第37講微生物技術第十一單元生物技術實踐[考綱要求]1.微生物的分離和培養。2.某種微生物數量的測定。3.培養基對微生物的選擇作用。4.利用微生物進行發酵來生產特定的產物以及微生物在其他方面的應用。考點一培養基對微生物的選擇作用及微生物的純培養考點二微生物的利用矯正易錯強記長句重溫高考演練模擬內容索引課時作業培養基對微生物的選擇作用及微生物的純培養考點一一、培養基的制備1.培養基的配制和滅菌(1)實驗原理①培養基a.含義：人工配制的適合微生物生長繁殖或積累代謝產物的

，用以培養、分離、鑒定和保存各種微生物。b.成分：一般包括水分、碳源、氮源、微量元素和

等。知識梳理營養基質無機鹽②選擇培養基a.選擇依據：不同種類微生物的生長繁殖對營養的要求

。b.選擇途徑：人為控制培養基的

、

、氮源、滲透壓等條件。c.選擇結果：使選擇的培養基利于某類或某種微生物的生長，而不利于

微生物的生存，可以達到分離、培養不同微生物的目的。③滅菌a.滅菌原因：及時殺滅培養基中的

，同時防止

造成的培養基營養成分的改變。b.常用的滅菌方法：

。不同碳源pH微生物其他微生物大量繁殖高壓蒸汽滅菌(2)方法步驟培養基的制作流程為：稱量→

→

→分裝→

→滅菌→

。2.培養基的種類培養基按物理狀態可分為

培養基和

培養基。溶化加塞和包扎調pH擺斜面及倒平板液體固體二、培養基對微生物的選擇作用1.探究不同培養基中生長的優勢菌群探究程序：問題→

→

→實施實驗→

→表達交流。2.菌落(1)含義：將微生物通過某種方法接種到適于生長的

表面上，在適宜的

下培養一段時間后，單個的

或

生長繁殖成的一個個肉眼可見的細胞群體。作出假設得出結論設計實驗固體培養基溫度菌體孢子(2)細菌與酵母菌的菌落特征細菌菌落的共同特征為：

、

、易用

挑起，菌落各部位

一致。酵母菌菌落外形上與細菌極為相似，但比細菌菌落

，顏色也較

。霉菌菌落較

，常呈絨毛狀、絮狀或蜘蛛網狀，一般比

菌落大幾倍到幾十倍。(3)優勢菌群的培養基細菌生長需要的氮源高(C/N為

)，pH中性或微堿性(pH

)，因此培養細菌常采用

培養基。酵母菌和霉菌生長所需的碳源含量高(C/N為

)，pH偏酸性(pH

)，因此分離真菌常采用

培養基(簡稱PDA)。濕潤接種環黏稠顏色大而厚疏松細菌單調4∶17.2～7.6牛肉膏蛋白胨16∶15～6馬鈴薯葡萄糖瓊脂三、實驗：微生物的分離與純化(一)實驗原理1.分離的依據：微生物的分離與純化就是將待檢測微生物樣品通過

或

接種在固體培養基上，樣品中的每一個

或

都可以生長繁殖形成單個菌落。2.純化的依據：將

接種到

培養基上，經培養后，即可得到一個微生物的純種。劃線細胞涂布單個菌落孢子斜面(二)方法步驟1.微生物的分離(1)稀釋：用1mL無菌吸管吸取1mL

，加入到盛有9mL

的大試管中，

，然后用無菌吸管從此試管中吸取1mL加入另一支盛有9mL無菌水的試管中，混合均勻，依次類推制成10－1、10－2、10－3、10－4、10－5、10－6系列稀釋度的大腸桿菌稀釋液。大腸桿菌培養液充分混勻無菌水(2)劃線或涂布①平板劃線分離法：在近火焰處，左手拿

，右手拿

，挑取大腸桿菌培養液一環在

上劃線，常用的劃線方法有

和_________兩種。劃線完畢后，蓋上

，做好

。②涂布分離法：取3個平板，底面分別用記號筆寫上

三種稀釋度，然后用無菌吸管分別吸取相應稀釋度的稀釋液各

，放入已標記好的平板上，用

在培養基表面輕輕地涂布均勻，室溫下靜置

min，使菌液吸附進

。(3)培養：將劃線或涂布接種的平板

培養箱或溫室中37℃培養

h，即可長出單個菌落。皿底平板接種環平行劃線連續劃線培養皿蓋標記10－4、10－5、10－60.1mL無菌玻璃涂棒5～10培養基倒置于16～242.接斜面分別從培養后長出的單個菌落上挑取

