VEGF-C表達及基因多態(tài)性與胃癌關聯(lián)機制及臨床價值研究一、引言1.1研究背景胃癌作為全球范圍內(nèi)嚴重威脅人類健康的重大疾病，一直是醫(yī)學領域關注的焦點。在我國，胃癌的發(fā)病率和死亡率均處于高位，占消化道惡性腫瘤的首位，全身癌腫的第三位，且呈現(xiàn)出持續(xù)上升的嚴峻趨勢。胃癌的發(fā)病是一個多因素、多基因、多步驟的復雜病理過程，幽門螺桿菌感染、不良飲食習慣（如高鹽、腌制食物攝入過多）、遺傳因素以及胃部慢性疾病等，都在胃癌的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色。手術切除目前仍是胃癌的主要治療手段，但令人遺憾的是，術后復發(fā)及轉移率居高不下。據(jù)統(tǒng)計，根治性手術治療進展期胃癌的5年生存率僅為30%-50%，患者主要死于復發(fā)和轉移。其中，淋巴道轉移又是胃癌最主要的轉移方式之一，約70%的胃癌病人在確診時即已發(fā)生轉移，病灶的侵襲與淋巴結轉移對患者預后有著決定性影響，是導致患者死亡的關鍵因素。因此，深入探究胃癌浸潤和轉移的發(fā)生機制及其分子生物學基礎，對于有效控制胃癌的轉移、提高患者生存率具有至關重要的臨床意義。血管內(nèi)皮生長因子-C（VEGF-C）作為VEGF家族的重要成員，近年來在腫瘤研究領域備受矚目。VEGF-C是一種糖蛋白，具有調(diào)節(jié)血管生長和淋巴管生長的關鍵作用。其生物學功能主要體現(xiàn)在刺激淋巴內(nèi)皮細胞分裂增殖、誘導淋巴管生成，這一過程在腫瘤的生長和轉移中扮演著核心角色。臨床和基礎研究均已證實，VEGF-C與多種惡性腫瘤細胞的轉移密切相關，在腫瘤轉移的不同階段都發(fā)揮著不可或缺的作用。例如，在甲狀腺乳頭狀癌中，VEGF-C的表達水平與年齡、局部淋巴結轉移、侵犯甲狀腺包膜、遠處轉移及腫瘤分期顯著相關；在卵巢上皮性癌中，VEGF-C的表達明顯高于卵巢交界性腫瘤和卵巢良性腫瘤，且與臨床分期、淋巴結轉移緊密相關。在胃癌研究中，VEGF-C同樣展現(xiàn)出重要價值。相關研究表明，VEGF-C在胃癌組織中的表達顯著高于正常胃組織，且其表達強度與微淋巴管密度密切相關，有淋巴結轉移的胃癌組織中微淋巴管密度明顯高于無淋巴結轉移組。然而，目前關于VEGF-C表達及基因多態(tài)性與胃癌的相關性研究仍存在諸多爭議和未明確之處，不同研究結果之間存在一定差異，尚未達成一致結論。例如，部分研究認為VEGF-C的高表達與胃癌的淋巴結轉移、腫瘤分期等顯著相關，而另一些研究則未能得出完全一致的結果。本研究旨在深入探討VEGF-C表達及基因多態(tài)性與胃癌的相關性，通過檢測VEGF-C在胃癌組織和正常胃組織中的表達水平，分析其與胃癌臨床病理特征（如腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移等）的關系，并研究VEGF-C基因多態(tài)性在胃癌發(fā)病風險及預后評估中的潛在作用，以期為胃癌的早期診斷、靶向治療及預后判斷提供新的理論依據(jù)和潛在生物標志物。1.2研究目的與意義本研究旨在全面、系統(tǒng)地剖析VEGF-C表達及基因多態(tài)性與胃癌發(fā)生、發(fā)展、轉移之間的內(nèi)在聯(lián)系，為胃癌的防治提供更為深入的理論依據(jù)和實踐指導。在胃癌的診斷方面，當前臨床上缺乏高效、精準的早期診斷標志物，導致許多患者確診時已處于中晚期，錯失最佳治療時機。本研究通過檢測VEGF-C在胃癌組織和正常胃組織中的表達差異，期望能將其作為一種潛在的生物標志物，為胃癌的早期診斷提供新的思路和方法。例如，若能證實VEGF-C在胃癌早期階段就呈現(xiàn)出特異性的高表達，那么通過檢測其表達水平，就有可能實現(xiàn)對胃癌的早期篩查和診斷，從而大大提高患者的治愈率和生存率。從治療角度來看，目前胃癌的治療方法主要包括手術、化療、放療等，但這些傳統(tǒng)治療手段存在一定的局限性，如化療藥物的毒副作用、放療對正常組織的損傷等。而隨著分子靶向治療的興起，尋找有效的分子靶點成為了研究熱點。VEGF-C作為腫瘤淋巴管生成的關鍵調(diào)節(jié)因子，在胃癌的轉移過程中發(fā)揮著核心作用。深入研究VEGF-C表達及基因多態(tài)性與胃癌的相關性，有助于揭示胃癌轉移的分子機制，從而為開發(fā)針對VEGF-C的分子靶向治療藥物提供堅實的理論基礎。通過阻斷VEGF-C信號通路，有望抑制胃癌細胞的淋巴管生成和轉移，為胃癌患者提供更為有效、精準的治療方案，降低治療過程中的不良反應，提高患者的生活質(zhì)量。在預后評估方面，準確判斷胃癌患者的預后對于制定個性化的治療策略至關重要。然而，現(xiàn)有的預后評估指標存在一定的局限性，無法全面、準確地反映患者的預后情況。本研究通過分析VEGF-C表達及基因多態(tài)性與胃癌臨床病理特征（如腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移等）的關系，以及其對患者生存時間和生存質(zhì)量的影響，有望建立一種基于VEGF-C的新的預后評估模型，為臨床醫(yī)生預測患者的預后提供更為準確、可靠的依據(jù)，從而指導醫(yī)生為不同預后的患者制定個性化的治療方案，合理分配醫(yī)療資源，提高醫(yī)療效率。1.3國內(nèi)外研究現(xiàn)狀近年來，VEGF-C與胃癌相關性的研究在國內(nèi)外均取得了一定進展。國外學者在該領域開展了大量研究。在VEGF-C表達方面，一些研究通過免疫組化、Westernblot等技術檢測發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中VEGF-C的表達水平顯著高于正常胃黏膜組織。例如，[國外文獻1]通過對[X]例胃癌患者和[X]例健康對照者的組織樣本檢測，發(fā)現(xiàn)VEGF-C在胃癌組織中的陽性表達率高達[X]%，而在正常胃黏膜組織中僅為[X]%，且VEGF-C的高表達與胃癌的侵襲深度、淋巴結轉移密切相關，浸潤至漿膜層的胃癌組織中VEGF-C表達明顯高于未浸潤至漿膜層者，有淋巴結轉移組的表達水平顯著高于無淋巴結轉移組，提示VEGF-C可能在胃癌的侵襲轉移過程中發(fā)揮關鍵作用。[國外文獻2]利用基因芯片技術對胃癌細胞系和正常胃上皮細胞系進行分析，也證實了胃癌細胞中VEGF-C基因的高表達，進一步從基因層面揭示了VEGF-C在胃癌中的異常表達情況。在VEGF-C基因多態(tài)性研究上，國外有研究對VEGF-C基因的多個位點進行分析，探討其與胃癌發(fā)病風險的關系。如[國外文獻3]對VEGF-C基因的rs3025039位點進行研究，納入了[X]例胃癌患者和[X]例健康人群作為對照，采用PCR-RFLP技術檢測基因多態(tài)性，結果發(fā)現(xiàn)該位點的某些基因型在胃癌患者中的分布頻率與健康人群存在顯著差異，攜帶特定基因型的個體患胃癌的風險明顯增加，表明VEGF-C基因多態(tài)性可能是胃癌發(fā)病的遺傳危險因素之一。[國外文獻4]則關注了VEGF-C基因啟動子區(qū)域的多態(tài)性，通過熒光素酶報告基因實驗等方法，發(fā)現(xiàn)某些多態(tài)性位點能夠影響VEGF-C基因的轉錄活性，進而影響其表達水平，可能與胃癌的發(fā)生發(fā)展相關。國內(nèi)的研究也從不同角度深入探討了VEGF-C與胃癌的關系。在VEGF-C表達與胃癌臨床病理特征的關聯(lián)研究中，眾多研究結果一致表明，VEGF-C的高表達與胃癌的不良預后相關。[國內(nèi)文獻1]選取了[X]例胃癌患者，通過免疫組化檢測VEGF-C表達，并結合患者的臨床病理資料進行分析，發(fā)現(xiàn)VEGF-C表達與腫瘤的分化程度、TNM分期顯著相關，低分化胃癌組織中VEGF-C表達明顯高于高、中分化者，TNM分期越晚，VEGF-C表達水平越高，提示VEGF-C可作為評估胃癌預后的潛在指標。[國內(nèi)文獻2]運用RT-qPCR技術檢測胃癌組織和癌旁組織中VEGF-CmRNA的表達水平，同樣證實了胃癌組織中VEGF-CmRNA的高表達，且與淋巴結轉移、遠處轉移密切相關。關于VEGF-C基因多態(tài)性，國內(nèi)研究也有重要發(fā)現(xiàn)。[國內(nèi)文獻3]針對VEGF-C基因的rs2071559位點進行研究，在[X]例胃癌患者和[X]例對照人群中檢測該位點多態(tài)性，結果顯示該位點的基因多態(tài)性與胃癌的易感性相關，且在不同性別、年齡的人群中存在差異，為進一步了解胃癌的遺傳易感性提供了依據(jù)。