類器官技術在女性生殖道感染領域的應用2025群以乳桿菌為主；當需氧菌、厭氧菌、假絲酵氧菌性陰道炎、細菌性陰道病、外陰陰道假原體如沙眼衣原體(chlamydiatra個組織器官的感染，從而導致盆腔炎癥性疾病等的發生，嚴重損害生殖健康[1]。當前，應用類器官技術構建合適的研究模型，從而進行微生物感染相關過程和機制的研究逐漸興起[2]。類器官是應用成體干細胞或多能干細胞進行體一定空間結構的組織類似物，可以最大程度模擬體內組織結構及其功能，來源組織器官高度相似，可以很好地模擬組養，從而解決了某些細胞無法體外常規培養的問題[3]。類器官模型在2019年被評價為“優良的臨床前疾病模型”,已廣泛應用疾病建模、抗癌藥物篩選和感染性疾病研究等領域[4]。當前，人源的卵巢、輸卵管、這些類器官不僅可以復現原始器官的形態結構選擇合適的方法將微生物引入類器官至關重要，碎片感染法、極性反轉感染法、二維培養感染法以及類器官芯片感染法。然而由于基質膠的屏障作用，會影響膠外細菌的進入和膠內細菌的移動[8]。直接感染法操作容易，適合于大規模操作，且可以提供均勻的細胞分布和對營養物質的暴露，成本較低，相互作用的方式，與人體生理狀態相差較遠。原體等小型病原微生物對類器官的感染[9]。細胞頂端的一側，同時保留類器官的三維結別適合厭氧菌的感染[10]。目前，此方法在研究腸類器官微生物感染中應用較多，如鼠傷寒沙門菌(是兼性厭氧菌)只有接觸腸管上皮細胞頂端此種方法已用于探究最佳注射體積、觀察熒微注射、缺氧條件下感染研究等。但是由于注身也極具挑戰性，需要在特定條件、使用特定設備才能操作[12,13]。3.碎片感染法：類器官的碎片感染法也稱傳代感染法，是在傳將類器官分解成碎片，并將其與細菌、細菌產物或常使用的一種方法[14]。但由于此種感染方法需要在碎片時將微生物加入并進行孵育，孵育時間的長短、每個類器官碎量均不可控，需要不斷進行摸索。目前，已有采用此種方法進行CT感染輸卵管上皮細胞類器官或子宮內膜類器官的研究4.極性反轉感染法：類器官的極性反轉法是通過去除類器官培養過程的進行直接感染。這種方法確保了適當的上皮屏障完但并非所有類型的類器官均能在懸浮培養時成功反類器官結構、類器官大小、反轉時間等有關，反轉條件的摸索，并且在沒有基質膠存在的官易出現粘連聚堆現象，會影響后續觀察和操作[19,20]。養使類器官線性化和平面化，犧牲了類器官和操作，也更容易標準化和高通量化[21]。interface,ALI)培養系統中，進行氣液交互培養的方法已逐步應用于呼加培養基，上層與空氣接觸，網狀結構允許下ALI培養。ALI培養方法為某些細胞類型提供了類生理環境，可以誘導類器官中細胞的極性朝向空氣層，并誘導纖毛細增加了后續免疫熒光及免疫組化操作的復雜性。國內學者Tian等[23]結可高度再現子宮內膜的解剖結構、細胞組成、激素誘導的月經周期變化、基因表達譜和動態纖毛，已用于子宮內膜感染和胚胎著床的研究[24]。6.類器官芯片感染法：在過去10年，組織工程、生物制造和微流體技術通過結合三維培養的類器官，構成類器官芯片模擬體內微生物的動態感染過程，可開發出更真實的體外模型[8,25,26,27]。Mahajan等[281開發了一種“陰道芯片”模型，該模型是一個復制人陰道黏膜的動態培養系統，內桿菌成功黏附并植入陰道類器官中，乳桿菌產生D-乳酸、L-乳酸，下調了培養基的pH值和促炎癥細胞因子水平；相反使培養基pH值升高，并增加了促炎癥細胞因子的分泌，最終導致陰道類然較少。