1301I 24.4取樣 4 4 4 4 4 5 6 6 6本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定1蜜蜂微孢子蟲病防治技術(shù)規(guī)程本文件適用于蜜蜂微孢子蟲病癥狀、形態(tài)及分子生物學(xué)診斷和綜3.1是一種侵染成年蜜蜂中腸上皮細胞引起蜜蜂發(fā)病的致病性真菌，包括蜜蜂微孢子蟲和東方蜜蜂微3.2指為殺滅包括蜜蜂疫病病原體或寄生蟲而采取的一種措施，適用于可能曾被直接或間接污染的場3.34診斷與鑒定當觀察到蜂群出現(xiàn)典型癥狀時應(yīng)遵循先通過個體癥狀觀察初步確診，再取樣后通過顯微鏡鑒定即可確診。如需對沒有明顯癥狀的蜂群進行早期診斷或例行蜂場4.2癥狀24.2.1蜂群癥狀4.2.1.1急性重癥感染a)蜂群糞便：蜂箱外壁或周圍地面會出現(xiàn)大量棕色b)蜂群表現(xiàn)：在蜂巢入口處及蜂場地面，會見到患病爬行的和死去的蜜蜂。4.2.1.2輕度感染4.2.2蜜蜂個體癥狀a)病蜂活動狀況：患病蜜蜂表現(xiàn)出行動遲滯，腹部膨大，飛翔無力等癥狀。4.3實驗室鑒定4.3.1顯微鏡鑒定4.3.1.1樣品處理將采集的蜜蜂樣本，分離腹部置于研缽中，加入5mL～10mL蒸餾水研磨。取研磨的4.3.1.2鑒定4.3.1.2.1初診如在視野中見到長約5μm～7μm，寬約34.3.1.2.2鑒別按SN/T1683相關(guān)方法與酵母、真注：緩沖液最終用ddH2O將pH值調(diào)至8.0。3NaCl注：緩沖液最終用ddH2O將pH值調(diào)至8.0。），4.3.2.3擴增產(chǎn)物的分離與鑒定4.3.2.4診斷結(jié)果與辨別通過以下凝膠中電泳條帶的位置可最終判別蜜蜂是否感染微孢子蟲病原b)當凝膠中在218bp位置有明顯條帶時即可認為樣品中44,4取樣4.4.1取樣數(shù)量為保證所收集的樣品具有代表性，應(yīng)按以下標準確定4.4.2取樣方法a)非定量診斷時，直接從蜂巢入口附近選取具有典型癥狀的成年蜜蜂。4.4.3樣品保存5.2飼養(yǎng)管理5.2.1飼料5.2.1.1春繁飼料春繁期飼喂蜂蜜花粉時，不使用來歷不明的花粉，5.2.1.2越冬飼料a)飼喂越冬飼料前應(yīng)對蜂群內(nèi)貯存的飼料進行顯微鏡檢查，如巢脾中的蜂蜜或花粉中發(fā)現(xiàn)有微b)補飼選擇蜂蜜或白糖；5.2.2預(yù)防消毒在飼養(yǎng)環(huán)節(jié)中應(yīng)通過以下措施以保證蜂群的a)養(yǎng)蜂器具：春繁前應(yīng)對養(yǎng)蜂器具進行修整，巢框、巢脾及起刮刀等養(yǎng)蜂器具用2%～3%氫氧化c)病死蜂：隨時收集蜂場地面的病蜂及死蜂，集中焚燒或深埋，5.3監(jiān)測5每年從去除越冬包裝后開始，直至下次越冬包裝前，應(yīng)至少每3個月對蜂群進行1次蜜蜂微孢子蟲5.4防治5.4.1預(yù)防結(jié)合蜂群的飼喂，將1g食品級檸檬酸粉劑加入1000g5.4.2治療脾，每張脾100mL。大流蜜期內(nèi)及之前1個月內(nèi)不得6劑量(μL）3—62——CGGCGACGATGTGATATGAAACCCGGTCATTCTCAAACAA（Nosema