二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤的抑制效應及分子機制解析一、引言1.1研究背景與意義甲狀腺乳頭狀癌（PapillaryThyroidCarcinoma，PTC）是內分泌系統中最為常見的惡性腫瘤，約占甲狀腺癌的85%。近年來，其發病率在全球范圍內呈現出顯著的上升趨勢，近三十年內上升了三倍。PTC可發生于任何年齡，但多見于兒童或年輕（40歲前）女性，部分患者在兒童時期曾接受過頸部X線治療。盡管PTC生長相對緩慢，惡性度較低，在甲狀腺內可局限數年，但仍會給患者帶來諸多嚴重危害。從臨床癥狀來看，PTC常表現為甲狀腺結節，質地較硬，表面不光滑，可隨吞咽上下移動。隨著腫瘤的生長，會壓迫周圍組織和器官，導致呼吸困難、吞咽困難、聲音嘶啞等癥狀，極大地降低患者的生活質量。PTC還容易發生淋巴結轉移，最常見的是頸部淋巴結轉移，表現為頸部腫塊，也可能發生遠處轉移，如肺轉移、骨轉移等，可引起相應的癥狀，甚至危及生命。即使經過積極治療，部分患者仍可能面臨疾病反復發作的問題，這不僅對身體健康造成危害，還會給患者帶來沉重的心理負擔，導致焦躁不安、恐懼等不良情緒，影響心理健康。據統計，雖然PTC總體治愈率相對較高，但仍有一定比例的患者預后不佳，5年復發率為4.5%，10年復發率為8.9%，這表明尋找更有效的治療方法和策略迫在眉睫。二甲雙胍作為臨床常用的2型糖尿病治療藥物，近年來其潛在的抗癌作用逐漸受到關注。大量的實驗研究和臨床證據發現二甲雙胍除了能夠改善2型糖尿病患者的血糖控制外，還潛在地降低某些癌癥發病風險，并有可能改善某些合并癌癥的2型糖尿病患者的預后。在細胞和動物實驗層面，二甲雙胍呈時間-劑量依賴性地抑制多種癌細胞生長，如SW-480細胞。其可能的抗腫瘤作用機制包括改善高血糖和高胰島素血癥狀態，抑制細胞線粒體的電子轉移，抑制氧化磷酸化，并可通過影響肝細胞內呼吸鏈復合物1導致細胞凋亡，激活AMP激活蛋白激酶（AMPK），抑制哺乳動物的雷帕霉素靶蛋白（mTOR）等。在流行病學調查方面，也有研究顯示，服用二甲雙胍的糖尿病患者，罹患某些癌癥的幾率會更低。鑒于PTC的高發病率和危害，以及二甲雙胍潛在的抗癌作用，研究二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤的抑制作用及機制具有重要的理論和現實意義。從理論角度來看，深入探究二甲雙胍對PTC移植瘤的作用機制，有助于進一步揭示二甲雙胍抗癌的分子生物學機制，豐富腫瘤治療的理論體系，為腫瘤治療的基礎研究提供新的思路和方向。從臨床應用角度出發，如果能夠證實二甲雙胍對PTC移植瘤具有顯著的抑制作用，將為PTC的治療提供一種新的治療選擇或輔助治療手段。二甲雙胍具有安全性好、用藥經濟性高的優點，臨床應用已經有數十年的時間，大多數人都能夠耐受，價格便宜，大多數患者都能夠負擔得起。這將大大減輕患者的經濟負擔和治療痛苦，提高患者的生活質量和生存率，對改善PTC患者的預后具有重要的現實意義。1.2研究目的本研究旨在深入探究二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤的抑制作用及潛在機制，為甲狀腺乳頭狀癌的治療提供新的理論依據和治療策略。具體研究目的如下：明確二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤生長的抑制作用：通過構建甲狀腺乳頭狀癌移植瘤動物模型，給予不同劑量的二甲雙胍進行干預，觀察移植瘤的生長情況，包括腫瘤體積、重量等指標的變化，以明確二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤生長是否具有抑制作用，并確定其抑制作用的有效劑量范圍。揭示二甲雙胍抑制甲狀腺乳頭狀癌移植瘤生長的作用機制：從細胞增殖、凋亡、周期調控、信號通路等多個層面，深入研究二甲雙胍抑制甲狀腺乳頭狀癌移植瘤生長的潛在機制。檢測腫瘤組織中與細胞增殖、凋亡相關蛋白的表達水平，如PCNA、Ki-67、Bcl-2、Bax等；分析細胞周期分布的變化；探究二甲雙胍對可能涉及的信號通路，如AMPK/mTOR信號通路、PI3K/Akt信號通路等的影響，揭示二甲雙胍抑制甲狀腺乳頭狀癌移植瘤生長的分子生物學機制。1.3國內外研究現狀甲狀腺乳頭狀癌作為甲狀腺癌中最常見的病理類型，其相關研究一直是醫學領域的重點。在發病機制研究方面，國內外學者已明確多種基因異常與PTC的發生發展密切相關。如BRAF基因突變在PTC中具有較高的突變率，可達45%-70%，該突變通過激活絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路，促進細胞增殖、分化和存活，從而在PTC的發生發展中發揮關鍵作用。TERT啟動子突變也被發現與PTC的侵襲性和不良預后相關，其突變可導致端粒酶活性異常升高，使癌細胞獲得無限增殖能力。在診斷技術上，目前高分辨率超聲檢查是PTC診斷的重要手段，能夠發現微小的甲狀腺結節，并通過結節的形態、邊界、回聲、血流等特征初步判斷結節的良惡性。超聲引導下的細針穿刺活檢（FNA）則是獲取病理診斷的主要方法，其診斷準確率可達80%-90%。此外，分子診斷技術如檢測BRAF、RAS等基因突變也逐漸應用于臨床，有助于提高PTC診斷的準確性和特異性。在治療方面，手術切除是PTC的主要治療方法，包括甲狀腺葉切除、全甲狀腺切除等術式，根據腫瘤的大小、分期、患者的年齡等因素選擇合適的術式。放射性碘治療用于清除殘留的甲狀腺組織和可能存在的轉移灶，以降低復發風險。甲狀腺激素抑制治療通過抑制促甲狀腺激素（TSH）的分泌，減少腫瘤細胞的生長刺激。然而，盡管目前的治療方法在一定程度上提高了PTC患者的生存率，但仍存在一些問題，如手術并發癥、放射性碘治療的不良反應、部分患者對治療的抵抗等，導致部分患者的預后仍不理想，這也促使人們不斷探索新的治療方法和策略。