南方醫科大學珠江醫院、溫州醫科大學附屬第二醫院、溫州醫科大學附屬第一醫院、廈門疾病預防控制中心共7家機構完成了臨床試驗，入組樣本均為呼吸道感染患者的樣本，樣本類型為口咽拭子。臨床試驗共分為兩部分：（一）與Sanger測序法比較研究共納入統計2323例，與Sanger測序法進行比較研究。99.44%，100%陰性符合率為99.39%（95%CI：98.88%，99.67%95.36%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.83%，100%）；針對腺病毒檢測，陽性病例122例，陽性符合率為100%（95%CI：96.95%，100%陰性符合率為99.93%（95%CI：99.74%，99.99%針對副流感病毒II型檢測，陽性病例73例，陽性符合率為100%94.93%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.83%，100%）；針對博卡病毒檢測，陽性病例142例，陽性符合率為100%（95%CI：97.37%，100%陰性符合率為99.95%（95%CI：99.74%，99.99%針對副流感病毒I型檢測，陽性病例69例，陽性符合率為100%（95%CI：94.73%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.83%，100%）；針對鼻病毒檢測，陽性病例303例，陽性符合率為100%99.95%）；針對呼吸道合胞病毒檢測，陽性病例202例，陽性符合率為100%（95%CI：98.13%，100%），陰性符合率為99.95%（95%CI：99.73%，99.99%）；針對肺炎衣原體檢測，陽性病例119例，陽性符99.83%，100%針對肺炎支原體檢測，陽性病例147例，陽性符合99.82%，100%針對HCOV-229E檢測，陽性病例53例，陽性符合），99.83%，100%針對偏肺病毒檢測，陽性病例123例，陽性符合率為100%（95%CI：96.97%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.83%，100%針對乙流病毒檢測，陽性病例448例，陽性符合率為100%（95%CI：99.15%，100%），陰性符合率為99.79%（95%CI：99.45%，99.92%）；針對副流感病毒III型檢測，陽性病例73例，陽99.75%，99.99%）；針對HCOV-HKU1檢測，陽性病例71例，陽性99.83%，100%）。試驗結果顯示，本產品與對比方法一致性較好。（二）與已上市同類產品的比較研究申請人開展了與已上市同類產品的比較研究，共納入1556例樣98.98%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.68%，100%）；94.73%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.74%，100%）；針對腺病毒檢測，陽性病例104例，陽性符合率為100%（95%CI：96.44%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.74%，100%）；針對副流感病毒II型檢測，陽性病例68例，陽性符合率為100%（95%CI：94.65%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.74%，100%針對HCOV-OC43檢測，（95%CI：95.72%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.74%，100%）；針對博卡病毒檢測，陽性病例90例，陽性符合率為100%（95%CI：95.91%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.74%，100%）；針對副流感病毒I型檢測，陽性病例88例，陽性符合率為100%）；針對鼻病毒檢測，陽性病例167例，陽性符合率為100%（95%CI：97.75%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.72%，100%針對呼吸道合胞病毒檢測，陽性病例102例，陽性符合率為99.99%針對肺炎衣原體檢測，陽性病例66例，陽性符合率為100%（95%CI：94.50%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.74%，100%針對肺炎支原體檢測，陽性病例104例，陽性符合率為100%（95%CI：96.44%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.74%，100%針對HCOV-229E檢測，陽性病例74例，陽性符合率為100%（95%CI：95.06%