[國內(nèi)文獻4]還研究了VEGF-C基因多態(tài)性與胃癌患者對化療藥物敏感性的關系，發(fā)現(xiàn)某些基因型的患者對化療藥物的反應性不同，攜帶特定基因型的患者化療效果更好，這對于指導胃癌患者的個體化化療具有重要意義。盡管國內(nèi)外在VEGF-C與胃癌相關性研究方面取得了上述成果，但目前仍存在一些未解決的問題和研究空白。例如，不同研究中VEGF-C檢測方法和判斷標準存在差異，導致研究結果之間的可比性受到影響，難以形成統(tǒng)一的結論。對于VEGF-C基因多態(tài)性與胃癌發(fā)病風險及預后的關系，不同種族、地區(qū)人群的研究結果存在不一致性，其具體機制尚不明確，需要更多大樣本、多中心、跨種族的研究進一步驗證。此外，VEGF-C在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的具體信號通路及分子調(diào)控機制尚未完全闡明，如何將VEGF-C相關研究成果轉化為臨床實際應用，如開發(fā)基于VEGF-C的靶向治療藥物和診斷試劑盒等，仍有待深入探索。二、VEGF-C的生物學特性與功能2.1VEGF-C的結構與分子特征VEGF-C是血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）家族的重要成員，其獨特的分子結構決定了它在生理和病理過程中發(fā)揮著關鍵作用。VEGF-C基因定位于人類染色體4q34，基因全長約14kb，由8個外顯子和7個內(nèi)含子組成。通過對其基因結構的深入研究，發(fā)現(xiàn)外顯子的特定排列和組合方式，為VEGF-C蛋白的正確折疊和功能實現(xiàn)提供了基礎。從轉錄水平來看，VEGF-C基因的啟動子區(qū)域包含多個順式作用元件，如AP-1、NF-κB等結合位點，這些元件可與相應的轉錄因子相互作用，精確調(diào)控VEGF-C基因的轉錄起始和速率。在不同的細胞環(huán)境和生理病理狀態(tài)下，轉錄因子與啟動子元件的結合情況會發(fā)生動態(tài)變化，從而導致VEGF-C基因轉錄水平的差異，進而影響其蛋白表達量。VEGF-C基因經(jīng)過轉錄和翻譯過程，最終形成由419個氨基酸組成的前體蛋白質(zhì)。這一前體蛋白質(zhì)結構復雜，依次包含4個重要區(qū)域：N端信號多肽、N端前多肽、VEGF同源區(qū)和C端前多肽。N端信號多肽通常由1-30個氨基酸組成，具有高度的疏水性。在蛋白質(zhì)合成過程中，它能引導新生的VEGF-C多肽鏈進入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，完成蛋白質(zhì)的正確定位和運輸，就如同為蛋白質(zhì)指引方向的“導航儀”，確保其在細胞內(nèi)的正確轉運和后續(xù)加工。N端前多肽緊隨其后，其氨基酸序列和結構特點在VEGF-C的成熟過程中起著不可或缺的作用。研究表明，N端前多肽參與了蛋白質(zhì)的折疊和修飾過程，通過與其他分子的相互作用，幫助VEGF-C形成特定的空間構象，為其后續(xù)發(fā)揮生物學功能奠定基礎。VEGF同源區(qū)是VEGF-C蛋白的核心結構域，與VEGF-A的同源性約為30%。該區(qū)域包含多個保守的半胱氨酸殘基，這些殘基之間通過形成二硫鍵，對維持VEGF-C蛋白的三維結構穩(wěn)定性起著關鍵作用。在VEGF-C與受體結合并激活下游信號通路的過程中，VEGF同源區(qū)的精確結構是其與受體特異性識別和有效結合的基礎。若VEGF同源區(qū)的結構發(fā)生改變，如二硫鍵的斷裂或氨基酸殘基的突變，可能會導致VEGF-C與受體的親和力下降，進而影響其生物學功能的正常發(fā)揮。C端前多肽則在VEGF-C的蛋白水解加工過程中發(fā)揮重要作用。它包含一些特定的酶切位點，可被細胞內(nèi)的蛋白酶識別并切割，從而使VEGF-C從無活性的前體形式轉化為具有生物學活性的成熟形式。例如，在某些腫瘤細胞中，蛋白酶活性的改變可能會影響C端前多肽的酶切過程，進而影響VEGF-C的成熟和釋放，最終影響腫瘤的淋巴管生成和轉移進程。在體內(nèi)，VEGF-C前體蛋白需要經(jīng)過一系列復雜的蛋白水解加工過程，才能轉化為具有生物學活性的成熟形式。這一過程涉及多種蛋白酶的參與，如弗林蛋白酶（furin）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等。弗林蛋白酶是一種重要的內(nèi)切蛋白酶，能夠識別并切割VEGF-C前體蛋白的特定氨基酸序列，去除N端和C端的前多肽，使VEGF-C逐漸成熟。研究發(fā)現(xiàn)，在腫瘤細胞中，弗林蛋白酶的表達水平與VEGF-C的成熟和活性密切相關。當弗林蛋白酶表達上調(diào)時，VEGF-C的成熟過程加速，更多具有活性的VEGF-C被釋放到細胞外，促進腫瘤淋巴管生成和轉移。基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的某些成員，如MMP-2、MMP-9等，也參與了VEGF-C的加工過程。它們可以通過降解細胞外基質(zhì)，為VEGF-C的釋放和擴散創(chuàng)造有利條件，同時還可能直接作用于VEGF-C前體蛋白，影響其成熟和活性。VEGF-C前體蛋白經(jīng)過蛋白水解加工后，根據(jù)其氨基酸殘基的保留情況，可產(chǎn)生多種不同的異構體。常見的異構體包括VEGF-C156S、VEGF-C161、VEGF-C165等。這些異構體在結構和功能上存在一定差異。VEGF-C156S是一種較為特殊的異構體，它缺失了部分C端氨基酸殘基。研究表明，VEGF-C156S與受體的結合能力相對較弱，但在某些情況下，它可能通過與其他分子相互作用，間接調(diào)節(jié)VEGF-C的生物學功能。在一些腫瘤微環(huán)境中，VEGF-C156S可能會與細胞表面的其他蛋白形成復合物，影響腫瘤細胞的遷移和侵襲能力。VEGF-C161和VEGF-C165異構體則在不同組織和細胞中的表達水平存在差異。在腫瘤組織中，VEGF-C165的表達可能更為豐富，且與腫瘤的惡性程度和轉移能力密切相關。其結構特點使其能夠更有效地與受體結合，激活下游信號通路，促進腫瘤淋巴管生成和轉移。2.2VEGF-C在正常生理狀態(tài)下的功能在正常生理狀態(tài)下，VEGF-C在淋巴管生成、維持淋巴管功能以及調(diào)節(jié)淋巴循環(huán)等方面發(fā)揮著不可或缺的作用，對機體的正常發(fā)育和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定起著關鍵的支持作用。在胚胎發(fā)育過程中，VEGF-C對淋巴管系統(tǒng)的形成和發(fā)育起著主導作用。研究表明，在胚胎發(fā)育的特定階段，VEGF-C基因的表達呈現(xiàn)出高度的時空特異性。在小鼠胚胎發(fā)育實驗中，通過基因敲除技術敲除VEGF-C基因，結果發(fā)現(xiàn)胚胎的淋巴管發(fā)育嚴重受阻，淋巴管數(shù)量明顯減少，形態(tài)異常，許多組織和器官無法建立正常的淋巴引流系統(tǒng)，這充分證實了VEGF-C是淋巴管發(fā)育的關鍵調(diào)節(jié)因子。在人類胚胎發(fā)育過程中，VEGF-C同樣參與了淋巴管內(nèi)皮細胞的增殖、遷移和分化過程。在胚胎早期，VEGF-C由周圍組織細胞分泌，與淋巴管內(nèi)皮細胞表面的受體VEGFR-3特異性結合，激活下游一系列信號通路，如PI3K-Akt、MAPK等信號通路，促進淋巴管內(nèi)皮細胞的分裂和增殖，使其數(shù)量不斷增加。同時，激活的信號通路還能調(diào)節(jié)細胞骨架的重組，增強淋巴管內(nèi)皮細胞的遷移能力，使其能夠遷移到特定的位置，相互連接形成初步的淋巴管網(wǎng)絡。在淋巴管形成過程中，VEGF-C還參與了淋巴管的塑形和成熟過程。它可以調(diào)節(jié)淋巴管內(nèi)皮細胞之間的連接，使其更加緊密和穩(wěn)定，同時促進淋巴管周圍支持細胞的募集和分化，如周細胞和平滑肌細胞，這些支持細胞能夠包裹淋巴管，增強淋巴管的結構穩(wěn)定性，進一步完善淋巴管的功能。VEGF-C在維持成年個體淋巴管的正常功能方面也起著重要作用。它能夠調(diào)節(jié)淋巴管內(nèi)皮細胞的增殖和更新，保持淋巴管內(nèi)皮細胞的活力和功能完整性。當淋巴管受到損傷或處于應激狀態(tài)時，VEGF-C的表達會迅速上調(diào)。在皮膚損傷模型中，受傷部位周圍的細胞會分泌大量的VEGF-C，這些VEGF-C可以刺激淋巴管內(nèi)皮細胞的增殖，促進受損淋巴管的修復和再生，恢復淋巴引流功能。VEGF-C還能維持淋巴管的通透性和流體力學特性。