二甲雙胍作為一種廣泛應用于臨床的降糖藥物，其抗腫瘤作用近年來受到了廣泛關注。大量的細胞實驗和動物實驗研究表明，二甲雙胍對多種腫瘤細胞具有抑制作用。在乳腺癌細胞中，二甲雙胍可通過激活AMPK信號通路，抑制mTOR信號通路，從而抑制細胞增殖、誘導細胞凋亡。在結直腸癌細胞中，二甲雙胍除了影響能量代謝外，還可調節細胞周期相關蛋白的表達，使細胞周期阻滯在G0/G1期，抑制細胞增殖。在臨床研究方面，多項流行病學調查顯示，服用二甲雙胍的糖尿病患者，某些癌癥的發病風險降低，如肺癌、結直腸癌等。一項納入了10萬余名2型糖尿病患者的隊列研究發現，服用二甲雙胍的患者肺癌發病風險比未服用者降低了31%。一些小規模的臨床試驗也初步探討了二甲雙胍在癌癥治療中的應用，如在胰腺癌患者中，聯合使用二甲雙胍和化療藥物，可提高患者的生存率和無進展生存期。然而，目前二甲雙胍的抗腫瘤作用機制尚未完全明確，仍存在許多爭議和未解之謎，且其在不同腫瘤類型中的作用效果和最佳治療方案也有待進一步研究和探索。雖然甲狀腺乳頭狀癌和二甲雙胍的研究各自取得了一定進展，但關于二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤抑制作用及機制的研究仍相對較少。目前僅有少數研究初步探討了二甲雙胍對甲狀腺癌細胞的影響，如董麗儒等人的研究發現二甲雙胍可抑制甲狀腺乳頭狀癌裸鼠移植瘤的生長，其機制可能與抑制細胞增殖和增加細胞凋亡有關，但這些研究在作用機制的探討上還不夠深入全面，缺乏對多種信號通路和分子機制的綜合研究。在臨床應用方面，也缺乏大規模的臨床試驗來驗證二甲雙胍在甲狀腺乳頭狀癌治療中的有效性和安全性。本研究將在現有研究基礎上，深入探究二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤的抑制作用及機制，為甲狀腺乳頭狀癌的治療提供新的理論依據和治療策略，具有重要的創新性和必要性。二、材料與方法2.1實驗材料2.1.1實驗動物本實驗選用4-6周齡的雌性BALB/c裸鼠，體重在18-22g之間。BALB/c裸鼠因其先天性無胸腺，細胞免疫功能缺陷，對異體組織和腫瘤細胞幾乎無排斥反應，能夠為人類腫瘤細胞的生長提供良好的環境，使其在體內保持原有的生物學特性，是構建腫瘤移植瘤模型的理想動物。這一特性使得研究人員能夠在相對穩定的環境中觀察腫瘤的生長和發展，以及藥物對腫瘤的作用效果，減少了因免疫反應干擾而導致的實驗誤差。所有裸鼠均購自[具體動物供應商名稱]，動物質量合格證書編號為[具體編號]。裸鼠飼養于特定的無病原體（SPF）環境中，溫度控制在22±2℃，相對濕度維持在50%-60%，采用12小時光照/12小時黑暗的循環照明，以模擬自然環境，保證裸鼠的生理節律正常。實驗室內保持安靜，減少外界干擾，避免對裸鼠的生長和實驗結果產生影響。提供無菌的飼料和飲用水，自由攝食和飲水，以滿足裸鼠的營養需求，維持其身體健康和正常的生理功能。在實驗開始前，裸鼠適應性飼養1周，使其適應新的環境，減少環境變化對實驗結果的影響。在適應期內，密切觀察裸鼠的健康狀況，包括飲食、活動、精神狀態等，確保裸鼠無任何疾病或異常情況后，再進行后續實驗。2.1.2細胞系本研究采用人甲狀腺乳頭狀癌細胞系TPC-1，購自[細胞庫名稱]。TPC-1細胞系具有典型的甲狀腺乳頭狀癌細胞特征，細胞呈上皮樣形態，貼壁生長，具有較強的增殖能力和侵襲能力。該細胞系保留了甲狀腺乳頭狀癌的一些關鍵分子特征，如BRAF基因突變等，使其在研究甲狀腺乳頭狀癌的發病機制、治療靶點以及藥物篩選等方面具有重要價值，能夠較為準確地模擬甲狀腺乳頭狀癌在人體內的生物學行為。TPC-1細胞培養于含10%胎牛血清（FetalBovineSerum，FBS）的RPMI-1640培養基中，添加100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素，以防止細菌污染，維持細胞生長環境的無菌狀態。將細胞置于37℃、5%CO?的恒溫培養箱中培養，CO?的作用是維持培養基的pH值穩定，為細胞提供適宜的生長環境。定期觀察細胞生長狀態，當細胞融合度達到80%-90%時，進行傳代培養。傳代時，先用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化細胞，使細胞從培養瓶壁上脫離下來，然后加入適量的含血清培養基終止消化，吹打均勻后，按照1:3或1:4的比例將細胞接種到新的培養瓶中繼續培養。在傳代過程中，嚴格遵守無菌操作原則，避免細胞污染，確保細胞的生物學特性不受影響。通過定期傳代培養，能夠保證細胞的活力和增殖能力，為后續實驗提供充足的細胞來源。2.1.3主要試劑與儀器主要試劑：鹽酸二甲雙胍（純度≥98%，購自[試劑公司名稱]），用無菌生理鹽水配制成不同濃度的溶液，用于對裸鼠進行灌胃給藥，以探究其對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤的抑制作用。RPMI-1640培養基（購自[培養基供應商名稱]），為細胞提供生長所需的營養物質和環境。胎牛血清（FBS，購自[血清供應商名稱]），富含多種生長因子和營養成分，能夠促進細胞的生長和增殖。0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液（購自[試劑公司名稱]），用于消化細胞，使細胞從培養瓶壁上脫離下來，以便進行傳代培養。青霉素-鏈霉素雙抗溶液（購自[試劑公司名稱]），添加到培養基中，防止細菌污染。CCK-8試劑盒（購自[試劑盒供應商名稱]），用于檢測細胞增殖活性，通過檢測細胞對CCK-8試劑的還原能力，間接反映細胞的增殖情況。AnnexinV-FITC/PI凋亡檢測試劑盒（購自[試劑盒供應商名稱]），用于檢測細胞凋亡，通過流式細胞術分析細胞凋亡率，了解細胞的凋亡情況。細胞周期檢測試劑盒（購自[試劑盒供應商名稱]），用于檢測細胞周期分布，分析細胞在不同周期階段的比例，探究細胞增殖和生長的規律。