質量中心-中創檢測部一、 微生物實驗要求二、 車間空凈涂抹基礎知識實驗室基本要求微生物質量控制0102一、微生物實驗要求

微生物實驗要求五要素

人機料法環缺一不可！

微生物實驗要求五要素—人 基本要求堅持原則、實事求是、用數據說話、追根溯源、問題敏感能力達標無檢測障礙（色弱、色盲）；崗前培訓；獨立操作的能力；處理異常情況的能力——授權上崗無菌操作操作前將操作空間中的細菌和病毒等微生物殺滅；操作過程中保證操作空間與外界隔離，避免微生物的侵入。目標菌非目標菌殺死污染

微生物實驗要求五要素—人 實驗前加熱溶解培養基時佩戴防護面罩及防燙手套電爐旁40cm內禁止放置酒精及酒精棉等易燃物質紫外滅菌時禁止進入紫外區域，紫外滅菌后至少等待30min方可進入滅菌區域開展實驗工作實驗中（1）酒精燈體積應在1/4-2/3范圍內火焰旁操作時鎖緊袖口，注意操作，防止意外點燃關閉酒精燈時，應重復蓋兩次，確保燈完全滅掉實驗后菌落計數時禁止脫掉手套及口罩。如果有霉菌被培養出，禁止在生物安全柜以外打開培養皿，待培養物高壓滅菌后再清洗培養基內有菌落生長時，經過高壓滅菌處理后再清洗，防止污染安全指南萬一灑出的酒精在燈外燃燒，不要慌張，可用濕抹布撲滅。

微生物實驗要求五要素—機 培養箱滿足檢測指標的溫度范圍，定期期間核查滅菌鍋定期檢定，滅菌效果的驗證（滅菌指示膠帶）電子秤/電子天平定期檢定，定期維護保養潔凈工作臺（生物安全柜）潔凈度百級，沉降菌符合要求（≦1CFU/皿）檢定校準三色標識對實驗結果有影響的儀器

機—滅菌鍋 滅菌前：1、鍋內水加到水位線，確保水位（超過電加熱器30—40mm）2、對不同類型，不同滅菌要求的物品，勿放在一起滅菌3、集氣瓶內的水位不宜過高，需浸沒排氣管壓力開始上升之前確保滅菌時： 排氣管的正常排氣！1、滅菌時，待滅菌物品置于不銹鋼滅菌籃中2、壓力蒸汽滅菌器運行期間不得強行開啟容器蓋和放氣閥滅菌后：1、壓力蒸汽滅菌器運行結束時，壓力表指示歸零，溫度至少在80℃以下，開啟容器蓋2、滅菌結束后，操作者佩戴防護面罩及防燙手套，從滅菌鍋內取出滅菌物品

機—水浴鍋 放水閥關閉放水閥門，將水浴鍋內注入純水至適當深度，淹沒加熱板（1/2-2/3），水浴鍋應安放在水平的臺面上不要將水濺到電器盒里，以免引起漏電，損壞電器部件水箱內要保持清潔，定期刷洗，水要經常更換。如長時間不用，應將水排盡，以免生銹4.使用完畢后關閉加熱器，切忌干燒！（關閉開關，拔掉插頭）

機—移液器 吸液：向下按到第一停點，再將吸頭垂直浸入液面2-3mm，緩慢平穩松開按鈕，吸上液體放液：將吸液嘴貼到容器內壁并保持20℃-40℃傾斜，平穩地把按鈕壓到第一停點，繼續按壓到第二停點，排出殘余液體長時間不使用，需把移液槍的量程調至最大值的刻度，是彈簧處于松弛狀態以保護彈簧。當移液槍吸嘴內有液體時，嚴禁將移液槍水平或倒置放置，以防液體流入活塞室腐蝕移液槍活塞。修正完畢的移液槍，需重新進行校準

