pcr實驗考試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應的主要成分不包括（）A.模板DNAB.dNTPC.RNA聚合酶D.引物答案：C2.PCR反應中，變性溫度一般為（）A.94-95℃B.72℃C.55-60℃D.37℃答案：A3.以下哪種物質可以提高PCR反應的特異性（）A.Mg2?B.甜菜堿C.DMSOD.以上都可以答案：D4.PCR反應中引物的長度一般為（）A.5-10個核苷酸B.15-30個核苷酸C.50-100個核苷酸D.100-200個核苷酸答案：B5.在PCR反應中，延伸時間主要取決于（）A.模板長度B.引物長度C.酶的活性D.dNTP濃度答案：A6.以下哪種PCR技術可以用于定量分析（）A.普通PCRB.實時熒光定量PCRC.巢式PCRD.反向PCR答案：B7.PCR反應中，退火溫度與引物的（）有關。A.長度和GC含量B.濃度C.純度D.合成方法答案：A8.PCR反應體系中，Mg2?的作用是（）A.激活Taq酶B.提供反應的緩沖環境C.作為模板D.提供能量答案：A9.以下關于PCR引物設計的說法錯誤的是（）A.引物自身不能有互補序列B.引物之間不能有互補序列C.引物的3′端可以隨意設計D.引物的GC含量應在40%-60%答案：C10.下列哪項不是影響PCR反應的因素（）A.反應體系的pH值B.反應容器的顏色C.循環次數D.模板純度答案：B二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應的特點包括（）A.特異性強B.靈敏度高C.簡便快捷D.對模板要求低答案：ABC2.以下哪些是PCR反應中常用的酶（）A.TaqDNA聚合酶B.PfuDNA聚合酶C.反轉錄酶D.限制性內切酶答案：AB3.在設計PCR引物時，需要考慮的因素有（）A.引物長度B.引物的GC含量C.引物的特異性D.引物的溶解性答案：ABC4.PCR反應中，可能出現的問題有（）A.無擴增產物B.非特異性擴增C.擴增產物量少D.引物二聚體形成答案：ABCD5.以下屬于PCR衍生技術的有（）A.巢式PCRB.多重PCRC.反向PCRD.原位PCR答案：ABCD6.PCR反應體系中的緩沖液的作用有（）A.提供合適的pH值B.提供離子強度C.穩定酶的活性D.作為反應底物答案：ABC7.以下哪些因素會影響PCR反應中引物的退火溫度（）A.引物長度B.引物的GC含量C.反應體系中的離子濃度D.模板的濃度答案：ABC8.下列關于TaqDNA聚合酶的說法正確的是（）A.具有5′→3′聚合酶活性B.具有3′→5′外切酶活性C.熱穩定性好D.最適反應溫度為72℃答案：ACD9.在PCR實驗中，為了防止污染需要采取的措施有（）A.試劑分區使用B.實驗空間定期消毒C.使用帶濾芯的槍頭D.不同樣本分別操作答案：ABCD10.以下關于實時熒光定量PCR的描述正確的是（）A.可以對起始模板進行定量分析B.有非特異性熒光標記法和特異性熒光標記法C.常用的熒光染料有SYBRGreenID.檢測靈敏度高答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應可以無限循環，產物量會持續增加。（）答案：錯誤2.引物的3′端與模板的互補性對于PCR反應的特異性非常重要。（）答案：正確3.在PCR反應中，所有的DNA聚合酶都可以用于擴增。（）答案：錯誤4.實時熒光定量PCR只能用于絕對定量，不能用于相對定量。（）答案：錯誤5.PCR反應中，模板DNA的純度越高越好，不存在過量的問題。（）答案：錯誤6.退火溫度越高，PCR反應的特異性就越高。（）答案：錯誤7.巢式PCR是通過兩次PCR反應來提高特異性和靈敏度的。（）答案：正確8.在PCR反應體系中，dNTP的濃度越高，反應效果越好。（）答案：錯誤9.PfuDNA聚合酶比TaqDNA聚合酶具有更高的保真性。（）答案：正確10.引物二聚體的形成會影響PCR反應的正常進行。（）答案：正確四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應的基本原理。答案：PCR反應是一種體外擴增特定DNA片段的技術。以DNA為模板，在高溫下使模板DNA變性解鏈為單鏈，然后降低溫度使引物與模板鏈特異性退火結合，再在適宜溫度下由DNA聚合酶以dNTP為原料從引物的3′端延伸合成新的DNA鏈，經過多次循環（變性-退火-延伸），使目的DNA片段得到大量擴增。2.說明PCR反應中引物設計的基本原則。答案：引物長度一般為15-30個核苷酸；GC含量在40%-60%；引物自身不能有互補序列以避免形成發夾結構；引物之間不能有互補序列防止引物二聚體形成；引物的3′端要與模板嚴格互補，5′端可添加酶切位點等修飾。3.簡述實時熒光定量PCR的定量原理。答案：實時熒光定量PCR通過在PCR反應體系中加入熒光基團，在PCR反應過程中實時監測熒光信號的變化。根據熒光信號與PCR產物量成正比的關系，利用已知濃度的標準品制作標準曲線，從而對未知樣本中的起始模板量進行定量，分為絕對定量和相對定量。4.列出PCR反應中可能出現非特異性擴增的原因。答案：引物設計不合理，如引物特異性差、引物長度或GC含量不合適；退火溫度過低；模板純度低含有雜質；Mg2?濃度不合適；循環次數過多等。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論如何提高PCR反應的特異性。答案：選擇特異性好的引物，合理設計引物長度和GC含量等；優化退火溫度，可通過梯度PCR確定最佳退火溫度；提高模板純度；控制Mg2?濃度；選擇合適的DNA聚合酶如高保真酶；減少循環次數等。2.闡述PCR反應在醫學領域的應用。答案：疾病診斷，如病原體檢測；基因分型；遺傳性疾病的診斷；腫瘤相關基因檢測；藥物研發中的基因表達分析等。3.分析在PCR實驗中如何防止污染。答案：物理隔離，試劑和樣本分區操作；使用一次性耗材如帶濾芯槍頭；實驗空間和儀器定期消毒