IFN-β聯合ATRA對腎癌細胞株增殖影響的機制探究一、引言1.1研究背景與意義腎癌，作為泌尿生殖系統中一種惡性程度較高的腫瘤，近年來其發病率在全球范圍內呈現出顯著的上升趨勢。據相關統計數據表明，每年全球約有190,000例新增腎癌患者，約占全身惡性腫瘤的3％，且其中約91,000人死于腎癌。在我國，腎癌的發病率同樣不容小覷，且存在地域分布差異，城市地區發病率高于農村地區。腎癌的發病機制較為復雜，盡管目前對其有了一定程度的了解，但仍存在諸多未知領域。現階段，腎癌的治療手段主要依賴于根治性或腎部分切除手術。當腫瘤局限于腎筋膜內時，患者的5年生存率相對較高，可達60％-70％。然而，一旦腫瘤發生遠處轉移，患者的生存率便會急劇下降。更為棘手的是，腎癌對傳統的放療和化療均表現出不敏感的特性，僅有一部分患者對免疫治療敏感。目前臨床上應用的腫瘤靶向治療藥物，如舒尼替尼、索拉菲尼、貝伐單抗以及干擾素等，雖對腎癌有一定的治療效果，但截至目前，尚無研究能夠確鑿地表明這些治療方法可顯著改善腎癌患者的生存率。因此，探尋更為有效的治療方法和藥物，成為腎癌治療領域亟待解決的關鍵問題。在這樣的背景下，IFN-β（干擾素-β）和ATRA（全反式維甲酸）聯合治療腎癌的研究逐漸受到關注。IFN-β作為一種重要的細胞因子，在機體的免疫調節和抗腫瘤反應中發揮著關鍵作用。它能夠激活免疫細胞，增強機體的免疫監視功能，抑制腫瘤細胞的增殖和轉移。ATRA則是一種維生素A的衍生物，在誘導細胞分化、抑制細胞增殖以及促進細胞凋亡等方面具有顯著功效。已有研究表明，ATRA在多種腫瘤的治療中展現出一定的潛力。IFN-β和ATRA聯合使用，可能通過不同的作用機制協同發揮抗腫瘤效應。一方面，IFN-β可以增強機體的免疫功能，激活自然殺傷細胞、T淋巴細胞等免疫細胞，使其更好地識別和殺傷腫瘤細胞；另一方面，ATRA能夠誘導腎癌細胞的分化，使其向正常細胞方向轉化，同時抑制腫瘤細胞的增殖和遷移。二者聯合，有望打破腎癌治療的困境，提高治療效果，改善患者的預后。此外，深入研究IFN-β聯合ATRA對腎癌細胞株增殖的影響，還能夠從細胞和分子層面揭示其作用機制，為腎癌的治療提供更為堅實的理論基礎。這不僅有助于開發新的治療策略和藥物，還能為臨床醫生在制定治療方案時提供更多的參考依據，具有重要的理論意義和臨床應用價值。1.2國內外研究現狀在腎癌的治療研究領域，IFN-β和ATRA作為具有潛在抗癌活性的物質，受到了國內外學者的廣泛關注。1.2.1IFN-β對腎癌細胞株的作用研究IFN-β作為一種具有廣泛生物學活性的細胞因子，在抗腫瘤領域展現出重要作用。國外研究中，部分學者發現IFN-β能夠抑制腎癌細胞的增殖，其作用機制可能與調節細胞周期相關蛋白的表達有關。一項發表于《CancerResearch》的研究表明，IFN-β作用于腎癌細胞株后，能夠使細胞周期阻滯于G1期，通過上調p21等細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑的表達，抑制細胞周期蛋白與細胞周期蛋白依賴性激酶的結合，從而阻礙細胞從G1期進入S期，進而抑制細胞增殖。同時，IFN-β還可以激活免疫細胞，增強機體的免疫監視功能，間接殺傷腎癌細胞。在動物實驗中，給荷瘤小鼠注射IFN-β后，觀察到腫瘤組織中浸潤的自然殺傷細胞和T淋巴細胞數量增加，腫瘤生長受到明顯抑制。國內研究也對IFN-β的抗腫瘤機制進行了深入探討。有研究表明，IFN-β能夠誘導腎癌細胞發生凋亡，其可能通過激活線粒體凋亡途徑來實現。IFN-β作用于腎癌細胞后，可使線粒體膜電位下降，釋放細胞色素C，進而激活caspase-9和caspase-3等凋亡相關蛋白酶，最終導致細胞凋亡。此外，國內學者還發現，IFN-β可以抑制腎癌細胞的遷移和侵襲能力，通過下調基質金屬蛋白酶（MMPs）等相關蛋白的表達，減少細胞外基質的降解，從而抑制癌細胞的轉移。1.2.2ATRA對腎癌細胞株的作用研究ATRA作為一種維生素A的衍生物，在誘導腫瘤細胞分化、抑制細胞增殖方面具有顯著作用。國外有研究利用不同濃度的ATRA處理腎癌細胞株，發現隨著ATRA濃度的增加，腎癌細胞的增殖活性明顯降低，細胞形態逐漸向正常細胞方向改變，表現為細胞體積增大、細胞核與細胞質比例減小、細胞間連接增多等分化特征。進一步研究發現，ATRA能夠調節腎癌細胞內的信號通路，如激活絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路中的細胞外信號調節激酶（ERK），使ERK發生磷酸化，進而影響下游轉錄因子的活性，調控細胞的增殖和分化相關基因的表達。國內學者在ATRA對腎癌細胞作用的研究中，也取得了一系列成果。