應用類器官技術，將微生物與生殖管卵巢膿腫。早在2015年，有學者報告了從輸卵管組織中成功建立輸卵官含有纖毛細胞和具有分泌功能的分泌細胞，且持續生長和分化[29]。卵管傘端組織中輸卵管上皮干細胞比例更高有關[30]。美國學者采用輸染過程，并分析249個炎癥基因的表達譜，結果發現，兩種細菌具有完全不同的炎癥反應，趨化因子19家族在陰道阿托波菌感染的輸卵管類器官中高度上調；流式細胞儀檢測顯示，免疫細胞在感染明觀察到的炎癥反應是由輸卵管類器官中的上皮細胞產生的[31]。2019年，文獻報道應用輸卵管類器官建立了CT長期慢性感染模型，CT病原體可以在類器官中存活80d余，感染后導致纖輸卵管類器官中纖毛細胞減少，激活了與輸卵管發育和炎癥相關的白血病inhibitoryfactor,LIF)信號通路，引發強烈的免疫反應，使白細胞介素17受體B(interleukin17receptorB)、CC型趨化因子受體7(CCmotifchemokinereceptor7,CCR7)和殺傷細胞凝集素樣受體F1(killercelllectin-likereceptorF1,KLRF1)表達增加，且CT感染增加了DNA的甲基化，加速了細胞衰老[32]。另有研究同樣探究CT持續性感染輸卵管類器官的機制，結果發現，CT持續性感染的究認為，IFN-γ通過吲哚胺-2,3-雙加氧酶激活L-色氨酸的分解代謝和耗因子1(signaltransducerandactivatoroftranscription1,STAT1)基因可以逆轉IFN-γ誘導的CT持續性感染[33】。輸卵管類器官內含多種細胞且可長期傳代培養，培養的細胞類型單一以及輸卵管上皮細胞難器官中上皮細胞存在極性，與體內高度相似，的研究認為，子宮腔內微生物群以乳桿菌、鏈球菌科和雙歧桿菌科為主，但豐度極低[34]。CT、生殖支原體上行感染可導致慢性子宮內膜炎，影不僅可以從正常及子宮畸形患者(如MRKH綜合征)子宮內膜組織中分子宮內膜類器官內各類型上皮細胞頂端緊密鼠子宮內膜類器官進行CT感染研究發現，CT可聚集在類器官上皮細胞的細胞質內，且經歷完整的網狀體(reticulatebody,RB)向原體(elementarybody,EB)轉變的發育周期，CT在細胞內生態位的成功建立依賴于細菌Ⅲ型效應蛋白[38]。另有研究應用高分辨和延時顯微技術，觀察CT從侵入類器官到排出的整個過程，證實CT感染可導致細胞骨架重組、細胞間連接的破壞以及細胞器如高爾基體的重組；通過CT感染的子宮內膜類器官與骨髓來源的原代中性粒細胞共培養，觀察到子宮內膜類器官對中性粒細胞的募集以及(chlamydiaproteaseactivityfactor,CPAF)和易位早期磷酸化蛋白 (translocatedearlyphosphorprotein,TepP)等效應因子限制中性粒細胞向感染的類器官的募集以及對CT的清除[39]。更深入的研究發TepP在感染早期將表皮生長因子受體通路底物8(epidermalgrowth靶點的藥物開發可能作為CT感染后子宮內膜上皮修復的途徑之一[40]。細菌性陰道病相關細菌以及淋病奈瑟菌等的感染可導致急性子宮內膜炎，使內膜功能受損，使用旋轉生物發生器可將結構(并非類器官)細胞形態與增殖期的人子宮內膜組織中的非纖毛細胞的形態相似，在相鄰細胞之間和頂端細胞表面觀察到分泌物質和沉積物。