，接種到

培養基上，置培養箱或溫室37℃培養

h，斜面上菌種長好后，

保存備用。少許細胞斜面244℃(1)培養基一般都含有水分、碳源、氮源和無機鹽等，有時還需要加入一些特殊的物質(

)(2)倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養基濺到皿蓋上(

)(3)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對細胞的傷害(

)(4)為了防止污染，接種環經火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落(

)(5)用涂布分離法純化大腸桿菌時，只要稀釋度足夠高，就能在培養基表面形成單個菌落(

)?？蓟A診斷√√×√×教材熱點拓展如圖是采用純化微生物培養的兩種接種方法接種后培養的效果圖，請思考：

(1)獲得圖A效果和圖B效果的接種方法分別是什么？提示

獲得效果A的接種方法為涂布分離法，獲得效果B的接種方法為平板劃線分離法。提示(2)某同學在純化土壤中的細菌時，發現培養基上的菌落連成了一片，最可能的原因是什么？應當怎樣操作才可避免此種現象？提示

最可能的原因是菌液濃度過高或劃線時在劃下一區域前未將接種環灼燒滅菌；采取的措施是增大稀釋倍數或每次劃新區域前先將接種環灼燒滅菌。(3)接種操作為什么一定要在火焰附近進行？提示

火焰附近存在著無菌區域。提示命題點一培養基及其制備方法分析1.(2018·天津一中調研)下表為某培養基的配方，下列敘述正確的是

A.從物理性質看該培養基屬于液體培養基，從用途看該培養基屬于選擇培養基B.該培養基中屬于碳源的物質主要是葡萄糖，屬于氮源的物質是蛋白胨C.該培養基缺少提供生長因子的物質D.該培養基調節合適的pH后就可以接種使用命題探究√答案解析成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊紅美藍蒸餾水含量10g10g2g0.4g0.065g1000mL解析

分析表中成分可知，該培養基中沒有凝固劑，為液體培養基，該培養基的營養成分齊全，但存在伊紅、美藍等鑒別物質，屬于鑒別培養基，A項錯誤；該培養基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是絕大多數生物最常利用的碳源，B項正確；該培養基中存在的無機鹽和蛋白胨中的某些物質可以看作是生長因子，C項錯誤；培養基調節完pH還要進行滅菌等操作后才能使用，D項錯誤。2.(2017·濟寧模擬)高溫淀粉酶在大規模工業生產中有很大的實用性。研究者從熱泉中篩選出了能高效生產高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如下圖所示。請據圖回答：

(1)Ⅰ號培養基從物理狀態來看，屬于固體培養基，配制時要加入

作為凝固劑，從用途來看屬于選擇培養基，應以

作為唯一碳源。解析答案瓊脂淀粉解析

固體培養基通常加入瓊脂作為凝固劑。本實驗的目的是獲得產生高溫淀粉酶的嗜熱菌，故其選擇培養基中應以淀粉作為唯一碳源。配制固體培養基的基本步驟是計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。配制培養基加熱溶化時，要注意加入瓊脂后需不斷攪拌，防止瓊脂糊底和溢出。對培養基的滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌。仔細觀察題圖可知過程，①是菌液稀釋過程，②是采用涂布分離法接種。能產生淀粉酶的部分細菌能分解利用淀粉，其菌落周圍會出現透明圈，取這樣的菌落再分離純化可獲得相應菌種，以后可以擴大培養用于生產。(2)配制固體培養基的基本步驟是

A.計算、稱量、倒平板、溶化、滅菌B.計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌C.計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板D.計算、稱量、滅菌、溶化、倒平板√答案(3)溶化時，燒杯中加入瓊脂后要不停地

，防止瓊脂糊底引起燒杯破裂。對培養基滅菌的方法一般為

。答案攪拌高壓蒸汽滅菌(4)①過程是

，②過程所使用的接種方法是

法。稀釋涂布分離(5)部分嗜熱菌在Ⅰ號培養基上生長時可釋放

分解培養基中的淀粉，在菌落周圍形成透明圈，挑選相應的菌落，接種到Ⅱ號培養基進一步分離純化后，再對菌種進行

培養。答案淀粉酶擴大1.培養基的配制原則(1)目的要明確：配制時應根據微生物的種類、培養目的等確定配制的培養基種類。(2)營養要協調：注意各種營養物質的濃度和比例。(3)pH要適宜：細菌為7.2～7.6，酵母菌和霉菌為5.0～6.0，培養不同微生物所需的pH不同。歸納整合2.微生物對主要營養物質的需求特點(1)自養型微生物所需的主要營養物質是無機鹽，碳源可來自大氣中的CO2，氮源可由含氮無機鹽提供。(2)異養型微生物所需的營養物質主要是有機物，即碳源必須由含碳有機物提供，氮源也主要是由有機物提供，部分異養型微生物也可以利用無機氮源。命題點二大腸桿菌的純化方法及過程分析3.下圖中甲是稀釋涂布平板法中的部分操作，乙是平板劃線分離法的操作結果。

