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DB13DB13/T2276—2015食用菌母種質量評價及復壯方法2015-12-25發布2016-2-1實施河北省質量技術監督局發布I本標準主要起草人：王立安、張金秀、姚清國、劉紅1本標準規定了食用菌母種的質量評價、復壯及檢測方法。2規范性引用文件NY/T528-2010食用菌菌種生產技術規程NY/T1845-2010食用菌菌種區NY/T1097-2006食用菌菌種真實性鑒定酯酶同工酶電泳法24母種質量評價4.1培養基選擇根據母種特性，按NY/T528-2010相關要4.2接種及培養4.3評價5母種復壯方法5.1提純復壯5.1.1母種來源5.1.2接種培養板培養基中，每一平板可接3～4塊。按菌種最適溫度要求置恒溫培養箱中培養7d～10d后，觀察菌落形5.1.3復壯操作35.1.4菌種保藏5.2原生質體脫毒復壯5.2.1母種來源5.2.2菌絲體制備5.2.3原生質體制備30℃~34℃水浴，每30min搖晃一次。3h之后，加入等體積0.6M甘露醇，用400目細胞篩過濾，將濾液收5.2.4原生質體再生用0.6M甘露醇將原生質體懸浮，調整生質體懸液濃度到1×107個/mL。稀釋后吸取1于適合該菌種生長的最適平板培養基上，于恒溫培養箱中最適溫度下培養5.2.5復壯母種篩選置顯微鏡下觀察。具鎖狀聯合結構的菌絲即為脫毒復壯試驗6復壯母種的檢測方法4后，每隔24h測量菌落直徑，連測3d～5d，計算并統計菌絲平均生長速度。復壯后菌絲平均生長速度應置恒溫培養箱中培養，7d～10d后觀察菌絲生長狀況。復壯后母種與未復壯的母種相比，菌塊萌發快并迅速向培養料中生長伸展，吃料能力應明顯增5A.1常用母種培養基配方：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊A.1.2CPDA培養基完全融化。過濾。用90℃~100℃水補足至1000mL。趁熱分裝試管或三角瓶，封口、包裝后，121℃滅菌PDA、CPDA+木屑煮汁：在PDA、CPDA.1.3麥粒、麥麩浸汁培養基續加熱、攪拌，直至瓊脂完全融化，過濾。90℃~100℃水補足至1000mL。趁熱分裝試管或三角瓶，封A.2常用原種和栽培種培養基A.2.1谷粒培養基拌勻后分裝。121℃~124℃滅菌2h～2.5h。A.2.2棉籽殼培養基配方：棉籽殼84%，麥麩（或米糠）15%，石膏1%，含水量60%6A.2.3木屑培養基逐漸加入糖水

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