觀察到大多數的細菌定植于細胞團的縫隙中，作用，僅感染淋病奈瑟菌顯著誘導促炎癥反速地聚合與解聚合，參與細菌的自然轉化、蹭動實了pilT基因和IV型菌毛在淋病奈瑟菌感染中的重要作用[41]。淋病奈嚴重后遺癥的原因之一。乳頭狀瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)易感區，也是子宮頸癌子宮頸鱗柱交界的體外模型。2020年，有團隊首次報道了使用正常子宮頸組織構建出的主要由鱗狀細胞構成的子宮散的產黏蛋白的柱狀細胞群[42]。2021年，著名的HansClevers團隊研發出了一種長期培養復層鱗狀上皮的子宮頸類器官和單層柱狀上皮的子宮頸類器官的培養方案，兩種類器官均可征[43]。使用子宮頸癌或癌前病變組織構建的類器官具有與原疾病相似的特征，均保留了致病的HPV病毒基因組，此外，子宮頸癌及癌前病變類器官可模擬HPV的感染，為HPV感染與子宮頸癌的研究提供了重要的基礎模型。有研究對感染HPV16與未感染HPV16的子宮頸類器官進行單細胞RNA測序，發現了上皮特異性轉錄因子ELF3/ESE-1過表達的隱可能具有促進癌變的作用[44]。子宮頸黏膜不斷面臨多種病原微生物的合并國學者于2022年報道了使用行子宮切除術的良性婦科疾病患者來源的子宮頸鱗柱交界處組織構建的子宮頸類器官hCEcto,系統地模擬了HPV和CT的單獨和共感染的動力學特征，通過HPV感染類器官引入HPVE6E7癌基因模擬HPV16整合，構建出hCEctoE6E7,發現感染的hCEctoE6E7類器官在保留自我更新能力的同時，也表現出子宮頸癌前類器官形成能力更強，高表達細胞增殖相關核抗原Ki-67,低表達上皮分子鈣黏蛋白1(cadherin1);應用hCEctoE6E7類器官進行與CT的共感染，發現HPVE6E7抑制了CT的胞內發育，且CT顯示出再感染能力的喪失，同時抑制RB向EB的再分化，從而導致CT發育周期的減慢[45]。類器官可以支持HPV和CT全生命周期的活動，為多重感染研究創造出獨特的細胞微環境，為研究子宮頸多種病原體感染創造了條件。應用陰道組織作為細胞來源構建類器官，極易出陰道上皮細胞增殖活性較弱，陰道類器官生長緩慢，導致陰道類在2010年，有團隊采用人陰道上皮細胞系結合旋轉生物反應器，構建出一種三維細胞團結構，該細胞團具有微絨毛、緊密連接，且具有黏蛋白、糖蛋白分泌功能，受Toll樣受體(TLR)相關激動劑刺激后可產生白細胞介素(interleukin,IL)6、IL-8、IFN-y、CXC型趨化因子配體10(CXCL10)等細胞因子，說明其對微生物感染可能具有免疫應答[46]。2020年，Ali等[47】首次發表了使用小鼠陰道這些基底細胞增加了類器官的形成效率；且軸蛋白Axin2+的細胞為陰道陰道微生物或化學物質如何與陰道上皮細胞相互作用，以及陰道疾機制提供了有力的研究工具。最近，張莉等[481報道了從大鼠陰道組織中構建出對雌激素和孕激素具有反應性的大鼠陰道類器官，角蛋白5/8、角蛋白15、Ki-67和p63等陰道上皮標志物的表達與原始陰道上皮組織陰道上皮細胞是HSV入侵的常見門戶，了解HSV在陰道上皮的復制動態及其引起的免疫應答對改進抗病毒治療和疫苗至道上皮類器官(vaginalepithelialorganoid)和CD?+T淋巴細胞共培Tcells,TRM),體外TRM表型和轉錄特征與體內陰道上皮TRM相似；HSV病毒分子機制以及探索陰道上皮對病原體的免疫防御機制