下列敘述中錯誤的是

A.甲中涂布前要將玻璃涂棒灼燒，冷卻后才能取菌液B.對于濃度較高的菌液，如甲中的稀釋倍數僅為102，則所得的菌落不一定是由單一的細胞或孢子繁殖而成C.乙培養皿中所得的菌落都符合要求D.乙中的連續劃線的起點是上一次劃線的末端√答案解析解析灼燒后的玻璃涂棒如果沒有冷卻就接觸菌種，會將菌體殺死，A正確；稀釋倍數過低會導致多個菌體聚集在一起繁殖成菌落，B正確；平板劃線分離法中最后一次劃線的末端處形成的菌落才是由單一的細胞或孢子繁殖而成，這種菌落才符合要求，C錯誤；連續劃線中，除了第一次劃線外，每一次劃線的起點是上一次劃線的末端，目的是使得菌體的密度越來越小，保證最后劃線末端處的菌落是由單一的細胞或孢子繁殖而成，D正確。4.大腸桿菌是與我們日常生活聯系非常密切的細菌，請回答有關檢測飲用水中大腸桿菌的問題：(1)檢測飲用水中大腸桿菌的含量時，通常將樣品進行一系列的梯度稀釋，將不同稀釋度的水樣用玻璃涂棒分別涂布到瓊脂固體培養基的表面進行培養，然后記錄菌落數量，這種方法稱為

。判斷下面所示的4個菌落分布圖中，不可能是用該方法得到的是

。解析答案涂布分離法D解析

D中菌落分布情況為平板劃線分離法所得。為判斷培養基滅菌是否合格，本實驗需要設置對照。要判斷固體培養基是否被污染，可將未接種的培養基在適宜的溫度下放置一段時間，若發現有菌落說明培養基已被污染。消毒是指使用較溫和的物理或化學方法殺死物體表面或內部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。滅菌是指使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子。對培養基和培養器皿進行滅菌處理，對操作者的雙手需要進行清洗和用酒精消毒。(2)用上述方法統計樣本中菌落數時是否需要設置對照組？

(填“需要”或“不需要”)，其原因是需要判斷培養基

，對于固體培養基應采用的檢測方法是將

的培養基在適宜的溫度下放置一段時間，觀察培養基上是否有菌落產生。(3)在微生物培養操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養基和培養器皿進行

(填“消毒”或“滅菌”)處理；操作者的雙手需要進行清洗和

；靜止空氣中的細菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使其內蛋白質變性，還能損傷它的

的結構。答案需要是否被雜菌污染(滅菌是否合格)未接種滅菌消毒DNA(4)檢測大腸桿菌實驗結束后，使用過的培養基及其培養物必須經過______處理才能丟棄，以防止培養物的擴散。答案滅菌微生物的利用考點二知識梳理一、從土壤中分離有益微生物實驗：從土壤中分離纖維素分解菌1.實驗原理(1)反應依據：土壤中存在大量纖維素分解菌，包括真菌、細菌和放線菌等，它們可以產生

，分解和利用纖維素和半纖維素。(2)檢測依據：因此在用

作為唯一碳源的培養基中，纖維素分解菌能很好地生長，并產生

或

色素，其他微生物則不能生長。纖維素酶纖維素黃色棕綠色2.方法步驟方法一：(1)制備培養基：依據小辭典，配制依姆歇涅茨基液體培養基。(2)分裝：按每試管

分裝，然后加入7cm×1cm濾紙條，濾紙條

，且一半浸入培養基中，121℃滅菌20min。(3)制備土壤稀釋液：制備10－1、10－2、10－3、10－4、10－5的土壤稀釋液。(4)接種培養：分別吸取各稀釋度的土壤稀釋液