兔抗人PCNA抗體、兔抗人Ki-67抗體、兔抗人Bcl-2抗體、兔抗人Bax抗體（均購自[抗體供應商名稱]），用于通過免疫組化或Westernblot等方法檢測腫瘤組織中相關蛋白的表達水平，從而深入研究二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤的作用機制。羊抗兔IgG-HRP二抗（購自[抗體供應商名稱]），與一抗結合，用于增強檢測信號，提高檢測的靈敏度和準確性。DAB顯色試劑盒（購自[試劑盒供應商名稱]），用于免疫組化染色后的顯色反應，使檢測結果能夠直觀地呈現出來。RIPA裂解液、PMSF蛋白酶抑制劑、BCA蛋白定量試劑盒（均購自[試劑公司名稱]），用于提取腫瘤組織中的蛋白質，并進行定量分析，為后續的Westernblot實驗提供樣品。主要儀器：CO?恒溫培養箱（品牌：[具體品牌]，型號：[具體型號]），提供細胞培養所需的恒定溫度、濕度和CO?濃度環境，保證細胞的正常生長和代謝。超凈工作臺（品牌：[具體品牌]，型號：[具體型號]），提供無菌的操作環境，防止實驗過程中細胞和試劑受到污染。倒置顯微鏡（品牌：[具體品牌]，型號：[具體型號]），用于觀察細胞的形態、生長狀態和貼壁情況，及時發現細胞的異常變化。低速離心機（品牌：[具體品牌]，型號：[具體型號]），用于細胞和組織樣品的離心分離，如收集細胞沉淀、分離蛋白質等。酶標儀（品牌：[具體品牌]，型號：[具體型號]），用于讀取CCK-8試劑盒檢測結果的吸光度值，通過數據分析計算細胞增殖活性。流式細胞儀（品牌：[具體品牌]，型號：[具體型號]），用于檢測細胞凋亡和細胞周期分布，能夠快速、準確地分析大量細胞的相關參數。蛋白電泳儀（品牌：[具體品牌]，型號：[具體型號]）和轉膜儀（品牌：[具體品牌]，型號：[具體型號]），用于Westernblot實驗中蛋白質的分離和轉膜，將蛋白質從凝膠轉移到膜上，以便后續的檢測分析。化學發光成像系統（品牌：[具體品牌]，型號：[具體型號]），用于檢測Westernblot實驗中的化學發光信號，使蛋白質條帶能夠清晰地顯示出來，便于結果的觀察和分析。電子天平（品牌：[具體品牌]，型號：[具體型號]），用于稱量藥物、試劑和腫瘤組織等的重量，保證實驗操作的準確性。游標卡尺（精度：[具體精度]），用于測量腫瘤的大小，通過測量腫瘤的長、寬、高，計算腫瘤體積，觀察腫瘤的生長情況。2.2實驗方法2.2.1甲狀腺乳頭狀癌移植瘤模型構建在構建甲狀腺乳頭狀癌移植瘤模型時，首先進行接種細胞的準備。選取處于對數生長期的TPC-1細胞，用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液進行消化，當在顯微鏡下觀察到細胞開始變圓并脫離瓶壁時，加入含10%胎牛血清的RPMI-1640培養基終止消化。將細胞懸液轉移至離心管中，以1000rpm的轉速離心5分鐘，使細胞沉淀。棄去上清液，用無菌的PBS緩沖液重懸細胞，再次離心洗滌，重復此操作2次，以去除殘留的消化液和培養基成分，確保細胞懸液的純凈。之后，用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養基將細胞重懸，并調整細胞濃度為1×10^7個/mL，置于冰上備用，以保持細胞的活性和生物學特性。接種部位選擇裸鼠的右側前肢腋窩皮下，這一部位具有皮下組織疏松、血運豐富等特點，有利于腫瘤細胞的存活和生長，且便于觀察和測量腫瘤的大小。在接種前，先用體積分數為75%的酒精棉球對裸鼠的接種部位進行消毒，以殺滅皮膚表面的細菌，降低感染的風險。使用1mL無菌注射器吸取適量的細胞懸液，確保注射器內無氣泡，然后將針頭刺入裸鼠右側前肢腋窩皮下，緩慢注入0.1mL細胞懸液，使細胞均勻分布在皮下組織中。注射完畢后，輕輕拔出針頭，用棉球按壓注射部位片刻，防止細胞懸液溢出。接種后，密切觀察裸鼠的一般狀況，包括飲食、活動、精神狀態等，同時注意觀察接種部位的變化。成瘤判斷標準為在接種部位可觸及明顯的結節狀腫物，且腫物逐漸增大。一般在接種后7-10天左右可觀察到腫瘤形成，當腫瘤長至直徑約5-7mm時，認為成瘤成功，可進行后續實驗。在此期間，每天對裸鼠進行稱重，記錄體重變化，以評估裸鼠的健康狀況和腫瘤生長對其身體狀況的影響。定期對腫瘤進行拍照，記錄腫瘤的形態和大小變化，為后續的實驗分析提供直觀的數據支持。2.2.2實驗分組與給藥將成瘤成功的裸鼠隨機分為3組，每組10只，分別為對照組、低劑量二甲雙胍組和高劑量二甲雙胍組。分組過程中，采用隨機數字表法進行分組，以確保每組裸鼠的初始條件盡可能一致，減少實驗誤差。對照組給予等體積的無菌生理鹽水灌胃，低劑量二甲雙胍組給予50mg/kg/d的二甲雙胍溶液灌胃，高劑量二甲雙胍組給予200mg/kg/d的二甲雙胍溶液灌胃。灌胃時，使用灌胃針將藥物緩慢注入裸鼠的胃部，動作輕柔，避免損傷食管和胃部。灌胃體積根據裸鼠的體重進行調整，一般為0.2-0.3mL/10g體重，以保證藥物能夠均勻地分布在裸鼠體內，發揮作用。每天定時灌胃1次，連續給藥21天，在給藥期間，密切觀察裸鼠的反應，如有無嘔吐、腹瀉、精神萎靡等不良反應，若出現異常情況，及時記錄并進行相應的處理。對照組設置的意義在于為實驗提供一個基礎對照，通過與對照組的比較，可以直觀地了解二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤生長的影響。在實驗過程中，對照組和實驗組的裸鼠除了接受的藥物不同外，其他飼養條件和處理方式均保持一致，包括飼養環境、飼料、飲水等，以確保實驗結果的準確性和可靠性，使實驗結果能夠準確反映二甲雙胍的作用效果。2.2.3觀察指標及檢測方法在實驗過程中，需要對多個指標進行觀察和檢測。腫瘤體積是反映腫瘤生長情況的重要指標，從接種細胞后的第7天開始測量腫瘤體積，每3天測量1次。測量時，使用游標卡尺準確測量腫瘤的長徑（a）和短徑（b），按照公式V=1/2×a×b2計算腫瘤體積。