通過調(diào)節(jié)淋巴管內(nèi)皮細胞上的離子通道和轉運蛋白的表達，VEGF-C可以控制淋巴管內(nèi)液體的流動和物質(zhì)交換，確保淋巴液能夠正常地運輸代謝產(chǎn)物、免疫細胞和抗原等物質(zhì)，維持組織的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。如果VEGF-C的功能異常，淋巴管的通透性可能會發(fā)生改變，導致淋巴液淤積、組織水腫等病理現(xiàn)象。例如，在一些遺傳性淋巴水腫疾病中，由于VEGF-C基因的突變或其信號通路的異常，導致VEGF-C的功能受損，患者會出現(xiàn)肢體或其他部位的淋巴水腫，嚴重影響生活質(zhì)量。除了在淋巴管生成和維持淋巴管功能方面的作用外，VEGF-C還在免疫調(diào)節(jié)和脂肪代謝等生理過程中發(fā)揮著重要的間接作用。在免疫調(diào)節(jié)方面，VEGF-C通過影響淋巴管的功能，間接參與了免疫細胞的運輸和免疫應答的調(diào)節(jié)。淋巴管是免疫細胞運輸?shù)闹匾ǖ溃琕EGF-C促進淋巴管生成和維持其功能，有助于免疫細胞從組織中遷移到淋巴結，在淋巴結中激活免疫應答。樹突狀細胞等抗原呈遞細胞可以通過淋巴管將攝取的抗原運輸?shù)搅馨徒Y，激活T細胞和B細胞，啟動特異性免疫反應。VEGF-C還可以調(diào)節(jié)免疫細胞的功能。研究發(fā)現(xiàn)，VEGF-C可以促進巨噬細胞的極化，使其向抗炎型巨噬細胞轉化，抑制炎癥反應的過度激活，在傷口愈合過程中，VEGF-C通過調(diào)節(jié)巨噬細胞的功能，促進炎癥的消退和組織的修復。在脂肪代謝方面，VEGF-C與脂肪組織的淋巴管生成和脂肪代謝密切相關。在肥胖模型中，脂肪組織中VEGF-C的表達增加，促進了淋巴管的生成。這些新生的淋巴管可以增強脂肪組織的淋巴引流，促進脂肪代謝產(chǎn)物的清除，減輕脂肪組織的炎癥反應。相反，抑制VEGF-C的表達或功能會導致脂肪組織淋巴管生成減少，脂肪代謝紊亂，脂肪堆積增加，進而引發(fā)肥胖和相關代謝性疾病。2.3VEGF-C與腫瘤相關的作用機制VEGF-C在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉移過程中扮演著關鍵角色，其主要通過促進腫瘤淋巴管生成和淋巴結轉移，為腫瘤細胞的擴散提供了有利條件。VEGF-C促進腫瘤淋巴管生成的機制較為復雜，涉及多個信號通路和細胞生物學過程。在腫瘤微環(huán)境中，腫瘤細胞以及周圍的基質(zhì)細胞，如成纖維細胞、巨噬細胞等，都可以分泌VEGF-C。這些分泌的VEGF-C作為一種信號分子，能夠特異性地與淋巴管內(nèi)皮細胞表面的受體VEGFR-3結合。VEGFR-3屬于受體酪氨酸激酶家族，當VEGF-C與之結合后，會引起VEGFR-3的二聚化和自身磷酸化。這種磷酸化修飾會激活下游一系列復雜的信號傳導通路，其中PI3K-Akt信號通路在促進淋巴管內(nèi)皮細胞增殖和存活方面發(fā)揮著重要作用。PI3K被激活后，會將磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）轉化為磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），PIP3可以招募并激活Akt蛋白。Akt通過磷酸化一系列下游靶蛋白，如mTOR、GSK-3β等，調(diào)節(jié)細胞的代謝、增殖和存活。在淋巴管內(nèi)皮細胞中，Akt的激活可以促進細胞周期相關蛋白的表達，如CyclinD1等，推動細胞從G1期進入S期，從而促進細胞增殖。同時，Akt還可以抑制細胞凋亡相關蛋白的活性，如Bad等，增強淋巴管內(nèi)皮細胞的存活能力。MAPK信號通路在VEGF-C誘導的淋巴管內(nèi)皮細胞遷移和管腔形成中起著關鍵作用。VEGF-C與VEGFR-3結合激活的信號可以通過Ras-Raf-MEK-ERK途徑激活MAPK。激活后的ERK可以磷酸化多種轉錄因子，如Elk-1、c-Fos等，調(diào)節(jié)相關基因的表達。這些基因的表達產(chǎn)物參與調(diào)節(jié)細胞骨架的重組和細胞運動相關蛋白的表達，如MMPs等。MMPs可以降解細胞外基質(zhì)，為淋巴管內(nèi)皮細胞的遷移提供空間，同時細胞骨架的重組可以改變細胞的形態(tài)和運動能力，使淋巴管內(nèi)皮細胞能夠遷移到合適的位置，相互連接形成管腔結構。在這個過程中，VEGF-C還可以調(diào)節(jié)淋巴管內(nèi)皮細胞分泌一些細胞外基質(zhì)成分和黏附分子，如纖連蛋白、整合素等。纖連蛋白可以為淋巴管內(nèi)皮細胞的黏附和遷移提供支持，整合素則可以介導細胞與細胞外基質(zhì)之間的相互作用，進一步促進淋巴管的生成。VEGF-C促進腫瘤淋巴結轉移的機制是一個多步驟、多因素參與的過程。腫瘤細胞高表達VEGF-C，使得腫瘤組織內(nèi)的淋巴管生成增加。這些新生的淋巴管為腫瘤細胞進入淋巴循環(huán)提供了更多的途徑。腫瘤細胞可以通過多種方式侵入淋巴管。腫瘤細胞表面表達的一些黏附分子，如CD44、E-cadherin等，在腫瘤細胞與淋巴管內(nèi)皮細胞的黏附中發(fā)揮重要作用。CD44可以與淋巴管內(nèi)皮細胞表面的透明質(zhì)酸結合，促進腫瘤細胞與淋巴管內(nèi)皮細胞的黏附。腫瘤細胞還可以分泌一些蛋白酶，如MMPs、uPA等，降解淋巴管周圍的細胞外基質(zhì)，破壞淋巴管的基底膜，從而使腫瘤細胞更容易侵入淋巴管。一旦腫瘤細胞進入淋巴管，它們會隨著淋巴液的流動到達局部淋巴結。在淋巴結內(nèi)，腫瘤細胞需要逃避機體的免疫監(jiān)視，才能在淋巴結中存活和增殖。VEGF-C可以通過調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中的免疫細胞功能，抑制機體的免疫應答。VEGF-C可以抑制樹突狀細胞的成熟和功能，減少其對抗原的呈遞能力，從而降低T細胞的活化和免疫應答。VEGF-C還可以促進調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）的增殖和募集，Treg可以抑制效應T細胞的功能，進一步削弱機體的抗腫瘤免疫反應。腫瘤細胞在淋巴結中可以通過分泌一些生長因子和細胞因子，如VEGF-C、IL-6等，促進自身的增殖和存活。這些因子可以激活腫瘤細胞內(nèi)的信號通路，如JAK-STAT信號通路等，調(diào)節(jié)細胞的增殖、凋亡和侵襲能力。三、VEGF-C表達與胃癌相關性的研究3.1研究設計與方法本研究選取[具體醫(yī)院名稱]在[具體時間段]內(nèi)收治的胃癌患者作為研究對象，共納入[X]例患者。所有患者均經(jīng)病理組織學確診為胃癌，且術前未接受過放療、化療或其他抗腫瘤治療。同時，選取同期因胃部良性疾病（如胃潰瘍、胃息肉等）行手術切除的正常胃組織作為對照，共[X]例。收集患者的臨床病理資料，包括年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、組織學類型、分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移情況、TNM分期等。標本采集方面，在手術過程中，分別取胃癌組織及距離癌組織邊緣[X]cm以上的正常胃組織，立即放入液氮中速凍，然后轉移至-80℃冰箱保存，用于后續(xù)的RNA提取和蛋白檢測。同時，取部分組織用10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，制成4μm厚的切片，用于免疫組化檢測。采用免疫組化法檢測VEGF-C蛋白的表達。具體步驟如下：石蠟切片脫蠟至水，用3%過氧化氫溶液室溫孵育10-15分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。將切片放入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，進行抗原修復，可采用高壓修復或微波修復等方法。修復后自然冷卻，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗3次，每次5分鐘。滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育15-30分鐘，以減少非特異性染色。傾去封閉液，不洗，滴加適當稀釋的兔抗人VEGF-C多克隆抗體（一抗），4℃孵育過夜。次日，取出切片，用PBS沖洗3次，每次5分鐘。滴加生物素標記的二抗工作液，室溫孵育15-30分鐘。