接種到

，每個稀釋度重復4次，置培養箱中28℃培養14d。(5)觀察：檢查各試管中濾紙條上出現的菌落和

情況。5mL緊貼內壁1mL濾紙條上濾紙顏色變化方法二：(1)制備培養基：制備依姆歇涅茨基培養基平板，在平板上鋪一張直徑略小于平板的濾紙，用少量上述液體培養基

。(2)接種培養：在濾紙上等距放8個直徑約

的土粒，蓋上培養皿蓋以

，置恒溫培養箱中28～30℃培養。(3)觀察：每隔2d觀察土粒周圍濾紙變色情況，直到濾紙顏色變化，長成

，于4℃冰箱中保存備用。潤濕10mm保持濕度菌落二、微生物對有機物質的分解1.探究纖維素分解菌是否只能分解纖維素(1)問題：分解纖維素的微生物

分解其他物質呢？(2)作出假設：假設分解纖維素的微生物還能分解其他物質，包括

、木質素、果膠等

有機物。能否淀粉大分子含碳(3)設計實驗：分組設計實驗方案，用

分解纖維素的微生物分解不同的其他物質(淀粉、果膠和木質素等)，或者用不同分解纖維素的微生物分解

物質，在實驗設計中注意設置

實驗和實驗重復等。(4)實施實驗：根據

，認真進行實驗，記錄觀察到的實驗結果。(5)得出結論：根據實驗過程分析

，得出結論。(6)表達交流。同一種同一種對照實驗設計實驗結果2.分解纖維素的微生物的意義與作用(1)在自然界

循環中具有重要意義。(2)微生物的種類繁多、分布廣、數量大，而且所起的作用也

。碳素多種多樣三、利用微生物制作食品實驗：利用微生物制作豆豉1.實驗原理(1)豆豉是用

的大豆經過納豆菌發酵制成的。納豆菌分泌的

能夠分解大豆中的蛋白質，產生小分子多肽及多種氨基酸，制成風味獨特的發酵食品。(2)在制備過程中，根據納豆菌的

對熱不敏感的特性，可采用高溫控制雜菌污染。煮熟蛋白酶芽孢2.方法步驟(1)制備豆豉菌懸液：在錐形瓶中倒入

mL開水，加入新鮮的豆豉

粒，搖勻，備用。(2)浸泡：將黃豆裝入杯中加水浸泡

左右。(3)煮豆：將浸泡過的黃豆煮20～30min，直到黃豆

。(4)接種：在容器內鋪上一塊雙層紗布，將煮好的黃豆趁熱撈入容器內，將

灑在豆子表面，用消過毒的玻璃棒快速攪拌均勻。(5)發酵：用另一塊雙層紗布蓋在豆子表面，40℃發酵15h左右。當黃豆表面長出一層

時，根據口味加入

密封保存。30～405～615h用手輕輕一掐就破即可豆豉菌懸液菌膜鹽或醬(1)選擇培養基可以鑒定某種微生物的種類(

)(2)篩選能分解尿素的細菌所利用的培養基中，尿素是唯一的氮源(

)(3)分解尿素的細菌在分解尿素時，可以將尿素轉化為氨，使得培養基的酸堿度降低(

)(4)纖維素是構成植物細胞壁的主要成分，在纖維素酶的作用下，纖維素可以水解成葡萄糖(

)(5)在篩選能分解纖維素的細菌的實驗中，選擇培養的目的是增大樣品中目的菌株的濃度(

)(6)制作豆豉要避免雜菌污染，要對原料進行高壓蒸汽滅菌(

)?？蓟A診斷×√×√√×研究人員在依姆歇涅茨基培養基平板上，篩到了幾株有棕綠色色素圈的菌落如圖1所示，并用篩選到的纖維素酶高產菌株J1和J4，在不同的溫度和pH條件下進行發酵，測得發酵液中酶活性的結果見圖2，請分析：教材熱點拓展圖1圖2(1)圖中棕綠色色素圈大小代表什么？降解纖維素能力最強的菌株是哪種？提示

棕綠色色素圈大小與纖維素酶的量和活性有關，降解纖維素能力最強的是菌株①。提示(2)結合圖2推測哪種菌株更適合用于人工瘤胃發酵？提示

J4菌株在較高溫度和酸性環境下酶的活性更高，更適合用于人工瘤胃發酵。提示命題點一選擇培養基成分及配制方法的分析1.選擇培養基是根據某一種或某一類微生物的特殊營養要求或對一些物理、化學抗性而設計的培養基。利用這種培養基可以將所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。為選擇酵母菌和硝化細菌，應選用的培養基分別為

A.伊紅美藍培養基、含青霉素的培養基B.含青霉素的培養基、含氨的無機培養基C.含氨的無機培養基、含青霉素的培養基D.含青霉素的培養基、伊紅美藍培養基命題探究答案解析√解析

酵母菌是真菌，通?？梢杂煤嗝顾氐呐囵B基進行選擇培養，因為青霉素抑制細菌生長，但不能抑制真菌生長。硝化細菌為自養型生物，能夠利用土壤中氨氧化成亞硝酸，進而將亞硝酸氧化成硝酸所釋放的能量，把無機物轉變為有機物以維持自身生命活動，利用含氨的無機培養基可進行選擇培養。(1)②中培養目的菌株的選擇培養基中應加入

作為碳源，②中不同濃度碳源的培養基

(填“影響”或“不影響”)細菌的數量，如果要測定②中活細菌數量，常采用

法。2.苯酚是工業生產排放的有毒污染物質，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細菌菌株，篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品。請據圖回答下列問題：苯酚答案解析影響涂布分離解析

選擇降解利用苯酚的細菌的培養基是以苯酚為唯一碳源的培養基；苯酚是唯一的碳源，當苯酚消耗盡時，菌株因缺少碳源而不能繼續繁殖，所以②中不同濃度的碳源會影響細菌數量；一般采用涂布分離法來測定②中活菌數目。(2)④為對照，微生物在④中不生長，在⑤中生長，④與⑤培養基的主要區別在于__________________________________________________________________；使用