微生物要求五要素—料 樣品成品原料外檢O

E

M采樣原則采樣過程

微生物要求五要素—料 樣品處理實驗室接到送檢樣品后應認真核對登記,

確保樣品的相關信息完整并符合檢驗要求實驗室應按要求盡快檢驗。若不能及時檢驗,

應采取必要的措施（

生鮮樣品冷藏保存）

,

防止樣品中原有微生物因客觀條件的干擾而發生變化各類食品樣品處理應按相關食品安全標準檢驗方法的規定執行

微生物要求五要素—法 ——依據產品標準的項目單位

1.若單位為CFU/g，則選擇GB

4789.3-2016第二法（平板計數法）。如：GB

19300-2014食品安全國家標準堅果與籽類食品；2.若單位為MPN/g，則選擇GB

4789.3-2016第一法（MPN計數法）。如：NY/T

1885-2017

綠色食品

米酒；3.若單位為MPN/100g，則選擇GB/T

4789.3-2003。如：Q/KSJ0001S-2018

果蔬脆片。產品標準依據產品標準選擇檢測標準

微生物要求五要素—環 準備區無菌區培養區觀察區用于配制培養基和樣品前處理等，有試劑柜、存放器具或材料的專柜、實驗臺、電爐、上下水道、電源等無菌室一般為4-5平方米、高2.5米的獨立小房間（與外間隔離），專用于微生物實驗室內配置各種培養箱，要求溫度較恒定；方便菌落的觀察；與其他功能區分隔開（污染區）需監控環境溫濕度，每兩周做沉降菌，沉降菌實驗符合國標（

GB/T

27405-2008）要求

拓展

四級埃博拉病毒、馬爾堡病毒、拉沙病毒二級三級一級不會引起疾病的微生物引起疾病，不構成嚴重危害，傳播風險有限，具備有效治療和預防措施的微生物引起嚴重疾病的，容易傳播的微生物。引起非常嚴重疾病的，以及我國尚未發現或者已經宣布消滅的微生物。冠狀病毒、鼠疫桿菌、結核分枝桿菌、狂犬病毒實驗室生物安全防護水平分級根據對所操作生物因子采取的防護措施，將實驗室生物安全防護水平分為一級、二級、三級和四級。中國大陸BSL-4實驗室： 湖北武漢BSL-4病毒實驗室（中國科學院武漢國家生物安全實驗室

）國家動物疫病防控高級別生物安全實驗室（中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所）實驗室基本要求微生物質量控制0102

微生物質量控制

培養基的質量控制內部質量控制外部質量控制

外部質量控制

參加能 參加實力驗證 驗室間比對

內部質量控制

空白對照方法：稀釋液空白（取1mL稀釋液放進平皿）；培養基空白（空白平皿）目的：檢驗培養基是否滅菌徹底、無菌操作是否過關等，排除其他干擾因素人員比對方法：同設備儀器、室內環境下，由兩個或多個人員先后（或同步）操作后取得的結果目的：內部比對評價檢測能力，提高檢測水平，保障檢測結果的準確性平行實驗方法：同一批樣品，以完全一致的條件（溫度、濕度、儀器、試劑，以及試驗人）進行試驗，看其結果的一致性目的：防止偶然誤差的產生

培養基的質量控制

保存在陰涼干燥處，避免陽光直射；開瓶在瓶身標注開啟日期；開瓶后注意防潮（專門的柜子；除濕機）；在有效期或6個月內用完。貯存購買值得信賴的品牌，如海博、環凱、國藥等購置制備加貼標識，標日期現配現用（

VRBA煮沸滅菌，

孟加拉紅見光易分解）滅菌以后培養基應該迅速冷卻至所需溫度，避免長時間保存在滅菌鍋內，造成過度滅菌，影響培養基的營養成分或選擇性效果；

培養基的質量控制—培養基驗收

培養基的質量控制—培養基驗收 相關概念環境的監控設備工器具與手的監控整改措施相關文件、記錄二、車間空凈涂抹基礎知識目的監控生產過程中微生物，以達到規定標準，保障生產產品的質量。01020304范圍適用于生產車間空氣、操作人員手部、與食品有直接接觸面的檢測。職責車間人員負責計劃開展、采樣及送檢。檢測室負責檢測及結果反饋。生產相關人員根據（不合格）結果進行整改。原則監控頻率：原則上涂抹須覆蓋每條生產線；空凈個數依據車間面積大小而定。檢測頻率為每周1次或根據實際情況增加頻次。相關概念設備工器具與手的監控0103整改措施相關文件、記錄0405環境的監控02相關概念環境的監控B采樣時間：正常生產狀態下隨機采樣C采樣方法：面積≤30m2時，對角線上取里、中、外3點，兩端距墻1