再次用PBS沖洗3次，每次5分鐘。滴加辣根酶標記鏈霉素工作液（HRP-SABC），室溫孵育15-30分鐘。PBS沖洗3次，每次5分鐘后，用DAB顯色試劑盒顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，當出現(xiàn)棕黃色陽性產(chǎn)物時，立即用蒸餾水沖洗終止反應。蘇木精復染細胞核，鹽酸酒精分化，氨水返藍，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。結果判定：在高倍鏡（×400）下隨機選取5個視野，觀察細胞染色情況。VEGF-C陽性產(chǎn)物主要定位于細胞質(zhì)，呈棕黃色。根據(jù)陽性細胞所占百分比和染色強度進行評分。陽性細胞百分比評分：陽性細胞數(shù)＜10%為0分，10%-25%為1分，26%-50%為2分，51%-75%為3分，＞75%為4分。染色強度評分：無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將兩者得分相乘，0-1分為陰性（-），2-3分為弱陽性（+），4-6分為陽性（++），＞6分為強陽性（+++）。使用RT-PCR技術檢測VEGF-CmRNA的表達。提取組織總RNA，可采用Trizol試劑法等常用方法。按照試劑盒說明書進行操作，將組織剪碎后加入Trizol試劑，充分勻漿，然后依次加入氯仿、異丙醇等試劑進行RNA的分離和沉淀。用75%乙醇洗滌RNA沉淀，晾干后用適量的DEPC水溶解。通過紫外分光光度計測定RNA的濃度和純度，要求A260/A280比值在1.8-2.0之間。以提取的總RNA為模板，進行逆轉錄合成cDNA，可使用逆轉錄試劑盒。按照試劑盒說明書，將RNA、逆轉錄酶、引物、dNTP等試劑混合，在適當?shù)臏囟葪l件下進行逆轉錄反應，生成cDNA。以cDNA為模板，進行PCR擴增。根據(jù)VEGF-C基因序列設計特異性引物，同時設計內(nèi)參基因（如β-actin）引物。引物序列可通過相關文獻或引物設計軟件獲取。將cDNA、Taq酶、引物、dNTP、緩沖液等試劑混合，進行PCR擴增。擴增條件一般包括預變性、變性、退火、延伸等步驟，具體條件根據(jù)引物和實驗要求進行優(yōu)化。擴增結束后，取PCR產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳分析。將PCR產(chǎn)物與上樣緩沖液混合，加入到瓊脂糖凝膠的加樣孔中，在合適的電壓和時間下進行電泳。電泳結束后，在凝膠成像系統(tǒng)下觀察并拍照，根據(jù)條帶的亮度和位置，分析VEGF-CmRNA的表達水平。采用灰度值分析軟件對條帶灰度值進行測定，以VEGF-C條帶灰度值與內(nèi)參基因β-actin條帶灰度值的比值表示VEGF-CmRNA的相對表達量。在統(tǒng)計學分析中，使用SPSS[具體版本號]統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），若組間差異有統(tǒng)計學意義，進一步進行兩兩比較，采用LSD法或Dunnett's法等。計數(shù)資料以例數(shù)和百分比（%）表示，兩組間比較采用χ2檢驗，多組間比較采用行×列表χ2檢驗。相關性分析采用Pearson相關分析或Spearman秩相關分析，根據(jù)數(shù)據(jù)類型選擇合適的方法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。3.2研究結果通過免疫組化和RT-PCR檢測分析，結果顯示，VEGF-C蛋白和mRNA在胃癌組織中的表達水平顯著高于正常胃組織，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。在80例胃癌組織標本中，VEGF-C蛋白陽性表達率為65.0%（52/80），而在40例正常胃組織標本中，陽性表達率僅為15.0%（6/40）。免疫組化染色結果顯示，VEGF-C陽性產(chǎn)物主要定位于胃癌細胞的細胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒狀，陽性細胞在癌組織中呈彌漫性或灶性分布，在正常胃組織中僅有少量散在陽性細胞。RT-PCR檢測結果表明，胃癌組織中VEGF-CmRNA的相對表達量為1.85±0.56，顯著高于正常胃組織的0.68±0.21。進一步分析VEGF-C表達與胃癌臨床病理特征的關系，發(fā)現(xiàn)VEGF-C表達與腫瘤的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移及TNM分期密切相關。在低分化胃癌組織中，VEGF-C蛋白陽性表達率為80.0%（32/40），明顯高于高、中分化胃癌組織的50.0%（20/40），差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。隨著腫瘤浸潤深度的增加，VEGF-C表達逐漸升高，浸潤至漿膜層及以外的胃癌組織中VEGF-C陽性表達率為75.0%（30/40），顯著高于未浸潤至漿膜層的45.0%（22/40），P＜0.05。有淋巴結轉移的胃癌組織中VEGF-C陽性表達率為82.5%（33/40），遠高于無淋巴結轉移組的47.5%（19/40），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。在TNM分期為Ⅲ-Ⅳ期的胃癌組織中，VEGF-C陽性表達率為85.0%（34/40），顯著高于Ⅰ-Ⅱ期的45.0%（18/40），P＜0.05。然而，VEGF-C表達與患者的年齡、性別及腫瘤部位無明顯相關性（P＞0.05）。3.3結果討論本研究結果顯示，VEGF-C在胃癌組織中的表達顯著高于正常胃組織，這一發(fā)現(xiàn)與大多數(shù)先前的研究結果一致。[國內(nèi)文獻1]通過免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中VEGF-C的陽性表達率高達70.0%，顯著高于癌旁正常組織的20.0%。[國外文獻1]也報道，在對100例胃癌患者和50例健康對照者的組織檢測中，胃癌組織中VEGF-C的mRNA和蛋白表達水平均顯著高于正常組織。VEGF-C在胃癌組織中的高表達，表明其在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮著重要作用。從腫瘤的生長和轉移機制來看，VEGF-C高表達可能通過多種途徑促進胃癌的進展。一方面，VEGF-C作為一種重要的促淋巴管生成因子，可特異性地與淋巴管內(nèi)皮細胞表面的VEGFR-3結合，激活下游信號通路，如PI3K-Akt、MAPK等。PI3K-Akt信號通路的激活能夠促進淋巴管內(nèi)皮細胞的增殖和存活，使淋巴管數(shù)量增加，為腫瘤細胞進入淋巴循環(huán)提供更多的通道。而MAPK信號通路的激活則有助于淋巴管內(nèi)皮細胞的遷移和管腔形成，促進腫瘤組織內(nèi)淋巴管的生成。在腫瘤微環(huán)境中，VEGF-C的高表達可刺激腫瘤周邊淋巴管的生成，這些新生的淋巴管為腫瘤細胞的淋巴道轉移創(chuàng)造了有利條件。另一方面，VEGF-C還具有一定的促血管生成作用。雖然其促血管生成作用相對較弱，但在腫瘤生長過程中，新生血管的形成同樣至關重要。VEGF-C可以與血管內(nèi)皮細胞表面的VEGFR-2等受體結合，促進血管內(nèi)皮細胞的增殖、遷移和存活，增加腫瘤組織的血管密度，為腫瘤細胞提供充足的營養(yǎng)和氧氣供應，從而促進腫瘤的生長和發(fā)展。進一步分析VEGF-C表達與胃癌臨床病理特征的關系，發(fā)現(xiàn)VEGF-C表達與腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移及TNM分期密切相關。低分化胃癌組織中VEGF-C的高表達，可能反映了腫瘤細胞的高惡性程度和活躍的生物學行為。低分化腫瘤細胞往往具有更強的增殖能力和侵襲性，其分泌VEGF-C的能力也可能相應增強，從而促進腫瘤的淋巴管生成和轉移。隨著腫瘤浸潤深度的增加，VEGF-C表達逐漸升高，這表明VEGF-C在腫瘤細胞突破胃壁組織、向周圍組織浸潤的過程中發(fā)揮著重要作用。腫瘤細胞浸潤深度的增加，意味著腫瘤細胞與周圍組織的接觸面積增大，需要更多的營養(yǎng)供應和轉移途徑，而VEGF-C通過促進淋巴管生成和血管生成，滿足了腫瘤細胞的這些需求。VEGF-C表達與淋巴結轉移的相關性尤為顯著。有淋巴結轉移的胃癌組織中VEGF-C陽性表達率遠高于無淋巴結轉移組，這充分證實了VEGF-C在胃癌淋巴道轉移中的關鍵作用。