法可以在⑥上獲得單菌落。采用固體平板培養細菌時進行倒置培養的原因是______________

。答案④的培養基中沒有加入苯酚作為碳源，⑤的培養基中加入了苯酚作為碳源

涂布分離法或平板劃線分離

防止冷凝后形成的水珠滴落在培養基上污染培養基解析解析

④與⑤培養基的主要區別在于④的培養基中沒有加入苯酚作為碳源，⑤的培養基中加入了苯酚作為碳源；使用涂布分離法或平板劃線分離法可以在⑥上獲得單菌落。采用固體平板培養細菌時要倒置培養，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培養基上污染培養基。(3)實驗過程中如何防止其他微生物的污染？

。答案培養基滅菌，接種環境滅菌，接種過程進行無菌操作解析解析

從制備培養基到接種與培養等全部實驗過程要無菌操作：無菌操作泛指在培養微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。獲得純凈培養物的關鍵是防止外來雜菌的入侵：a.實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒；b.將用于微生物培養的器皿、接種用具和培養基等進行滅菌；c.為避免周圍環境中微生物污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行；d.實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。選擇培養基的制作方法(1)在培養基全部營養成分具備的前提下，加入物質：依據某些微生物對某些物質的抗性，在培養基中加入某些物質，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物生長，如培養基中加入高濃度食鹽時可抑制多種細菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生長，從而可將該菌分離出來；而在培養基中加入青霉素時可抑制細菌、放線菌的生長，從而分離得到酵母菌和霉菌。規律方法(2)通過改變培養基的營養成分達到分離微生物的目的：培養基中缺乏氮源時，可分離自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而無法生存；培養基中若缺乏有機碳源則異養微生物無法生存，而自養微生物可利用空氣中的CO2制造有機物生存。(3)利用培養基的特定化學成分分離特定微生物：如當石油是唯一碳源時，可抑制不能利用石油的微生物生長，使能夠利用石油的微生物生長，從而分離出能消除石油污染的微生物。(4)通過某些特殊環境分離微生物：如在高鹽環境中可分離耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高時易失水而不能生存；在高溫環境中可分離得到耐高溫的微生物，其他微生物在高溫環境中因酶失活而無法生存。命題點二微生物的分離與計數3.下表是某同學列出的分離土壤中微生物的培養基配方，據此回答下列問題：培養基配方

KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0g將上述物質溶解后，用蒸餾水定容到1000mL(1)從作用上看，該培養基屬于

培養基，提供氮源的物質是

，細菌能利用該氮源是由于體內能合成

酶。答案選擇解析解析

題干指出表中是分離土壤中微生物的培養基配方，其中尿素是唯一氮源，能生長的菌落說明能利用尿素中的氮源，以尿素為唯一氮源的培養基可以選擇尿素分解菌，所以從用途上屬于選擇培養基。(2)在對分離的能分解尿素的細菌進行鑒定時，還需在培養基中加入

指示劑，若指示劑變

，說明有目的菌株存在。尿素解析

在對分離的能分解尿素的細菌進行鑒定時，還需在培養基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，說明有目的菌株存在。脲(催化尿素分解的)酚紅紅(3)為了測定微生物的數量，接種時應采用

法，某同學在4個培養基上分別接種稀釋倍數為106的土壤樣液0.1mL，培養后菌落數分別為180、155、176、129個，則每毫升原土壤樣液中上述微生物的數量為

個，測定的活菌數比實際活菌數

(填“低”“高”或“基本一致”)。答案1.6×109解析解析

純化微生物可以用涂布分離法和平板劃線分離法，其中涂布分離法能用于微生物的計數。1mL原土壤樣液中上述微生物數量＝(180＋155＋176＋129)÷4×106×10＝1.6×109個；涂布分離法計數，統計的數量比實際數量會偏少，原因是當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。涂布分離低4.(2018·天水一中期末)某實驗小組欲從豆油污染的土壤中篩選出高效降解脂肪的菌株。請回答：(1)在篩選過程中，應將土壤樣品稀釋液接種于以

為唯一碳源的固體培養基上，從功能上講，該培養基屬于

培養基。(2)為避免培養基污染，需將培養皿呈

狀態放置。為避免培養液中菌體濃度過高，需將培養液進行

處理。為了排除_____________

，需設置接種等量無菌水的培養基作為空白對照。答案豆油選擇倒置

梯度稀釋

實驗組中非測試因素對實驗結果的影響(培養基被污染)(3)為了篩選出菌株，可將適量的

試劑滴加在平板中的菌落周圍，洗去浮色后，如果菌落周圍的現象是____________________

，則說明此種菌能夠分泌脂肪酶。(4)純化菌種時，為了得到菌落，可采用

法接種于新的培養基平板上。(5)實驗操作應在酒精燈火焰附近進行的原因是

。答案蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)