m處各取1點；>30m2時，取東、西、南、北、中5點，周圍4點距墻1

m各取1點

。A物資準備：按要求配置平板計數瓊脂（PCA），滅菌后倒好平板備用。環境的監控操作要點：打開皿蓋置采樣點(與地面垂直高80-150cm)，注意避開空調、門窗等空氣流通處，空氣中暴露15分鐘，蓋上皿蓋送檢菌落總數的檢測：36±1℃培養48±2h結果計算：空氣中菌落總數（CFU/皿）=所有培養皿菌落數總和/培養皿個數（數值<1時，結果取1；數值>1時，按四舍五入計算取整）檢測限值：空氣中菌落總數應≤30

CFU/皿環境的監控0102整改措施相關文件、記錄0405設備工器具與手的監控03相關概念

設備工器具與手的監控

涂抹稀釋液的制備：將25cm2(5×5cm)面積的試紙1張置于裝有25mL生理鹽水的螺口玻璃瓶內，滅菌后備用，此液為1:1稀釋液采樣方案：

設備工器具與手的監控

涂抹位置采樣時間采樣方法送檢設備工器具①鏟子、設備、稱等，正常生產狀態下隨機采樣②毛巾、原料桶、工服等，消毒后消毒處理的鑷子→取出25cm2無菌規格紙，貼在待測部位→取下放回玻璃瓶內。采樣后必須盡快進行檢測，送檢時間不得超過6h。手部員工操作過程中消毒處理的鑷子→取出25cm2無菌規格紙，于手指曲面來回涂擦整只手（被檢人五指并攏）→取下放回玻璃瓶內。結果處理：涂抹位置檢測指標單位結果計算限值設備工器具菌落總數CFU/cm2平皿上菌落的平均數×樣液稀釋倍數1≤20CFU/cm2大腸菌群CFU/cm2平皿上菌落數×（陽性管數/證實管數）×樣液稀釋倍數1<1

CFU/cm2手部菌落總數CFU/只手平皿上菌落的平均數×樣液稀釋倍數1×樣液體積（25）≤300

CFU/只手大腸菌群CFU/只手平皿上菌落數×（陽性管數/證實管數）×樣液稀釋倍數1×樣液體積（25）<1

CFU/只手

設備工器具與手的監控

（結果按四舍五入計算取整）環境的監控0102設備工器具與手的監控相關文件、記錄0305整改措施04相關概念設備工器具設備工器具的定期清每2小時更換（消毒）操作器具環境加大車間衛生清潔力度洗消毒，且清潔到位，

與頻次，清除衛生死角，并注意防蟲防鼠，適當的通風保持干燥結果根據場人排查

整改措施

加管半查處理檢測結果進行車間現、機、料、環等因素改善。原料 人員強原料端的監

注意個人衛生，個人監控（原材料、

防護，規范操作，人成品的進廠檢

員清潔消毒措施到位和工序檢驗）車間的消毒廠區、生產車間周圍等定期用75%酒精擦拭、84消毒液浸泡、紫外線殺菌等空氣用紫外線或臭氧滅菌環境小件設備器具：用80-100ppm二氧化氯或有效氯溶液浸泡20-30min。大件設備器具：用150-200ppm二氧化氯或有效氯溶液擦拭。設備洗手池：進車間用50-80ppm的二氧化氯溶液或有效氯溶液洗手，時間1min，然后清洗。

直接接觸物料的工作人員：操作期間每隔0.5-1小時，手部清洗擦干后用75%的乙醇消毒1次。人員手部環境的監控0102設備工器具與手的監控整改措施0304相關文件、記錄05相關概念

相關文件

《GB/T

27405-2008

實驗室質量控制規范

食品微生物檢測》《SB/T10514