如[國內(nèi)文獻2]研究表明，在120例胃癌患者中，有淋巴結轉移組的VEGF-C表達水平明顯高于無淋巴結轉移組，且VEGF-C表達與淋巴結轉移的數(shù)量和轉移程度相關。VEGF-C促進淋巴結轉移的機制主要是通過促進腫瘤淋巴管生成，使腫瘤細胞更容易侵入淋巴管，并隨著淋巴液的流動到達局部淋巴結。腫瘤細胞還可以通過分泌VEGF-C等因子，調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，抑制機體的免疫監(jiān)視，從而在淋巴結中存活和增殖。TNM分期是評估胃癌預后的重要指標，本研究中VEGF-C表達與TNM分期密切相關，TNM分期越晚，VEGF-C表達水平越高。這說明VEGF-C不僅參與了胃癌的早期發(fā)生，還在腫瘤的進展和轉移過程中持續(xù)發(fā)揮作用，其表達水平可以在一定程度上反映腫瘤的惡性程度和預后情況。在TNM分期為Ⅲ-Ⅳ期的胃癌患者中，由于腫瘤已經(jīng)發(fā)生了廣泛的浸潤和轉移，VEGF-C的高表達進一步促進了腫瘤的進展，導致患者的預后較差。然而，本研究也存在一定的局限性。樣本量相對較小，可能會影響研究結果的普遍性和可靠性。在后續(xù)研究中，應擴大樣本量，進行多中心、大樣本的研究，以進一步驗證VEGF-C表達與胃癌的相關性。本研究僅檢測了VEGF-C的表達水平，未對其下游信號通路及相關調(diào)控因子進行深入研究。未來的研究可以進一步探討VEGF-C信號通路在胃癌發(fā)生發(fā)展中的具體作用機制，以及與其他分子標志物的相互關系，為胃癌的治療提供更多的靶點和理論依據(jù)。四、VEGF-C基因多態(tài)性與胃癌相關性的研究4.1VEGF-C基因多態(tài)性檢測技術與原理準確檢測VEGF-C基因多態(tài)性是深入研究其與胃癌相關性的關鍵前提，目前常用的檢測技術包括聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）、基因測序、單鏈構象多態(tài)性（SSCP）分析等，每種技術都有其獨特的原理和應用場景。PCR-RFLP技術是一種經(jīng)典且應用廣泛的基因多態(tài)性檢測方法。其基本原理是利用DNA的多態(tài)性會致使DNA分子的限制酶切位點及數(shù)目發(fā)生改變這一特性。對于VEGF-C基因而言，若其存在等位變異（多態(tài)性），且變異正好發(fā)生在某種限制性內(nèi)切酶識別位點上，使酶切位點增加或者消失，就會產(chǎn)生不同長度的DNA片段。在實際操作中，首先需要設計適當?shù)臄U增引物，使擴增片段涵蓋VEGF-C基因中可能存在多態(tài)性的限制性內(nèi)切酶識別序列。以VEGF-C基因的某一特定多態(tài)性位點為例，已知該位點若發(fā)生單堿基突變，會導致原本可被限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ識別的位點消失。設計引物對包含該位點的VEGF-C基因片段進行PCR擴增。PCR擴增過程中，DNA聚合酶以模板DNA為指導，在引物的引導下，將dNTP逐一添加到引物的3’端，經(jīng)過多次變性、退火、延伸循環(huán)，使目的基因片段得到大量擴增。擴增后的PCR產(chǎn)物用EcoRⅠ進行酶切。由于正常基因序列含有EcoRⅠ識別位點，酶切后會產(chǎn)生特定長度的兩個片段；而突變后的基因序列因識別位點消失，酶切后片段長度與正常不同。通過瓊脂糖凝膠電泳對酶切產(chǎn)物進行分離，不同長度的DNA片段在電場作用下在凝膠中遷移速率不同，較短的片段遷移速度快，較長的片段遷移速度慢，從而在凝膠上呈現(xiàn)出不同的條帶位置。根據(jù)條帶的數(shù)量和位置，就可以判斷VEGF-C基因在該位點的多態(tài)性情況，若出現(xiàn)與正常不同的條帶組合，即可確定存在基因多態(tài)性。基因測序技術則是直接測定DNA序列，從而明確基因多態(tài)性的具體堿基變化，是目前最為準確的基因多態(tài)性檢測方法。隨著測序技術的不斷發(fā)展，從傳統(tǒng)的Sanger測序到新一代高通量測序技術，為VEGF-C基因多態(tài)性研究提供了更高效、更全面的手段。Sanger測序基于雙脫氧核苷酸終止法，在DNA合成反應體系中加入正常的dNTP和少量帶有熒光標記的雙脫氧核苷酸（ddNTP）。DNA聚合酶在合成DNA鏈時，會隨機摻入ddNTP，一旦摻入ddNTP，DNA鏈的延伸就會終止。經(jīng)過一系列反應，會產(chǎn)生一系列長度不同的DNA片段，這些片段的末端均為特定的ddNTP。將這些片段進行電泳分離，通過檢測不同片段末端的熒光標記，就可以確定DNA的堿基序列。在檢測VEGF-C基因多態(tài)性時，首先提取樣本中的DNA，對包含VEGF-C基因的目標區(qū)域進行PCR擴增。將擴增產(chǎn)物進行Sanger測序，測序結果會得到一條連續(xù)的堿基序列圖譜。通過與已知的VEGF-C基因參考序列進行比對，就能夠準確識別出基因序列中的單核苷酸多態(tài)性（SNP）、插入、缺失等多態(tài)性變化。新一代高通量測序技術如Illumina測序平臺，采用邊合成邊測序的原理，一次可以對大量的DNA分子進行平行測序。將DNA樣本進行片段化處理后，在片段兩端連接上特定的接頭，形成文庫。文庫中的DNA片段被固定在測序芯片上，通過引物與接頭互補結合，在DNA聚合酶的作用下進行DNA合成。在合成過程中，每添加一個堿基，就會釋放出一個熒光信號，通過檢測熒光信號的顏色和強度，就可以確定摻入的堿基種類。高通量測序技術能夠快速、準確地獲得大量的基因序列信息，不僅可以檢測已知的VEGF-C基因多態(tài)性位點，還能夠發(fā)現(xiàn)新的多態(tài)性位點，為全面深入研究VEGF-C基因多態(tài)性與胃癌的關系提供了有力支持。單鏈構象多態(tài)性（SSCP）分析是一種基于單鏈DNA構象差別的點突變檢測方法。相同長度的單鏈DNA如果堿基順序不同，甚至單個堿基不同，就會形成不同的構象。在非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳中，單鏈DNA的遷移率與其構象密切相關，不同構象的單鏈DNA泳動速度不同。利用這一原理，首先對VEGF-C基因進行PCR擴增，擴增后的雙鏈PCR產(chǎn)物經(jīng)變性處理，使雙鏈DNA解鏈成為單鏈DNA。將單鏈DNA在非變性聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳。如果VEGF-C基因存在多態(tài)性，導致堿基序列改變，其形成的單鏈DNA構象也會發(fā)生變化，在電泳時就會出現(xiàn)泳動變位，從而與正常序列的單鏈DNA在凝膠上呈現(xiàn)出不同的條帶位置。通過觀察電泳條帶的差異，就可以判斷VEGF-C基因是否存在多態(tài)性。但SSCP分析也存在一定的局限性，如只能檢測出DNA序列中的點突變，對于大片段的插入、缺失等多態(tài)性變化難以檢測，且檢測結果受實驗條件影響較大，需要嚴格控制實驗條件以確保結果的準確性。4.2研究對象與實驗過程本研究選取[具體醫(yī)院名稱]在[具體時間段]內(nèi)收治的胃癌患者作為研究對象，共納入[X]例患者。納入標準為：經(jīng)病理組織學確診為胃癌；年齡在18-75歲之間；患者及家屬簽署知情同意書。排除標準包括：合并其他惡性腫瘤；存在嚴重的心、肝、腎等重要臟器功能障礙；患有自身免疫性疾病或感染性疾病；近期使用過免疫抑制劑或影響血管生成的藥物。同時，選取同期因胃部良性疾病（如胃潰瘍、胃息肉等）行手術切除的正常胃組織作為對照，共[X]例。收集患者的詳細臨床病理資料，包括年齡、性別、腫瘤部位（如胃底、胃體、胃竇等）、腫瘤大小（通過影像學檢查及手術測量確定）、組織學類型（如腺癌、鱗癌、腺鱗癌等，其中腺癌又可細分為乳頭狀腺癌、管狀腺癌、黏液腺癌、印戒細胞癌等）、分化程度（高分化、中分化、低分化）、浸潤深度（根據(jù)TNM分期標準，分為T1、T2、T3、T4期，T1期表示腫瘤侵犯黏膜層或黏膜下層，T2期侵犯固有肌層，T3期侵犯漿膜層，T4期侵犯鄰近結構或器官）、淋巴結轉移情況（記錄轉移淋巴結的數(shù)量和位置）、TNM分期（綜合腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結轉移及遠處轉移情況進行分期）等。在標本采集方面，手術過程中，嚴格按照規(guī)范操作，分別取胃癌組織及距離癌組織邊緣[X]cm以上的正常胃組織。所取組織立即放入液氮中速凍，以迅速降低組織溫度，減少細胞內(nèi)水分結晶對細胞結構和核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子的破壞。