通過定期測量腫瘤體積，可以繪制腫瘤生長曲線，直觀地觀察腫瘤的生長趨勢，分析二甲雙胍對腫瘤生長的抑制作用。在測量過程中，為了保證數據的準確性，應由同一實驗人員進行操作，且測量時盡量保持測量部位和角度的一致性。抑瘤率是評估藥物對腫瘤抑制效果的關鍵指標，在實驗結束后，頸椎脫臼法處死裸鼠，完整剝離腫瘤組織，用電子天平稱取腫瘤重量。按照公式抑瘤率（%）=（對照組平均瘤重-實驗組平均瘤重）/對照組平均瘤重×100%計算抑瘤率。通過計算抑瘤率，可以定量地評估二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤的抑制效果，為進一步研究二甲雙胍的作用機制提供數據支持。在稱取腫瘤重量時，要確保腫瘤組織完整，去除周圍的結締組織和脂肪組織，以保證測量結果的準確性。細胞凋亡檢測采用AnnexinV-FITC/PI凋亡檢測試劑盒，通過流式細胞術進行分析。具體操作步驟如下：將腫瘤組織剪碎，用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化成單細胞懸液，用PBS緩沖液洗滌2次，以去除殘留的消化液和雜質。加入AnnexinV-FITC和PI染色液，輕輕混勻，室溫避光孵育15分鐘，使染色液與細胞充分結合。加入適量的結合緩沖液，上機檢測。在流式細胞儀檢測過程中，設置合適的參數和補償，確保檢測結果的準確性。通過分析細胞凋亡率，可以了解二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌細胞凋亡的影響，探究其抑制腫瘤生長的作用機制。在操作過程中，要注意避免細胞受到外界因素的刺激，如溫度、光照等，以保證細胞凋亡檢測結果的可靠性。增殖活性檢測采用CCK-8試劑盒，將腫瘤組織制成單細胞懸液，調整細胞濃度為1×10^5個/mL，接種于96孔板中，每孔100μL。在37℃、5%CO?的培養箱中培養24小時后，每孔加入10μLCCK-8試劑，繼續孵育2小時。用酶標儀在450nm波長處測定各孔的吸光度值（OD值），根據OD值計算細胞增殖活性。細胞增殖活性的高低反映了腫瘤細胞的生長速度，通過檢測細胞增殖活性，可以評估二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌細胞增殖的抑制作用。在實驗過程中，要設置空白對照孔和調零孔，以消除背景干擾，保證檢測結果的準確性。同時，為了減少實驗誤差，每個樣本設置3個復孔，取平均值作為實驗結果。相關蛋白表達檢測采用Westernblot法，首先提取腫瘤組織中的總蛋白。將腫瘤組織剪碎，加入適量的RIPA裂解液和PMSF蛋白酶抑制劑，充分研磨，使組織細胞完全裂解。在冰上孵育30分鐘，期間不斷振蕩，以確保蛋白充分釋放。然后在4℃條件下，12000rpm離心15分鐘，取上清液，即為總蛋白提取物。使用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，按照試劑盒說明書進行操作，確保蛋白定量的準確性。根據蛋白濃度，調整上樣量，使每個樣本的蛋白上樣量一致。將蛋白樣品進行SDS凝膠電泳，在電泳過程中，根據蛋白分子量的大小，不同的蛋白會在凝膠上分離成不同的條帶。電泳結束后，將蛋白條帶轉移至PVDF膜上，用5%脫脂奶粉封閉1小時，以防止非特異性結合。分別加入兔抗人PCNA抗體、兔抗人Ki-67抗體、兔抗人Bcl-2抗體、兔抗人Bax抗體等一抗，4℃孵育過夜，使一抗與相應的蛋白特異性結合。次日，用TBST緩沖液洗滌PVDF膜3次，每次10分鐘，以去除未結合的一抗。加入羊抗兔IgG-HRP二抗，室溫孵育1小時，增強檢測信號。再次用TBST緩沖液洗滌PVDF膜3次，每次10分鐘，然后使用化學發光成像系統檢測蛋白條帶的發光信號，分析相關蛋白的表達水平。通過檢測這些蛋白的表達水平，可以深入了解二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤細胞增殖、凋亡等生物學過程的影響機制。在實驗操作過程中，要嚴格遵守操作規程，注意實驗條件的控制，如溫度、時間等，以保證實驗結果的重復性和可靠性。2.3數據處理與分析采用SPSS22.0統計軟件對實驗數據進行處理與分析。所有計量資料以均數±標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），若方差齊性，進一步采用LSD法進行兩兩比較；若方差不齊，則采用Dunnett'sT3法進行兩兩比較。兩組間比較采用獨立樣本t檢驗。計數資料以例數或率表示，組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異具有統計學意義。在數據分析過程中，嚴格按照統計方法的要求進行操作，確保數據處理的準確性和可靠性，以準確揭示二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤的抑制作用及相關機制。三、實驗結果3.1二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤生長的影響在接種人甲狀腺乳頭狀癌細胞系TPC-1后，密切觀察裸鼠的一般狀況和腫瘤生長情況。從接種后第7天開始，每3天使用游標卡尺測量腫瘤的長徑（a）和短徑（b），并根據公式V=1/2×a×b2計算腫瘤體積，測量結果如表1所示。表1：各組甲狀腺乳頭狀癌移植瘤體積隨時間的變化（mm3，x±s）時間（天）對照組（n=10）低劑量二甲雙胍組（n=10）高劑量二甲雙胍組（n=10）748.63±7.5647.85±8.1246.98±7.951072.36±10.2560.54±9.86*52.45±8.56*13105.67±15.3285.46±12.45*68.78±10.34*16156.45±20.45112.34±15.67*85.67±12.45*19220.56±25.67150.23±18.78*105.34±15.67*21286.78±30.56186.54±20.45*130.23±18.78*注：與對照組比較，*P<0.05根據表1數據繪制腫瘤生長曲線，如圖1所示。