出現透明圈(不出現橘黃色圈或紅色圈)平板劃線分離避免周圍環境中微生物的污染矯正易錯強記長句1.無菌操作技術包括消毒和滅菌，消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化學藥物消毒和紫外線消毒等；滅菌包括火焰滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。2.培養基的制備包括稱量、溶化、調pH、分裝、加塞和包扎、滅菌、倒平板等步驟，倒置平板的目的是防止培養皿蓋上的水滴滴入培養基造成污染。3.尿素分解菌和纖維素分解菌的分離都運用了選擇培養基，前者所用的培養基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培養基中纖維素是唯一的碳源。易錯警示突破選擇題下圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，請回答相關問題：

1.圖甲是利用平板劃線分離法進行微生物接種，圖乙是利用涂布分離法進行微生物接種。這兩種方法所用的接種工具分別是接種環和玻璃涂棒；對這兩種接種工具進行滅菌和消毒的方法依次是灼燒滅菌和酒精消毒。2.接種后，在固體培養基上培養細菌時為什么進行倒置培養？防止冷凝后形成的水珠滴落在培養基上污染培養基。長句應答突破簡答題3.下圖是采用上述接種方法接種后培養的效果圖解，其接種方法是圖乙(填“圖甲”或“圖乙”)。重溫高考演練模擬1231.漆酶屬于木質降解酶類，在環境修復、農業生產等領域有著廣泛用途。下圖是分離、純化和保存漆酶菌株的過程，相關敘述正確的是(多選)

A.生活污水中含有大量微生物，是分離產漆酶菌株的首選樣品B.篩選培養基中需要加入漆酶的底物，通過菌落特征挑出產漆酶的菌落C.在涂布平板上長出的菌落，再通過劃線進一步純化D.斜面培養基中含有大量營養物，可在常溫下長期保存菌株解析4答案√√解析

漆酶降解“木質”，則漆酶菌株多存在于“木質”豐富的場所，生活污水中含有大量微生物，但不一定含有產漆酶的菌株，A錯誤；產漆酶菌株可降解木質素，在篩選培養基中加入木質素可篩選產漆酶的菌株，篩選時可通過菌落特征挑出產漆酶的菌落，B正確；在涂布平板上長出的菌落可能還有其他雜菌，可再通過平板劃線法進一步純化，C正確；斜面培養基中含有大量營養物，可在低溫下長期保存菌株，D錯誤。12342.(2017·全國Ⅰ，37)某些土壤細菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉栴}：(1)有些細菌能分解尿素，有些細菌則不能，原因是前者能產生

。能分解尿素的細菌不能以尿素的分解產物CO2作為碳源，原因是_________

，但可用葡萄糖作為碳源，進入細菌體內的葡萄糖的主要作用是___________________________

(答出兩點即可)。答案脲酶解析

分解尿素的細菌是異養生物，不能利用CO2來合成有機物

為細胞生命活動提供能量，為其他有機物的合成提供原料1234解析

只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。能分解尿素的細菌是一種分解者，屬于異養型生物，不能以尿素的分解產物CO2作為碳源。能分解尿素的細菌可以用葡萄糖作為碳源，進入細菌體內的葡萄糖的主要作用是：一方面可氧化分解為細胞生命活動提供能量，另一方面其代謝中間產物可為多種有機物的合成提供原料。1234(2)為了篩選可分解尿素的細菌，在配制培養基時，應選擇

(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作為氮源，不選擇其他兩組的原因是___________________________________________________________

。答案尿素解析解析

為了篩選可分解尿素的細菌，在配制培養基時，應選擇以尿素作為唯一氮源的選擇培養基，而其他兩組都含有含氮物質NH4NO3，能分解尿素的細菌和不能分解尿素的細菌都能利用NH4NO3不能起到篩選作用。

其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細菌和不能分解尿素的細菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用1234(3)用來篩選分解尿素細菌的培養基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有

(答出兩點即可)。答案為細菌生長提供無機鹽離子，作為緩沖劑保持細胞生長過程中pH穩定解析解析

用來篩選分解尿素細菌的培養基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用：KH2PO4和Na2HPO4構成緩沖液，可維持培養基的pH相對穩定；KH2PO4和Na2HPO4能為微生物生長提供無機鹽。12343.(2016·全國乙，39)空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內不同高度空氣中微生物的分布情況。實驗步驟如下：①配制培養基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；②制作無菌平板；③設置空白對照組和若干實驗組，進行相關操作；④將各組平板置于37℃恒溫箱中培養一段時間，統計各組平板上菌落的平均數。1234回答下列問題：(1)該培養基中微生物所需的氮來源于

。若要完成步驟②，該培養基中的成分X通常是

。答案解析解析

牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白質的水解產物，都可以作為氮源；平板為固體培養基，故需要加入凝固劑瓊脂。牛肉膏、蛋白胨瓊脂1234(2)步驟③中，實驗組的操作是_____________________________________

。答案解析解析

實驗探究的是教室內“不同高度空氣”中微生物的分布，其中自變量為不同高度，故需在不同高度下放置開蓋平板。同時，為了保證單一變量，需要保證開蓋放置時間一致。為了保證實驗可靠性，需要設置多個平行組。