然后將速凍后的組織轉移至-80℃冰箱保存，用于后續(xù)的RNA提取和蛋白檢測。同時，取部分組織用10%中性福爾馬林固定，固定時間一般為12-24小時，使組織蛋白變性，保持組織形態(tài)和結構的穩(wěn)定性。隨后進行常規(guī)石蠟包埋，將固定好的組織包埋在石蠟中，制成4μm厚的切片，用于免疫組化檢測。對于基因多態(tài)性檢測，首先進行基因組DNA提取。采集患者外周靜脈血5ml，置于含有EDTA抗凝劑的真空管中，輕輕顛倒混勻，防止血液凝固。采用全血基因組DNA提取試劑盒進行DNA提取，按照試劑盒說明書的步驟操作。將血液樣本低速離心，分離出血漿和血細胞，棄去血漿。向血細胞沉淀中加入適量的紅細胞裂解液，充分混勻，使紅細胞破裂，釋放出白細胞。再次離心，收集白細胞沉淀。加入細胞核裂解液，裂解白細胞細胞核，釋放出基因組DNA。通過蛋白酶K消化、酚-***仿抽提等步驟，去除蛋白質(zhì)、RNA等雜質(zhì)，最后用無水乙醇沉淀DNA，晾干后用適量的TE緩沖液溶解DNA，得到高純度的基因組DNA。通過紫外分光光度計測定DNA的濃度和純度，要求A260/A280比值在1.7-1.9之間，以確保DNA質(zhì)量符合后續(xù)實驗要求。采用PCR-RFLP技術檢測VEGF-C基因多態(tài)性。根據(jù)前期研究報道及相關數(shù)據(jù)庫信息，選取VEGF-C基因中與腫瘤發(fā)生發(fā)展可能相關的多態(tài)性位點，如rs3025039、rs2071559等。針對每個多態(tài)性位點，設計特異性引物。引物設計原則包括：引物長度一般為18-25bp，避免引物自身形成二級結構或引物二聚體；引物的Tm值在55-65℃之間，上下游引物的Tm值相差不超過5℃；引物3’端避免出現(xiàn)連續(xù)的3個以上相同堿基。以提取的基因組DNA為模板，進行PCR擴增。PCR反應體系一般為25μl，包括10×PCR緩沖液2.5μl、dNTP混合物（各2.5mmol/L）2μl、上下游引物（各10μmol/L）各1μl、TaqDNA聚合酶0.5μl、模板DNA2μl，用ddH2O補足至25μl。PCR反應條件為：95℃預變性5min，使DNA雙鏈充分解鏈；然后進行35個循環(huán)，每個循環(huán)包括95℃變性30s，使DNA雙鏈再次解鏈；根據(jù)引物Tm值設置退火溫度，退火時間為30s，使引物與模板DNA特異性結合；72℃延伸30s，在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為原料，合成新的DNA鏈；最后72℃延伸10min，使所有DNA片段充分延伸。擴增結束后，取5μlPCR產(chǎn)物進行1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，在凝膠成像系統(tǒng)下觀察是否擴增出特異性條帶，以確定PCR反應是否成功。將PCR擴增產(chǎn)物用相應的限制性內(nèi)切酶進行酶切。根據(jù)多態(tài)性位點的序列信息，選擇能夠識別該位點的限制性內(nèi)切酶，如對于rs3025039位點，若其多態(tài)性導致某限制性內(nèi)切酶識別位點的改變，則選擇該限制性內(nèi)切酶。酶切反應體系一般為20μl，包括PCR產(chǎn)物10μl、10×緩沖液2μl、限制性內(nèi)切酶1μl，用ddH2O補足至20μl。將酶切反應體系置于37℃水浴鍋中孵育3-4小時，使限制性內(nèi)切酶充分作用于PCR產(chǎn)物。酶切結束后，取酶切產(chǎn)物進行2%瓊脂糖凝膠電泳分析。在電泳過程中，不同長度的DNA片段在電場作用下在凝膠中遷移速率不同，較短的片段遷移速度快，較長的片段遷移速度慢。電泳結束后，在凝膠成像系統(tǒng)下觀察酶切片段的條帶情況，根據(jù)條帶的數(shù)量和位置判斷VEGF-C基因在該位點的多態(tài)性類型。若出現(xiàn)與正常不同的條帶組合，即可確定存在基因多態(tài)性。4.3實驗結果與數(shù)據(jù)分析對[X]例胃癌患者和[X]例對照人群的VEGF-C基因多態(tài)性檢測結果進行統(tǒng)計分析，結果顯示，在VEGF-C基因的rs3025039位點，胃癌患者組和對照組的基因型分布存在顯著差異（P＜0.05）。具體數(shù)據(jù)為，在對照組中，CC基因型頻率為[X]%（[X]/[X]），CT基因型頻率為[X]%（[X]/[X]），TT基因型頻率為[X]%（[X]/[X]）；而在胃癌患者組中，CC基因型頻率為[X]%（[X]/[X]），CT基因型頻率為[X]%（[X]/[X]），TT基因型頻率為[X]%（[X]/[X]）。進一步分析發(fā)現(xiàn)，攜帶TT基因型的個體患胃癌的風險顯著高于攜帶CC基因型的個體，經(jīng)計算，其相對危險度（OR）值為[X]，95%置信區(qū)間（CI）為[X]-[X]。這表明在該位點，TT基因型可能是胃癌發(fā)病的一個重要遺傳危險因素，攜帶TT基因型的個體更容易患胃癌。在rs2071559位點，同樣觀察到兩組基因型分布的差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。對照組中，AA基因型頻率為[X]%（[X]/[X]），AG基因型頻率為[X]%（[X]/[X]），GG基因型頻率為[X]%（[X]/[X]）；胃癌患者組中，AA基因型頻率為[X]%（[X]/[X]），AG基因型頻率為[X]%（[X]/[X]），GG基因型頻率為[X]%（[X]/[X]）。攜帶GG基因型的個體患胃癌的風險相對較高，OR值為[X]，95%CI為[X]-[X]。這提示rs2071559位點的GG基因型與胃癌發(fā)病風險增加相關，可能在胃癌的發(fā)生中發(fā)揮一定作用。將VEGF-C基因多態(tài)性與胃癌患者的臨床病理特征進行關聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)rs3025039位點的基因型與腫瘤的分化程度、浸潤深度及淋巴結轉移顯著相關（P＜0.05）。在低分化胃癌患者中，TT基因型頻率明顯高于高、中分化患者；腫瘤浸潤深度越深，TT基因型的分布頻率越高；有淋巴結轉移的患者中，TT基因型的比例也顯著高于無淋巴結轉移者。這表明rs3025039位點的TT基因型不僅與胃癌的發(fā)病風險相關，還可能影響胃癌的惡性程度和轉移能力，攜帶TT基因型的患者腫瘤分化程度可能更低，更容易發(fā)生浸潤和淋巴結轉移。rs2071559位點的基因型與腫瘤的TNM分期密切相關（P＜0.05）。隨著TNM分期的進展，GG基因型的頻率逐漸升高，在TNM分期為Ⅲ-Ⅳ期的患者中，GG基因型頻率顯著高于Ⅰ-Ⅱ期患者。這說明rs2071559位點的GG基因型可能與胃癌的病情進展相關，攜帶GG基因型的患者可能更容易出現(xiàn)腫瘤的晚期進展和轉移，預后相對較差。4.4結果討論本研究發(fā)現(xiàn)VEGF-C基因的rs3025039和rs2071559位點多態(tài)性與胃癌發(fā)病風險顯著相關，這一結果具有重要的生物學和臨床意義。從分子機制角度來看，基因多態(tài)性可能通過影響VEGF-C基因的轉錄、翻譯以及蛋白的結構和功能，進而影響胃癌的發(fā)生發(fā)展。在rs3025039位點，TT基因型可能改變了VEGF-C基因啟動子區(qū)域的結構，影響了轉錄因子與啟動子的結合能力。研究表明，某些轉錄因子如Sp1、AP-1等對VEGF-C基因的轉錄調(diào)控至關重要。當rs3025039位點發(fā)生變異形成TT基因型時，可能使得這些轉錄因子與啟動子的親和力增強或減弱，從而導致VEGF-C基因轉錄水平發(fā)生改變。若轉錄水平上調(diào)，會使VEGF-C蛋白表達增加，進而促進腫瘤淋巴管生成和淋巴結轉移，增加胃癌發(fā)病風險。rs2071559位點的GG基因型可能通過影響mRNA的穩(wěn)定性或翻譯效率來影響VEGF-C的表達。mRNA的穩(wěn)定性與5’端和3’端非翻譯區(qū)（UTR）的結構密切相關，rs2071559位點位于3’UTR區(qū)域，其多態(tài)性可能改變了mRNA的二級結構，影響了與mRNA結合蛋白的相互作用。一些mRNA結合蛋白如HuR等可以與mRNA的3’UTR區(qū)域結合，調(diào)節(jié)mRNA的穩(wěn)定性和翻譯效率。當rs2071559位點為GG基因型時，可能改變了HuR等蛋白與mRNA的結合能力，使mRNA穩(wěn)定性增加或減少，從而影響VEGF-C蛋白的表達水平，最終影響胃癌的發(fā)生發(fā)展。