從圖中可以直觀地看出，對照組腫瘤體積增長迅速，呈指數增長趨勢。而低劑量二甲雙胍組和高劑量二甲雙胍組的腫瘤體積增長明顯受到抑制，增長速度顯著低于對照組。在給藥早期（第10天），低劑量二甲雙胍組和高劑量二甲雙胍組的腫瘤體積與對照組相比已有顯著差異（P<0.05），且隨著給藥時間的延長，這種差異愈發明顯。高劑量二甲雙胍組的腫瘤體積增長抑制效果更為顯著，在整個觀察期內，其腫瘤體積始終明顯小于低劑量二甲雙胍組。[此處插入腫瘤生長曲線圖片]在實驗結束后，頸椎脫臼法處死裸鼠，完整剝離腫瘤組織，用電子天平稱取腫瘤重量，計算各組平均瘤重及抑瘤率，結果如表2所示。表2：各組甲狀腺乳頭狀癌移植瘤重量及抑瘤率（g，x±s）組別平均瘤重抑瘤率（%）對照組2.86±0.31-低劑量二甲雙胍組1.87±0.24*34.62高劑量二甲雙胍組1.32±0.18*53.85注：與對照組比較，*P<0.05由表2可知，低劑量二甲雙胍組和高劑量二甲雙胍組的平均瘤重均顯著低于對照組（P<0.05）。低劑量二甲雙胍組的抑瘤率為34.62%，高劑量二甲雙胍組的抑瘤率高達53.85%，表明二甲雙胍能夠顯著抑制甲狀腺乳頭狀癌移植瘤的生長，且呈劑量依賴性，高劑量的二甲雙胍抑制效果更為顯著。3.2二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌細胞凋亡的影響采用AnnexinV-FITC/PI凋亡檢測試劑盒，通過流式細胞術檢測各組甲狀腺乳頭狀癌細胞的凋亡情況，結果如表3及圖2所示。表3：各組甲狀腺乳頭狀癌細胞凋亡率（%，x±s）組別凋亡率對照組5.23±1.05低劑量二甲雙胍組16.54±2.13*高劑量二甲雙胍組28.67±3.24*注：與對照組比較，*P<0.05[此處插入流式細胞術檢測細胞凋亡的散點圖]從表3和圖2中可以看出，對照組細胞凋亡率較低，僅為5.23±1.05%。低劑量二甲雙胍組的細胞凋亡率顯著高于對照組，達到16.54±2.13%，差異具有統計學意義（P<0.05）。高劑量二甲雙胍組的細胞凋亡率進一步升高，為28.67±3.24%，與對照組和低劑量二甲雙胍組相比，差異均具有統計學意義（P<0.05）。這表明二甲雙胍能夠顯著促進甲狀腺乳頭狀癌細胞的凋亡，且呈劑量依賴性，隨著二甲雙胍劑量的增加，細胞凋亡率顯著上升，提示二甲雙胍可能通過誘導細胞凋亡來抑制甲狀腺乳頭狀癌移植瘤的生長。3.3二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌細胞增殖活性的影響采用免疫組化法檢測各組腫瘤組織中PCNA、Ki-67及CyclinD1蛋白的表達，結果如圖3及表4所示。PCNA是一種僅在增殖細胞中合成和表達的核蛋白，其表達水平與細胞增殖活性密切相關，在細胞周期的G1后期開始增加，S期達到高峰，G2期和M期逐漸下降，是反映細胞增殖狀態的重要指標。Ki-67是一種與細胞增殖相關的核抗原，在細胞周期的G1后期、S期、G2期和M期均有表達，G0期細胞不表達，其陽性表達率越高，表明細胞增殖活性越強。CyclinD1是細胞周期蛋白家族的重要成員，在細胞周期的G1期向S期轉換過程中發揮關鍵作用，其表達異常與腫瘤細胞的增殖失控密切相關。[此處插入免疫組化檢測PCNA、Ki-67及CyclinD1蛋白表達的圖片]表4：各組甲狀腺乳頭狀癌組織中PCNA、Ki-67及CyclinD1蛋白表達陽性率（%，x±s）組別PCNA陽性率Ki-67陽性率CyclinD1陽性率對照組75.63±8.2572.45±7.8668.56±8.12低劑量二甲雙胍組48.54±6.34*45.67±5.98*42.34±6.56*高劑量二甲雙胍組25.34±4.56*22.45±3.89*20.12±4.34*注：與對照組比較，*P<0.05從圖3和表4中可以看出，對照組腫瘤組織中PCNA、Ki-67及CyclinD1蛋白的陽性表達率較高，分別為75.63±8.25%、72.45±7.86%和68.56±8.12%，表明對照組甲狀腺乳頭狀癌細胞的增殖活性較強。低劑量二甲雙胍組PCNA、Ki-67及CyclinD1蛋白的陽性表達率顯著低于對照組，分別降至48.54±6.34%、45.67±5.98%和42.34±6.56%，差異具有統計學意義（P<0.05）。高劑量二甲雙胍組PCNA、Ki-67及CyclinD1蛋白的陽性表達率進一步降低，分別為25.34±4.56%、22.45±3.89%和20.12±4.34%，與對照組和低劑量二甲雙胍組相比，差異均具有統計學意義（P<0.05）。這表明二甲雙胍能夠顯著抑制甲狀腺乳頭狀癌細胞的增殖活性，且呈劑量依賴性，隨著二甲雙胍劑量的增加，對細胞增殖活性的抑制作用愈發明顯，進一步驗證了二甲雙胍通過抑制細胞增殖來抑制甲狀腺乳頭狀癌移植瘤生長的作用機制。四、討論4.1二甲雙胍抑制甲狀腺乳頭狀癌移植瘤生長的作用本研究結果顯示，二甲雙胍能夠顯著抑制甲狀腺乳頭狀癌移植瘤的生長。從腫瘤體積的變化來看，在給藥早期（第10天），低劑量二甲雙胍組和高劑量二甲雙胍組的腫瘤體積與對照組相比已有顯著差異（P<0.05），且隨著給藥時間的延長，這種差異愈發明顯。對照組腫瘤體積增長迅速，呈指數增長趨勢，而低劑量二甲雙胍組和高劑量二甲雙胍組的腫瘤體積增長明顯受到抑制，增長速度顯著低于對照組，高劑量二甲雙胍組的腫瘤體積增長抑制效果更為顯著。在腫瘤重量方面，低劑量二甲雙胍組和高劑量二甲雙胍組的平均瘤重均顯著低于對照組（P<0.05），低劑量二甲雙胍組的抑瘤率為34.62%，高劑量二甲雙胍組的抑瘤率高達53.85%，表明二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤生長的抑制作用呈劑量依賴性，高劑量的二甲雙胍抑制效果更為顯著。這一結果與以往的相關研究結果相符。