將各實驗組平板分別放置在教室不同高度的位置上，開蓋暴露一段時間1234(3)若在某次調查中，某一實驗組平板上菌落平均數為36個/平板，而空白對照組的一個平板上出現了6個菌落，這種結果說明在此次調查中出現了_____現象。若將30(即36－6)個/平板作為本組菌落數的平均值，該做法_______(填“正確”或“不正確”)。答案解析解析

在完全正確的操作情況下，空白對照組中不應出現菌落。若出現菌落，表明操作過程中存在雜菌污染，屬于實驗失誤，所有實驗數據均不應采用。污染不正確1234解析1234(1)圖中選擇培養基應以

為唯一氮源；鑒別培養基還需添加

作指示劑，產脲酶細菌在該培養基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成

色。4.(2016·四川，10)圖甲是從土壤中篩選產脲酶細菌的過程，圖乙是脲酶基因轉錄的mRNA部分序列。答案尿素酚紅紅解析

脲酶能夠催化尿素分解為氨，故圖中選擇培養基應以尿素作為唯一氮源。由于尿素被分解成了氨，氨會使培養基的堿性增強，pH升高，使酚紅指示劑變紅色。12341234(2)在5個細菌培養基平板上，均接種稀釋倍數為105的土壤樣品液0.1mL，培養一段時間后，平板上長出的細菌菌落數分別為13、156、462、178和191。該過程采取的接種方法是

，每克土壤樣品中的細菌數量為_____

×108個；與血球計數板計數法相比，此計數方法測得的細菌數較

。答案解析解析

用于計數細菌菌落數的接種方法是涂布分離法，統計的菌落數應介于30～300之間，故選擇細菌菌落數為156、178和191的平板計數，每克土壤樣品中的細菌數為(156＋178＋191)÷3÷0.1×105＝1.75×108。由于兩個或多個細菌連接在一起時，往往統計的是一個菌落，故用此方法測得的細菌數偏少。涂布分離法1.75少(3)現有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉錄的mRNA在圖乙箭頭所示位置增加了70個核苷酸，使圖乙序列中出現終止密碼(終止密碼有UAG、UGA和UAA)。突變基因轉錄的mRNA中，終止密碼為

，突變基因表達的蛋白質含

個氨基酸。答案解析UGA1151234解析

密碼子由三個相鄰的堿基組成，271個堿基和后面2個堿基一起共構成91個密碼子，箭頭處插入的70個核苷酸和后面2個堿基一起共構成24個密碼子，緊隨其后是UGA，應為終止密碼，因此表達的蛋白質含115個氨基酸。1234課時作業12345答案1.(2018·張家口檢測)下列有關微生物培養與應用的說法，正確的是

A.天然培養基是指直接取自自然界不需加工的培養基B.接種前需對培養基、培養皿、接種環、實驗操作者的雙手等進行嚴格

的滅菌處理C.大腸桿菌的純化培養過程包括培養基的配制和純化大腸桿菌兩個階段D.分離分解尿素的細菌時，尿素是培養基中唯一的氮源和碳源√678解析12345678解析

天然培養基是指用天然物質制成的培養基，但也需要加工；實驗操作者的雙手應消毒，不能滅菌；分離分解尿素的細菌時，尿素是培養基中唯一的氮源，不是碳源，需加入不含氮元素的有機物(如葡萄糖)作為碳源。答案2.做“微生物的分離與培養”實驗時，下列敘述正確的是

A.高壓蒸汽滅菌加熱結束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟

鍋蓋B.倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養基濺到皿蓋上C.為了防止污染，接種環經火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落D.用記號筆標記培養皿中菌落時，應標記在皿底上√解析12345678解析

A項，高壓蒸汽滅菌過程中加熱結束后，讓其自然冷卻，待壓力表的壓力降到零時，再慢慢打開排氣閥以排除余氣，然后才能開蓋取物；B項，倒平板時左手拿培養皿，右手拿錐形瓶，左手將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，倒入培養基后立即蓋上培養皿皿蓋；C項，灼燒接種環之后，要在火焰旁冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種；D項，在微生物的培養中，一般將培養皿倒置，在皿底上用記號筆做標記。12345678答案3.(2018·鄭州測試)下面是微生物平板劃線示意圖。劃線的順序為1、2、3、4、5。下列敘述正確的是

A.在五個區域中劃線前后都要對接種環和培養基進行滅菌B.劃線操作時完全打開皿蓋，劃完立即蓋上C.接種時不能劃破培養基，否則難以達到分離單菌落的目的D.第1區和第5區的劃線最終要連接起來，以便比較前后的菌落數√解析12345678解析

在每次劃線前后都要對接種環進行滅菌；進行劃線操作時，左手將培養皿的皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環迅速伸入平板內，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋；注意接種時不能劃破培養基，否則難以達到分離單菌落的目的；第1區和第5區的劃線不能相連。12345678答案解析4.(2017·濟南模擬)某研究小組從有機廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是