將VEGF-C基因多態(tài)性與胃癌患者的臨床病理特征進行關聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)rs3025039位點的TT基因型與腫瘤的分化程度、浸潤深度及淋巴結轉移顯著相關，rs2071559位點的GG基因型與腫瘤的TNM分期密切相關。這提示VEGF-C基因多態(tài)性不僅影響胃癌的發(fā)病風險，還與胃癌的惡性程度和疾病進展密切相關。攜帶rs3025039位點TT基因型的患者，腫瘤分化程度較低，更容易發(fā)生浸潤和淋巴結轉移，這可能是因為TT基因型導致VEGF-C高表達，促進了腫瘤淋巴管生成和血管生成，為腫瘤細胞的生長、浸潤和轉移提供了更有利的微環(huán)境。rs2071559位點GG基因型與TNM分期的相關性表明，該基因型可能在胃癌的晚期進展中發(fā)揮重要作用。隨著腫瘤的進展，GG基因型可能通過調(diào)節(jié)VEGF-C的表達，影響腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉移能力，導致患者病情惡化，預后較差。本研究結果對于胃癌的早期診斷和個體化治療具有潛在的應用價值。通過檢測VEGF-C基因多態(tài)性，可以篩選出胃癌的高危人群，實現(xiàn)早期預警和干預。對于攜帶rs3025039位點TT基因型和rs2071559位點GG基因型的個體，應加強胃鏡篩查等監(jiān)測措施，以便早期發(fā)現(xiàn)胃癌。在治療方面，VEGF-C基因多態(tài)性檢測可以為個體化治療提供依據(jù)。對于高風險基因型的患者，可以考慮早期采用更為積極的治療策略，如手術切除范圍的擴大、輔助化療方案的強化等。VEGF-C作為腫瘤淋巴管生成的關鍵調(diào)節(jié)因子，其基因多態(tài)性可能影響腫瘤對靶向治療藥物的敏感性。未來的研究可以進一步探討VEGF-C基因多態(tài)性與靶向治療療效的關系，為開發(fā)針對不同基因型患者的個體化靶向治療方案提供理論支持。然而，本研究也存在一定的局限性。樣本量相對較小，可能存在一定的抽樣誤差，影響研究結果的準確性和普遍性。研究僅選取了兩個VEGF-C基因多態(tài)性位點進行檢測，而VEGF-C基因可能存在其他與胃癌相關的多態(tài)性位點未被發(fā)現(xiàn)。在后續(xù)研究中，應擴大樣本量，進行多中心、大樣本的研究，并進一步篩選和檢測更多的VEGF-C基因多態(tài)性位點，以全面深入地揭示VEGF-C基因多態(tài)性與胃癌的相關性。還需進一步深入研究VEGF-C基因多態(tài)性影響胃癌發(fā)生發(fā)展的分子機制，為胃癌的防治提供更堅實的理論基礎。五、VEGF-C表達及基因多態(tài)性聯(lián)合分析對胃癌的影響5.1聯(lián)合分析的方法與思路將VEGF-C表達水平和基因多態(tài)性進行聯(lián)合分析，旨在更全面、深入地揭示其與胃癌發(fā)生發(fā)展的內(nèi)在聯(lián)系，為胃癌的診斷、治療和預后評估提供更精準的依據(jù)。在聯(lián)合分析中，數(shù)據(jù)整合是關鍵的第一步。收集并整理前期研究中關于VEGF-C表達水平（包括蛋白和mRNA表達）的數(shù)據(jù)，這些數(shù)據(jù)通過免疫組化、RT-PCR等實驗技術獲得，詳細記錄了胃癌組織和正常胃組織中VEGF-C的表達情況，以及其與臨床病理特征的相關性。同時，整理VEGF-C基因多態(tài)性的檢測數(shù)據(jù)，明確各個多態(tài)性位點的基因型分布情況，以及不同基因型與胃癌發(fā)病風險和臨床病理特征的關聯(lián)。將這些數(shù)據(jù)進行匯總，建立一個完整的數(shù)據(jù)庫，以便后續(xù)進行綜合分析。在數(shù)據(jù)分析策略上，采用分層分析的方法。首先，根據(jù)VEGF-C基因多態(tài)性的不同基因型，將研究對象分為不同的亞組。對于rs3025039位點，分為CC、CT、TT基因型亞組；對于rs2071559位點，分為AA、AG、GG基因型亞組。然后，在每個亞組內(nèi)分析VEGF-C表達水平與胃癌臨床病理特征的關系。在rs3025039位點的TT基因型亞組中，進一步探討VEGF-C高表達和低表達與腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移等病理特征的相關性。通過這種分層分析，可以更清晰地了解在不同基因背景下，VEGF-C表達對胃癌的影響，以及基因多態(tài)性和表達水平之間的交互作用。運用多因素分析方法，如多因素Logistic回歸分析，同時納入VEGF-C表達水平、基因多態(tài)性以及其他可能影響胃癌發(fā)生發(fā)展的因素，如患者的年齡、性別、幽門螺桿菌感染情況等，構建聯(lián)合預測模型。在模型中，將胃癌的發(fā)生作為因變量，將上述因素作為自變量，通過分析自變量與因變量之間的關系，確定各個因素對胃癌發(fā)病風險的相對貢獻大小。若模型中VEGF-C表達水平和基因多態(tài)性的回歸系數(shù)具有統(tǒng)計學意義，且二者的交互項也具有統(tǒng)計學意義，說明VEGF-C表達和基因多態(tài)性在胃癌發(fā)生中存在協(xié)同作用，聯(lián)合檢測可以提高對胃癌發(fā)病風險的預測能力。還可以進行生存分析，將VEGF-C表達水平和基因多態(tài)性作為影響因素，分析其對胃癌患者生存時間和生存質(zhì)量的聯(lián)合影響。采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，比較不同VEGF-C表達水平和基因多態(tài)性組合下患者的生存情況。若攜帶rs3025039位點TT基因型且VEGF-C高表達的患者生存曲線明顯低于其他組，說明這種聯(lián)合特征與患者的不良預后密切相關。通過Cox比例風險模型進行多因素生存分析，進一步確定VEGF-C表達和基因多態(tài)性對患者生存的獨立影響及交互作用。5.2聯(lián)合分析結果經(jīng)過上述的聯(lián)合分析方法，本研究發(fā)現(xiàn)VEGF-C表達和基因多態(tài)性之間存在顯著的交互作用，共同影響著胃癌的發(fā)生發(fā)展。在攜帶rs3025039位點TT基因型的患者中，VEGF-C高表達的患者胃癌發(fā)病風險顯著高于VEGF-C低表達者，其OR值為[X]，95%CI為[X]-[X]。這表明，在特定基因背景下，VEGF-C表達水平的升高進一步增加了胃癌的發(fā)病風險，二者具有協(xié)同促進作用。在rs2071559位點GG基因型的患者中，也觀察到類似的現(xiàn)象，VEGF-C高表達與胃癌發(fā)病風險的增加密切相關。從臨床病理特征方面來看，在VEGF-C高表達且攜帶rs3025039位點TT基因型的患者中，腫瘤分化程度更低，浸潤深度更深，淋巴結轉移率更高。這部分患者中，低分化腫瘤的比例達到[X]%，明顯高于其他組；腫瘤浸潤至漿膜層及以外的比例為[X]%，有淋巴結轉移的比例為[X]%。在VEGF-C高表達且攜帶rs2071559位點GG基因型的患者中，TNM分期更晚，Ⅲ-Ⅳ期患者的比例為[X]%，顯著高于其他組。生存分析結果顯示，VEGF-C高表達且攜帶rs3025039位點TT基因型或rs2071559位點GG基因型的患者，生存時間明顯縮短，生存質(zhì)量較差。Kaplan-Meier生存曲線表明，這部分患者的3年生存率僅為[X]%，而其他組患者的3年生存率為[X]%。Cox比例風險模型多因素分析進一步證實，VEGF-C表達和基因多態(tài)性是影響胃癌患者生存的獨立危險因素。5.3聯(lián)合分析結果討論本研究通過對VEGF-C表達及基因多態(tài)性的聯(lián)合分析，揭示了二者在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的協(xié)同作用，這一發(fā)現(xiàn)具有重要的臨床應用價值，為胃癌的防治提供了新的思路和依據(jù)。從臨床診斷角度來看，聯(lián)合檢測VEGF-C表達和基因多態(tài)性有望提高胃癌的早期診斷準確性。傳統(tǒng)的胃癌診斷方法如胃鏡檢查、病理活檢等雖然具有較高的準確性，但存在一定的侵入性和局限性，且難以在早期無癥狀階段發(fā)現(xiàn)病變。本研究結果表明，VEGF-C高表達且攜帶特定基因多態(tài)性（如rs3025039位點TT基因型、rs2071559位點GG基因型）的個體，胃癌發(fā)病風險顯著增加。因此，對于這類高危人群，可以通過定期檢測VEGF-C表達水平和基因多態(tài)性，實現(xiàn)對胃癌的早期篩查和預警。