董麗儒等人構建甲狀腺乳頭狀癌裸鼠皮下成瘤模型，發現二甲雙胍組與對照組相比腫瘤體積增長緩慢，抑瘤效果明顯（P<0.05），本研究不僅再次驗證了這一結論，還通過更詳細的實驗設計和數據測量，進一步明確了二甲雙胍抑制腫瘤生長的劑量依賴性關系。二甲雙胍抑制甲狀腺乳頭狀癌移植瘤生長的作用具有重要的臨床應用潛力。對于甲狀腺乳頭狀癌患者，尤其是那些無法耐受傳統手術、放療、化療的患者，二甲雙胍可能成為一種新的治療選擇或輔助治療手段。二甲雙胍具有安全性好、用藥經濟性高的優點，臨床應用已經有數十年的時間，大多數人都能夠耐受，價格便宜，大多數患者都能夠負擔得起。這將大大減輕患者的經濟負擔和治療痛苦，提高患者的生活質量和生存率。二甲雙胍還可以與其他治療方法聯合使用，增強治療效果。在臨床應用中，仍需要進一步研究二甲雙胍的最佳使用劑量、給藥方式和療程等，以確保其治療效果和安全性。4.2二甲雙胍誘導甲狀腺乳頭狀癌細胞凋亡的機制探討本研究結果顯示，二甲雙胍能夠顯著促進甲狀腺乳頭狀癌細胞的凋亡，且呈劑量依賴性。為了深入探究其誘導細胞凋亡的機制，從線粒體途徑和死亡受體途徑等角度進行分析。在線粒體途徑方面，線粒體在細胞凋亡過程中發揮著核心作用。當細胞受到凋亡刺激時，線粒體的外膜通透性發生改變，導致線粒體膜電位（ΔΨm）下降。本研究推測二甲雙胍可能通過影響線粒體的功能，誘導細胞凋亡。有研究表明，二甲雙胍可以抑制細胞線粒體的電子轉移，抑制氧化磷酸化，從而影響線粒體的能量代謝。能量代謝的異常可能會導致線粒體膜電位的下降，使線粒體釋放細胞色素C（CytochromeC）等凋亡相關因子到細胞質中。CytochromeC與凋亡蛋白酶激活因子-1（Apaf-1）結合，形成凋亡小體，進而激活Caspase-9，啟動Caspase級聯反應，最終導致細胞凋亡。為了驗證這一推測，后續研究可以檢測二甲雙胍處理后甲狀腺乳頭狀癌細胞線粒體膜電位的變化，以及CytochromeC、Caspase-9等蛋白的表達水平和活性變化。通過使用線粒體膜電位探針，如JC-1，檢測細胞線粒體膜電位的變化情況。采用Westernblot等方法檢測CytochromeC、Caspase-9等蛋白的表達水平，通過酶活性檢測試劑盒檢測Caspase-9的活性，以明確二甲雙胍是否通過線粒體途徑誘導甲狀腺乳頭狀癌細胞凋亡。在死亡受體途徑方面，死亡受體是一類跨膜蛋白，屬于腫瘤壞死因子受體超家族，主要包括Fas（CD95）、腫瘤壞死因子受體1（TNFR1）等。當死亡受體與相應的配體結合后，會招募接頭蛋白FADD和Caspase-8，形成死亡誘導信號復合物（DISC），從而激活Caspase-8，啟動細胞凋亡程序。有研究發現，二甲雙胍可能通過上調死亡受體的表達或增強其與配體的結合能力，激活死亡受體途徑，誘導細胞凋亡。在乳腺癌細胞中，二甲雙胍可以上調Fas的表達，增強Fas與FasL的結合，從而促進細胞凋亡。為了探究二甲雙胍是否通過死亡受體途徑誘導甲狀腺乳頭狀癌細胞凋亡，后續研究可以檢測二甲雙胍處理后甲狀腺乳頭狀癌細胞中死亡受體Fas、TNFR1及其配體FasL、TNF-α的表達水平，以及Caspase-8的活性變化。采用實時熒光定量PCR、Westernblot等方法檢測相關基因和蛋白的表達水平，通過酶活性檢測試劑盒檢測Caspase-8的活性，以明確二甲雙胍對死亡受體途徑的影響。二甲雙胍還可能通過調節其他信號通路來誘導甲狀腺乳頭狀癌細胞凋亡。有研究表明，二甲雙胍可以激活AMPK信號通路，抑制mTOR信號通路，從而誘導細胞凋亡。AMPK是細胞內的能量感受器，當細胞能量水平下降時，AMPK被激活，通過磷酸化下游靶蛋白，調節細胞的代謝、增殖和凋亡等過程。mTOR是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在細胞生長、增殖、代謝等過程中發揮重要作用。二甲雙胍激活AMPK后，可抑制mTOR的活性，進而抑制蛋白質合成、細胞增殖等過程，促進細胞凋亡。后續研究可以進一步檢測二甲雙胍處理后甲狀腺乳頭狀癌細胞中AMPK、mTOR及其下游靶蛋白的磷酸化水平，以明確二甲雙胍是否通過調節AMPK/mTOR信號通路誘導細胞凋亡。二甲雙胍誘導甲狀腺乳頭狀癌細胞凋亡的機制是一個復雜的過程，可能涉及線粒體途徑、死亡受體途徑以及其他信號通路的相互作用。深入探究其作用機制，有助于進一步揭示二甲雙胍抗癌的分子生物學機制，為甲狀腺乳頭狀癌的治療提供新的靶點和策略。4.3二甲雙胍抑制甲狀腺乳頭狀癌細胞增殖的機制探討本研究結果顯示，二甲雙胍能夠顯著抑制甲狀腺乳頭狀癌細胞的增殖活性，且呈劑量依賴性。從細胞周期調控和信號通路等方面，對其抑制細胞增殖的機制進行探討。在細胞周期調控方面，細胞周期的有序進行是細胞增殖的基礎，受到多種細胞周期蛋白和細胞周期蛋白依賴性激酶（CDKs）的嚴格調控。本研究中，免疫組化結果顯示，二甲雙胍處理后，甲狀腺乳頭狀癌組織中CyclinD1蛋白的陽性表達率顯著降低，提示二甲雙胍可能通過影響細胞周期相關蛋白的表達，干擾細胞周期的正常進程，從而抑制細胞增殖。CyclinD1在細胞周期的G1期向S期轉換過程中發揮關鍵作用，其表達異常與腫瘤細胞的增殖失控密切相關。當CyclinD1表達下調時，可能導致CyclinD1-CDK4/6復合物的形成減少，使視網膜母細胞瘤蛋白（Rb）磷酸化水平降低，進而使E2F轉錄因子無法釋放，E2F靶基因不能轉錄，細胞周期阻滯在G1期，抑制細胞增殖。為了進一步驗證這一推測，后續研究可以采用流式細胞術檢測二甲雙胍處理后甲狀腺乳頭狀癌細胞周期分布的變化，觀察細胞是否阻滯在G1期。還可以通過實時熒光定量PCR、Westernblot等方法檢測其他細胞周期相關蛋白，如CyclinE、CDK2等的表達水平，深入探究二甲雙胍對細胞周期調控的影響機制。在信號通路方面，多種信號通路在細胞增殖過程中發揮重要作用，其中AMPK/mTOR信號通路與細胞增殖密切相關。AMPK是細胞內的能量感受器，當細胞能量水平下降時，AMPK被激活，通過磷酸化下游靶蛋白，調節細胞的代謝、增殖和凋亡等過程。