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.74%，100%）；針對偏肺病毒檢測，陽性病例120例，陽性符合率為100%（95%CI：96.90%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.73%，100%）；針對乙流病毒檢測，陽性病例70例，陽性符合率為100%（95%CI：94.80%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.74%，100%針對副流感病毒III型檢測，陽性病例74例，陽性符合率為（95%CI：95.42%，100%），陰性符合率為100%（95%CI：99.74%，100%）。試驗結果顯示，本產品與已上市同類產品一致性較好。綜上所述，該產品臨床試驗資料符合技術審評要求。四、產品受益風險判定根據申請人提供的申報資料，經綜合評價，在目前認知水平上，認為該產品的上市為適用人群帶來的受益大于風險。但為保證用械安全，基于對主要剩余風險的規避，需要在說明書中提示以下信息：1.本試劑檢測結果應結合患者臨床癥狀及其他相關醫學檢查結果進行綜合分析，不得單獨作為患者管理的依據。2.檢驗的病毒核酸出現序列變異時會存在假陰性風險。3.不合理的樣本采集、轉運及處理以及不當的實驗操作和實驗環境均有可能導致假陰性或假陽性結果。4.不同病程不同階段樣本的陽性率不一致。5.取標本期間，接種減毒活疫苗的患者可能會導致檢測試劑檢測6.待檢核酸序列可能長時間出現在體內，而與病毒活性無關。核酸檢測陽性并一定不意味著目前感染了相應病毒或其為臨床癥狀的致7.對于突發的新型流感病毒，其檢測的最適樣本類型及感染后的最佳采樣時間可能尚未確認，因此，在同一患者分次、多部位采集樣本會降低假陰性結果的可能性。8.未經驗證的其他干擾或PCR抑制因子，可能會導致假陰性結本申報項目為境內第三類體外診斷試劑產品注冊。申請人的注冊申報資料符合現行要求，依據《醫療器械監督管理條例》（國務院令第739號）、《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》（國家市場監督建議準予注冊。附件：產品說明書十六項呼吸道病原體核酸聯合檢測試劑盒（熒光PCR法）3三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽、三羥甲基氨基甲烷、水321RVD16擴增液2#11RVD16擴增液4#1111HPIVⅢ引物探針、內標引物探針12三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽、三羥甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二鈉、水411需要但未提供的試劑：核酸提取試劑盒，采用廈門安普利生物工程有限公司生產的核酸提取試劑（閩廈械備20170006）。全自動醫用PCR分析系統（GeneLight9820）、全自動核酸提純及熒光PCR分析系統（Anadas9850）。入異硫氰酸胍（終濃度3M）進行滅活，或56℃加熱30min進行滅活。4.樣本保存：待測分泌物拭子在2~8℃保存，保存期不應超過72小時；在-20±5℃保存期半年，-70℃以下可保存四應在1.7～2.1之間。提取完成的核酸應立即進行檢測實驗，否則請于-20±5℃保存，保存時間（1）取出試劑盒中的D-1反應緩沖液、RVD16擴增液1#~8#、稀釋緩沖液、B酶混充分混合均勻，3000~5000g離心5秒，移至標本處理區。48℃30分鐘，95℃2分鐘；進入以下循環：95℃15秒，58℃50秒（30），使用全自動醫用PCR分析系統或全自動核酸提純及熒光PCR分析系統進行分析時，基線取3～12個循環的熒光信號，閾值可以根據儀器號體ⅠNL63毒體體毒3.特異性（陰性參考品符合率）：檢測陰性參考品，檢5.精密性：采用中陽性、臨界陽性和陰性3個水平的樣本，對批內/間7.干擾物質研究：血液（人類5%）、無水乙醇（5%）、粘蛋白（20μg/mL）、苯福林（100μg/mL）、羥甲唑啉（100μg/mL）、氯化鈉（含防腐劑0.9%）、倍氯美松（50μg/mL）、地塞米松（50μg/mL）、氟尼縮松（100μg/mL）、曲安奈德（100μg/mL）、布地奈德素（100μg/mL）、頭孢曲松（100μg/mL）、美羅培南（100μg/mL）、鹽酸頭孢甲肟（100μg/mL）、妥布霉素（100μg/mL）對試劑盒檢同一反應體系中的病原體和常見混合感染病原體的競爭性干擾，檢測結果均為試劑盒檢測范圍內相應病原體陽性，結果顯示可檢測的病奈瑟菌(6.31E+06CFU/mL)、金黃色葡萄球菌(1.0-2.0E+06CFU/mL)、表皮葡萄球菌(7.30E+06CFU/mL)、腸道病毒D組(1.26E+06PFU/mL)、輪狀病毒(4.35E+05PFU/mL)、諾如病毒(1.67E+06PFU/mL)、結核菌(4.23E+06CFU/mL)