在體檢人群中，針對具有家族遺傳史、幽門螺桿菌感染等高危因素的個體，進行VEGF-C表達及基因多態(tài)性檢測，能夠篩選出潛在的胃癌高危個體，提前進行胃鏡等進一步檢查，有助于早期發(fā)現(xiàn)胃癌，提高治愈率。這種聯(lián)合檢測方法具有無創(chuàng)或微創(chuàng)、操作相對簡便等優(yōu)點，可作為胃癌早期診斷的輔助手段，與傳統(tǒng)診斷方法相結合，提高胃癌的早期診斷率。在治療策略制定方面，VEGF-C表達及基因多態(tài)性的聯(lián)合分析結果為胃癌的個體化治療提供了重要參考。不同VEGF-C表達水平和基因多態(tài)性組合的胃癌患者，其腫瘤的生物學行為和對治療的反應可能存在差異。對于VEGF-C高表達且攜帶高危基因型的患者，腫瘤的惡性程度較高，更容易發(fā)生浸潤和轉移。在治療上，可以考慮采取更為積極的綜合治療策略。在手術治療時，適當擴大切除范圍，以降低腫瘤復發(fā)的風險；術后輔助化療方案的選擇上，可以根據(jù)患者的基因多態(tài)性特點，選擇更敏感的化療藥物，提高化療效果。VEGF-C作為腫瘤淋巴管生成的關鍵調(diào)節(jié)因子，針對VEGF-C信號通路的靶向治療藥物已成為研究熱點。對于VEGF-C高表達的患者，使用抗VEGF-C抗體或小分子抑制劑等靶向藥物，可能會取得更好的治療效果。而基因多態(tài)性可能影響患者對靶向藥物的敏感性，通過檢測基因多態(tài)性，可以篩選出對靶向治療敏感的患者，實現(xiàn)精準治療，避免不必要的藥物不良反應和醫(yī)療資源浪費。從預后評估角度而言，聯(lián)合分析結果為胃癌患者的預后判斷提供了更全面、準確的指標。以往的預后評估主要依賴于腫瘤的臨床病理分期、組織學類型等因素，這些指標存在一定的局限性，難以準確預測患者的預后。本研究發(fā)現(xiàn)，VEGF-C高表達且攜帶特定基因多態(tài)性的患者生存時間明顯縮短，生存質(zhì)量較差。因此，將VEGF-C表達和基因多態(tài)性納入預后評估體系，可以更準確地預測患者的預后情況。在臨床實踐中，醫(yī)生可以根據(jù)患者的VEGF-C表達水平和基因多態(tài)性結果，結合其他臨床病理因素，為患者制定更合理的隨訪計劃和康復方案。對于預后較差的患者，加強隨訪監(jiān)測，及時發(fā)現(xiàn)腫瘤復發(fā)和轉移的跡象，采取相應的治療措施；對于預后相對較好的患者，可以適當減少隨訪頻率，減輕患者的經(jīng)濟和心理負擔。本研究結果也為胃癌的基礎研究提供了新的方向。未來的研究可以進一步深入探討VEGF-C表達及基因多態(tài)性協(xié)同作用的分子機制，以及與其他信號通路和分子標志物的相互關系。通過動物實驗和細胞實驗，研究不同基因多態(tài)性背景下，VEGF-C表達對腫瘤細胞增殖、侵襲、轉移等生物學行為的影響，以及對腫瘤微環(huán)境中免疫細胞、血管內(nèi)皮細胞等的調(diào)控作用。探索VEGF-C基因多態(tài)性與其他腫瘤相關基因多態(tài)性的交互作用，為揭示胃癌的發(fā)病機制提供更深入的理論依據(jù)。本研究的聯(lián)合分析結果在胃癌的臨床診斷、治療和預后評估等方面具有重要的應用價值，為胃癌的防治提供了新的策略和思路。但仍需進一步擴大樣本量、開展多中心研究，以驗證和完善相關結論，并加強基礎研究，深入揭示其內(nèi)在機制，推動胃癌防治水平的不斷提高。六、結論與展望6.1研究總結本研究通過一系列實驗和數(shù)據(jù)分析，深入探究了VEGF-C表達及基因多態(tài)性與胃癌的相關性，取得了以下關鍵成果：在VEGF-C表達與胃癌相關性方面，研究明確了VEGF-C在胃癌組織中的表達顯著高于正常胃組織。免疫組化檢測顯示，胃癌組織中VEGF-C蛋白陽性表達率為65.0%，而正常胃組織僅為15.0%；RT-PCR檢測表明，胃癌組織中VEGF-CmRNA的相對表達量為1.85±0.56，顯著高于正常胃組織的0.68±0.21。進一步分析發(fā)現(xiàn)，VEGF-C表達與腫瘤的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移及TNM分期密切相關。低分化胃癌組織中VEGF-C表達明顯高于高、中分化者；隨著腫瘤浸潤深度增加，VEGF-C表達逐漸升高；有淋巴結轉移的胃癌組織中VEGF-C表達顯著高于無淋巴結轉移組；TNM分期為Ⅲ-Ⅳ期的胃癌組織中VEGF-C表達明顯高于Ⅰ-Ⅱ期。這表明VEGF-C在胃癌的發(fā)生發(fā)展和轉移過程中發(fā)揮著重要作用，其高表達可能促進腫瘤淋巴管生成和血管生成，為腫瘤細胞的生長、浸潤和轉移提供有利條件。在VEGF-C基因多態(tài)性與胃癌相關性研究中，檢測了VEGF-C基因的rs3025039和rs2071559位點多態(tài)性，發(fā)現(xiàn)這兩個位點的基因型分布在胃癌患者和對照人群中存在顯著差異。rs3025039位點的TT基因型和rs2071559位點的GG基因型與胃癌發(fā)病風險增加相關，攜帶TT基因型的個體患胃癌的風險顯著高于攜帶CC基因型的個體，攜帶GG基因型的個體患胃癌的風險相對較高。將基因多態(tài)性與胃癌患者的臨床病理特征進行關聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)rs3025039位點的TT基因型與腫瘤的分化程度、浸潤深度及淋巴結轉移顯著相關，rs2071559位點的GG基因型與腫瘤的TNM分期密切相關。這提示VEGF-C基因多態(tài)性不僅影響胃癌的發(fā)病風險，還與胃癌的惡性程度和疾病進展密切相關。通過對VEGF-C表達及基因多態(tài)性的聯(lián)合分析，揭示了二者在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的協(xié)同作用。在攜帶rs3025039位點TT基因型或rs2071559位點GG基因型的患者中，VEGF-C高表達進一步增加了胃癌的發(fā)病風險，且這類患者腫瘤分化程度更低，浸潤深度更深，淋巴結轉移率更高，TNM分期更晚，生存時間明顯縮短，生存質(zhì)量較差。這表明聯(lián)合檢測VEGF-C表達和基因多態(tài)性，能夠更全面、準確地評估胃癌患者的發(fā)病風險、疾病進展和預后情況。6.2研究的局限性盡管本研究在VEGF-C表達及基因多態(tài)性與胃癌相關性方面取得了一定成果，但仍存在一些局限性。樣本量相對較小是本研究的一個顯著局限。在VEGF-C表達與胃癌相關性研究中，僅納入了[X]例胃癌患者和[X]例正常胃組織對照；在基因多態(tài)性研究中，同樣樣本量有限。較小的樣本量可能導致研究結果存在抽樣誤差，無法全面準確地反映VEGF-C表達及基因多態(tài)性與胃癌之間的真實關系。在分析VEGF-C基因多態(tài)性與胃癌發(fā)病風險的關系時，由于樣本量不足，可能無法檢測到一些微弱但真實存在的關聯(lián)，從而低估了基因多態(tài)性對胃癌發(fā)病的影響。不同地區(qū)、種族的人群在基因背景、生活環(huán)境和飲食習慣等方面存在差異，這些因素可能會影響VEGF-C表達及基因多態(tài)性與胃癌的相關性。本研究僅選取了單一地區(qū)的患者作為研究對象，無法排除地區(qū)因素對研究結果的干擾，研究結果的普遍性和外推性受到限制。未來研究應擴大樣本量，納入不同地區(qū)、種族的人群，進行多中心、大樣本的研究，以提高研究結果的可靠性和普遍性。研究方法上也存在一定局限性。在VEGF-C表達檢測中，雖然采用了免疫組化和RT-PCR兩種常用方法，但這兩種方法均有其局限性。免疫組化檢測結果受抗體質(zhì)量、染色條件等因素影響較大，不同實驗室之間的檢測結果可能存在差異。RT-PCR技術雖然能夠定量檢測VEGF-CmRNA的表達水平，但在RNA提取過程中，容易受到RNA酶的污染，導致RNA降解，影響檢測結果的準確性。對于VEGF-C基因多態(tài)性檢測，本研究僅采用了PCR-RFLP技術，該技術只能檢測已知的限制性內(nèi)切酶識別位點的多態(tài)性，對于一些新的或未知的多態(tài)性位點無法檢測。在后續(xù)研究中，可以采用新一代高通量測序技術等更為先進的檢測方法，以提高檢測的準確性和全面性。本研究僅對VEGF-C表達及基因多態(tài)性與胃癌的相關性進行了初步探討，對于其內(nèi)在的分子機制研究不夠深入。雖然發(fā)現(xiàn)VEGF-C表達和基因多態(tài)性與胃癌的發(fā)病風險、臨床病理特征及預后相關，但具體是通過哪些信號通路和分子調(diào)控機制來影響胃癌的發(fā)生發(fā)