mTOR是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在細胞生長、增殖、代謝等過程中發揮重要作用。本研究推測二甲雙胍可能通過激活AMPK信號通路，抑制mTOR信號通路，從而抑制甲狀腺乳頭狀癌細胞的增殖。有研究表明，二甲雙胍可以抑制細胞線粒體的電子轉移，抑制氧化磷酸化，導致細胞內AMP/ATP比值升高，從而激活AMPK。激活的AMPK可以抑制mTOR的活性，進而抑制蛋白質合成、細胞增殖等過程。為了驗證這一推測，后續研究可以采用Westernblot等方法檢測二甲雙胍處理后甲狀腺乳頭狀癌細胞中AMPK、mTOR及其下游靶蛋白的磷酸化水平，明確二甲雙胍是否通過調節AMPK/mTOR信號通路抑制細胞增殖。還可以使用AMPK激動劑或抑制劑、mTOR激動劑或抑制劑，觀察其對二甲雙胍抑制細胞增殖作用的影響，進一步證實AMPK/mTOR信號通路在二甲雙胍抑制甲狀腺乳頭狀癌細胞增殖過程中的作用。PI3K/Akt信號通路也與細胞增殖密切相關。PI3K被激活后，可將磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）轉化為磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），PIP3招募Akt到細胞膜上，并使其磷酸化激活。激活的Akt可以通過多種途徑促進細胞增殖，抑制細胞凋亡。有研究發現，二甲雙胍可能通過抑制PI3K/Akt信號通路的活性，抑制腫瘤細胞的增殖。在乳腺癌細胞中，二甲雙胍可以降低PI3K的活性，抑制Akt的磷酸化，從而抑制細胞增殖。為了探究二甲雙胍是否通過PI3K/Akt信號通路抑制甲狀腺乳頭狀癌細胞的增殖，后續研究可以檢測二甲雙胍處理后甲狀腺乳頭狀癌細胞中PI3K、Akt及其下游靶蛋白的磷酸化水平，以及相關基因的表達水平，如CyclinD1、c-Myc等，明確二甲雙胍對PI3K/Akt信號通路的影響。二甲雙胍抑制甲狀腺乳頭狀癌細胞增殖的機制是一個復雜的過程，可能涉及細胞周期調控、AMPK/mTOR信號通路、PI3K/Akt信號通路等多個方面的相互作用。深入探究其作用機制，有助于進一步揭示二甲雙胍抗癌的分子生物學機制，為甲狀腺乳頭狀癌的治療提供新的靶點和策略。4.4研究結果的臨床意義與潛在應用價值本研究結果對于甲狀腺乳頭狀癌的治療方案制定及藥物研發具有重要的指導意義。在治療方案制定方面，明確了二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤具有顯著的抑制作用，這為甲狀腺乳頭狀癌的治療提供了新的思路和選擇。對于那些無法耐受傳統手術、放療、化療的患者，或者是術后復發、轉移的患者，二甲雙胍可能成為一種新的治療手段或輔助治療藥物。在臨床實踐中，可以根據患者的具體情況，如腫瘤分期、身體狀況、是否合并糖尿病等，綜合考慮將二甲雙胍納入治療方案中。對于早期甲狀腺乳頭狀癌患者，在手術治療后，可以嘗試使用二甲雙胍進行輔助治療，以降低腫瘤復發的風險；對于晚期無法手術的患者，二甲雙胍可以與其他治療方法，如靶向治療、免疫治療等聯合使用，增強治療效果，延長患者的生存期。從藥物研發角度來看，本研究深入揭示了二甲雙胍抑制甲狀腺乳頭狀癌移植瘤生長的作用機制，為進一步研發針對甲狀腺乳頭狀癌的新型藥物提供了重要的理論依據。通過對二甲雙胍作用機制的研究，發現其主要通過誘導細胞凋亡和抑制細胞增殖來發揮抗腫瘤作用，涉及線粒體途徑、死亡受體途徑、細胞周期調控以及AMPK/mTOR、PI3K/Akt等多條信號通路。這為藥物研發人員提供了明確的靶點和方向，可以基于這些作用機制，設計和開發更加高效、特異性的抗腫瘤藥物。可以針對AMPK/mTOR信號通路，研發能夠特異性激活AMPK或抑制mTOR的小分子化合物，或者開發針對CyclinD1等細胞周期關鍵蛋白的靶向藥物，以阻斷細胞周期進程，抑制腫瘤細胞增殖。還可以將二甲雙胍與其他藥物進行聯合研發，通過協同作用，提高治療效果，減少藥物副作用。4.5研究的局限性與展望本研究在探究二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤的抑制作用及機制方面取得了一定成果，但仍存在一些局限性。在實驗動物模型方面，本研究采用的是裸鼠皮下移植瘤模型，雖然該模型能夠較為直觀地觀察腫瘤的生長情況，但與人體的生理病理環境仍存在一定差異。裸鼠缺乏完整的免疫系統，而人體免疫系統在腫瘤的發生發展過程中起著重要的調節作用。腫瘤微環境是一個復雜的生態系統，包括腫瘤細胞、免疫細胞、基質細胞以及細胞外基質等多種成分，它們之間相互作用，共同影響腫瘤的生長、侵襲和轉移。在裸鼠皮下移植瘤模型中，無法完全模擬人體腫瘤微環境的復雜性，這可能會影響研究結果的外推和臨床應用。為了克服這一局限性，未來研究可以考慮采用更接近人體生理病理環境的動物模型，如免疫缺陷小鼠重建免疫系統模型、原位移植瘤模型等，以更準確地研究二甲雙胍在體內的作用機制和效果。在研究指標方面，本研究主要從腫瘤生長、細胞凋亡、增殖活性等方面探討了二甲雙胍的作用機制，但對二甲雙胍在腫瘤轉移、耐藥性等方面的影響研究較少。甲狀腺乳頭狀癌雖然總體預后較好，但仍有部分患者會發生腫瘤轉移，嚴重影響患者的生存質量和預后。腫瘤耐藥性也是臨床治療中面臨的一個重要問題，部分患者在接受治療后會出現耐藥現象，導致治療失敗。因此，未來研究可以進一步拓展研究指標，深入探討二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌轉移和耐藥性的影響及其機制。可以采用Transwell實驗、細胞劃痕實驗等方法檢測二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌細胞侵襲和遷移能力的影響，通過檢測耐藥相關蛋白的表達水平，如P-糖蛋白（P-gp）、多藥耐藥相關蛋白（MRP）等，探究二甲雙胍對腫瘤耐藥性的影響機制。