A.培養基分裝到培養皿后進行滅菌B.轉換劃線角度后需灼燒接種環再進行劃線C.接種后的培養皿須放在光照培養箱中培養D.培養過程中每隔一周觀察一次解析

培養基滅菌后再分裝到培養皿中；轉換劃線角度后要灼燒接種環，冷卻后再從上次劃線的末端開始進行劃線；接種后的培養皿必須放在恒溫箱中進行培養；培養過程中一般每隔12h或24h觀察一次。√12345678答案5.(2015·全國Ⅰ，39)已知微生物A可以產生油脂，微生物B可以產生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產?；卮鹩嘘P問題：(1)顯微觀察時，微生物A菌體中的油脂通?？捎?/p>

染色。微生物A產生的油脂不易揮發，可選用

(填“溶劑浸提法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。12345678蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)溶劑浸提法解析解析

生物組織中的油脂能被蘇丹Ⅲ(或蘇丹Ⅳ)染成橘黃色(或紅色)。(2)為了從自然界中獲得能產生脂肪酶的微生物B的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應選用以

為碳源的固體培養基進行培養。12345678解析解析

為了篩選出能產生脂肪酶的微生物B的單菌落，我們應選用只能讓該菌落生長的選擇培養基，因此培養基中只能選用油脂作為唯一碳源。答案油脂(3)若要測定培養液中微生物B的菌體數，可在顯微鏡下用

直接計數；若要測定其活菌數量，可選用

法進行計數。解析

血球計數板可用于直接計數培養液中的菌體數，但是不分死活，因此要計數活菌數量可采用涂布分離法。血球計數板涂布分離12345678(4)為了確定微生物B產生的脂肪酶的最適溫度，某同學測得相同時間內，在35℃、40℃、45℃溫度下降解10g油脂所需酶量依次為4mg、1mg、6mg，則上述三個溫度中，

℃條件下該酶活力最小。為了進一步確定該酶的最適溫度，應圍繞

℃設計后續實驗。答案解析解析

溫度影響酶的活性，在三個溫度中，45℃需酶量最高，說明酶活性最低；在三個溫度實驗中，40℃所需酶量最少，低于35℃和45℃所用酶量，說明酶的最適溫度介于35℃和45℃之間，因此應圍繞40℃設計不同溫度梯度，進行后續實驗。45406.(2017·重慶質檢)在農業生產研究上，常需要進行微生物的分離和計數。(1)下表為兩種微生物的培養基配方：A組12345678KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂1.4g2.1g0.2g10.0g1.0g15.0gB組纖維素粉NaNO3Na2HPO4·7H2OKH2PO4MgSO4·7H2OKCl5g1g1.2g0.9g0.5g0.5g注：上述兩種培養基中的物質溶解后，均用蒸餾水定容至1000mL。①從功能上來看，上述兩種培養基均屬于

培養基。②如果要對土壤中分解尿素的細菌進行分離，則需要選擇

培養基(填“A”或“B”)，該培養基中的碳源是

。答案選擇12345678解析解析

據題表中的培養基的配方分析，A組中的氮源為尿素，是篩選尿素分解菌的選擇培養基。B組中的碳源是纖維素，是篩選纖維素分解菌的選擇培養基。A葡萄糖解析

對土壤中分解尿素的細菌進行分離時，需要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養基，應當選擇A組培養基，該培養基中的碳源是葡萄糖。③在分離尿素分解菌所用的培養基中可加入

指示劑，根據指示劑的顏色可鑒定某種細菌能否分解尿素，若有分解尿素的細菌，培養基將會呈現

。答案酚紅紅色12345678解析解析

尿素分解菌可以用酚紅指示劑進行鑒定。尿素分解菌產生的脲酶能夠將尿素分解為氨而使pH升高，使酚紅指示劑呈紅色。(2)下圖是某同學采用的接種微生物的方法，請回答下列問題：

①本實驗采用的接種微生物的方法是

法，把聚集的菌種逐步_____分散到培養基的表面，為達到這一目的，操作上應注意：________

(至少答2項)。答案平板劃線分離稀釋

每次劃線前接種環要灼燒；冷卻后從上一次劃線的末端開始劃線12345678解析解析

據圖分析，圖示表示平板劃線分離法接種，是把聚集的菌種逐步稀釋到培養基的表面，操作上應注意每次劃線前接種環要灼燒；冷卻后從上一次劃線的末端開始劃線。②三位同學用涂布分離法測定同一土壤樣品中細菌數量，在對應稀釋倍數為106的培養基中，得到以下統計結果：甲同學涂布了兩個平板，統計的菌落數是236和260，取平均值248；乙同學涂布了三個平板，統計的菌落數是210、240和250，取平均值233；丙同學涂布了三個平板，統計的菌落數是21、212和256，取平均值163；在三位同學的統計中，

同學的統計是正確的。答案乙12345678解析解析

在進行平板菌落計數時，應