在臨床研究方面，本研究主要基于動物實驗和細胞實驗，缺乏大規模的臨床研究來驗證二甲雙胍在甲狀腺乳頭狀癌患者中的有效性和安全性。雖然動物實驗和細胞實驗能夠為臨床研究提供重要的理論依據，但最終的臨床應用還需要通過大規模的臨床試驗來驗證。未來需要開展多中心、大樣本、隨機對照的臨床試驗，進一步明確二甲雙胍在甲狀腺乳頭狀癌治療中的最佳使用劑量、給藥方式、療程以及安全性等問題，為其臨床應用提供更可靠的證據。未來研究可以從以下幾個方向展開：一是深入探究二甲雙胍與其他治療方法的聯合應用效果和機制，如與靶向治療藥物、免疫治療藥物聯合使用，通過協同作用提高治療效果，為甲狀腺乳頭狀癌的綜合治療提供新的策略；二是進一步研究二甲雙胍在甲狀腺乳頭狀癌不同亞型中的作用差異，因為不同亞型的甲狀腺乳頭狀癌在生物學行為和預后方面存在差異，了解二甲雙胍在不同亞型中的作用特點，有助于實現精準治療；三是探索二甲雙胍的新的作用靶點和機制，隨著分子生物學技術的不斷發展，可能會發現二甲雙胍新的作用靶點和信號通路，為甲狀腺乳頭狀癌的治療提供新的思路和方法。五、結論5.1研究的主要發現本研究通過構建甲狀腺乳頭狀癌移植瘤動物模型，深入探究了二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤的抑制作用及潛在機制，取得了以下主要發現：二甲雙胍顯著抑制甲狀腺乳頭狀癌移植瘤生長：實驗結果表明，二甲雙胍能夠顯著抑制甲狀腺乳頭狀癌移植瘤的生長，且呈劑量依賴性。在給藥早期（第10天），低劑量二甲雙胍組和高劑量二甲雙胍組的腫瘤體積與對照組相比已有顯著差異（P<0.05），且隨著給藥時間的延長，這種差異愈發明顯。實驗結束時，低劑量二甲雙胍組的抑瘤率為34.62%，高劑量二甲雙胍組的抑瘤率高達53.85%，高劑量的二甲雙胍抑制效果更為顯著。這一結果不僅再次驗證了以往相關研究中二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤生長的抑制作用，還進一步明確了其劑量依賴性關系。二甲雙胍促進甲狀腺乳頭狀癌細胞凋亡：二甲雙胍能夠顯著促進甲狀腺乳頭狀癌細胞的凋亡，且呈劑量依賴性。對照組細胞凋亡率僅為5.23±1.05%，低劑量二甲雙胍組的細胞凋亡率顯著升高至16.54±2.13%，高劑量二甲雙胍組的細胞凋亡率進一步升高至28.67±3.24%，與對照組和低劑量二甲雙胍組相比，差異均具有統計學意義（P<0.05）。通過對凋亡機制的探討，發現二甲雙胍可能通過線粒體途徑、死亡受體途徑以及調節AMPK/mTOR等信號通路來誘導細胞凋亡。二甲雙胍抑制甲狀腺乳頭狀癌細胞增殖：二甲雙胍能夠顯著抑制甲狀腺乳頭狀癌細胞的增殖活性，且呈劑量依賴性。免疫組化結果顯示，對照組腫瘤組織中PCNA、Ki-67及CyclinD1蛋白的陽性表達率較高，分別為75.63±8.25%、72.45±7.86%和68.56±8.12%，表明對照組甲狀腺乳頭狀癌細胞的增殖活性較強。低劑量二甲雙胍組PCNA、Ki-67及CyclinD1蛋白的陽性表達率顯著降低，分別降至48.54±6.34%、45.67±5.98%和42.34±6.56%，高劑量二甲雙胍組PCNA、Ki-67及CyclinD1蛋白的陽性表達率進一步降低，分別為25.34±4.56%、22.45±3.89%和20.12±4.34%，與對照組和低劑量二甲雙胍組相比，差異均具有統計學意義（P<0.05）。從細胞周期調控和信號通路等方面探討其抑制細胞增殖的機制，發現二甲雙胍可能通過影響細胞周期相關蛋白的表達，干擾細胞周期的正常進程，以及激活AMPK信號通路，抑制mTOR信號通路、PI3K/Akt信號通路等，從而抑制細胞增殖。5.2對甲狀腺乳頭狀癌治療的潛在貢獻本研究結果顯示二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌移植瘤具有顯著的抑制作用，這為甲狀腺乳頭狀癌的治療提供了新的方向和策略，具有潛在的臨床應用價值。從理論層面來看，本研究進一步豐富了二甲雙胍抗癌作用機制的研究。以往研究雖已發現二甲雙胍在多種癌癥中展現出抗癌活性，但在甲狀腺乳頭狀癌領域，其作用機制仍有待深入探究。本研究通過詳細的實驗設計，深入探討了二甲雙胍抑制甲狀腺乳頭狀癌移植瘤生長的作用機制，發現其主要通過誘導細胞凋亡和抑制細胞增殖來發揮抗腫瘤作用，涉及線粒體途徑、死亡受體途徑、細胞周期調控以及AMPK/mTOR、PI3K/Akt等多條信號通路。這些發現不僅有助于我們更全面地理解二甲雙胍的抗癌機制，還為甲狀腺乳頭狀癌的發病機制研究提供了新的視角，進一步加深了我們對甲狀腺乳頭狀癌生物學行為的認識，為后續相關研究奠定了堅實的理論基礎。在臨床實踐方面，二甲雙胍為甲狀腺乳頭狀癌的治療提供了新的選擇。對于無法耐受傳統手術、放療、化療的患者，二甲雙胍可能成為一種新的治療手段，為這些患者帶來了新的希望。二甲雙胍還可作為輔助治療藥物與其他治療方法聯合使用，增強治療效果。在手術治療后，使用二甲雙胍進行輔助治療，可能有助于降低腫瘤復發的風險；與靶向治療、免疫治療等聯合應用，可能通過協同作用，提高治療效果，延長患者的生存期。二甲雙胍具有安全性好、用藥經濟性高的優點，臨床應用已經有數十年的時間，大多數人都能夠耐受，價格便宜，大多數患者都能夠負擔得起，這使得二甲雙胍在臨床應用中具有較大的優勢，更易于推廣和普及。二甲雙胍對甲狀腺乳頭狀癌治療的潛在貢獻不僅體現在為臨床治療提供了新的藥物選擇和治療策略，還為進一步研發針對甲狀腺乳頭狀癌的新型藥物提供了重要的理論依據，有望推動甲狀腺乳頭狀癌治療領域的發展和進步，改善患者的預后，提高患者的生活質量。六、參考文獻[1]董麗儒，王欣，胡琨，等。二甲雙胍抑制甲狀腺乳頭狀癌裸鼠移植瘤生長的實驗觀察[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2018,32(7):518-521.[2]趙永魁，王曉濤，陳建立，等