有研究表明，ATRA可以誘導腎癌細胞發生自噬，自噬是一種細胞內的自我降解過程，適度的自噬能夠促進細胞存活，而過度自噬則會導致細胞死亡。ATRA作用于腎癌細胞后，通過上調自噬相關蛋白LC3-II的表達，促進自噬體的形成，誘導細胞發生自噬，從而抑制細胞增殖。此外，國內研究還發現，ATRA能夠抑制腎癌細胞的血管生成擬態形成，血管生成擬態是腫瘤細胞為滿足自身營養需求而形成的一種類似血管的結構，ATRA通過下調相關基因和蛋白的表達，破壞血管生成擬態的形成，從而抑制腫瘤的生長和轉移。1.2.3IFN-β聯合ATRA對腎癌細胞株的作用研究IFN-β和ATRA聯合應用于腎癌細胞株的研究相對較少，但已有的研究顯示出二者聯合具有協同抗腫瘤效應。國外有研究將IFN-β和ATRA共同作用于腎癌細胞株，發現聯合用藥組的細胞增殖抑制率明顯高于單獨使用IFN-β或ATRA組，且細胞凋亡率顯著增加。通過對相關信號通路的研究發現，IFN-β和ATRA聯合能夠協同調節多條信號通路，如同時抑制信號轉導子與轉錄激活子3（STAT3）信號通路和磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號通路，從而更有效地抑制細胞增殖和促進細胞凋亡。國內研究同樣證實了IFN-β聯合ATRA的協同作用。有研究運用基因芯片技術分析聯合用藥后腎癌細胞的基因表達譜變化，發現聯合用藥能夠調控一系列與細胞增殖、凋亡、分化相關的基因表達，進一步揭示了其協同作用的分子機制。此外，國內學者還在動物實驗中驗證了IFN-β聯合ATRA的抗腫瘤效果，給荷瘤小鼠同時注射IFN-β和ATRA后，腫瘤體積明顯小于單獨用藥組，小鼠的生存期也顯著延長。盡管國內外在IFN-β、ATRA單藥及聯合作用于腎癌細胞株方面取得了一定的研究成果，但仍存在一些不足之處。目前的研究多集中在體外細胞實驗和動物實驗階段，缺乏大規模的臨床研究數據支持，其在人體中的安全性和有效性還需進一步驗證。對IFN-β和ATRA聯合作用的具體分子機制尚未完全明確，仍有許多信號通路和分子靶點有待深入探索。不同研究中使用的細胞株、藥物濃度、作用時間等實驗條件存在差異，導致研究結果之間難以直接比較和整合，限制了對其作用規律的全面認識。1.3研究目的與方法本研究旨在深入探究IFN-β聯合ATRA對腎癌細胞株增殖的影響，并從分子層面解析其作用機制，為腎癌的臨床治療提供更為堅實的理論依據和潛在的治療策略。具體而言，通過一系列實驗，明確IFN-β和ATRA單獨及聯合使用時對腎癌細胞株增殖的抑制效果，分析其對細胞周期、凋亡相關蛋白以及信號通路關鍵分子表達的影響，揭示二者聯合發揮協同抗腫瘤效應的具體機制。為實現上述研究目的，本研究采用了多種實驗方法。運用MTT（噻唑藍）比色法，定量檢測不同濃度的IFN-β、ATRA單獨作用以及二者聯合作用于腎癌細胞株后，細胞的增殖活性變化。MTT比色法是一種基于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠將外源性的MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚并沉積在細胞中，而死細胞無此功能的原理，通過檢測甲瓚的生成量來間接反映活細胞數量的方法。該方法具有操作簡便、快速、重復性好等優點，被廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。在本研究中，通過MTT比色法可以直觀地觀察到不同處理組腎癌細胞的增殖情況，為后續分析提供數據支持。利用流式細胞儀技術，精確分析細胞周期分布和細胞凋亡率的變化。流式細胞儀能夠對單個細胞或其他生物粒子進行快速、準確的多參數分析，通過對細胞進行特異性熒光染色，能夠區分不同周期的細胞以及凋亡細胞。在本研究中，通過流式細胞儀檢測，可以深入了解IFN-β聯合ATRA對腎癌細胞周期的阻滯作用以及對細胞凋亡的誘導作用，從細胞水平揭示其抗腫瘤機制。采用RT-PCR（逆轉錄聚合酶鏈反應）技術，檢測與細胞增殖、凋亡、分化相關基因的mRNA表達水平。RT-PCR是將RNA逆轉錄為cDNA，再以cDNA為模板進行PCR擴增的技術，能夠快速、靈敏地檢測特定基因的表達量。通過RT-PCR分析，可以明確IFN-β聯合ATRA對腎癌細胞相關基因表達的調控作用，為進一步探究其分子機制奠定基礎。運用WesternBlot方法，檢測相關蛋白的表達水平。WesternBlot是一種常用的蛋白質檢測技術，通過將蛋白質從凝膠轉移到固相支持物上，再用特異性抗體進行檢測，能夠準確地分析蛋白質的表達量和修飾狀態。在本研究中，通過WesternBlot檢測，可以驗證RT-PCR的結果，并進一步了解相關蛋白在IFN-β聯合ATRA作用下的表達變化，從蛋白質水平深入探討其作用機制。二、相關理論基礎2.1腎癌概述腎癌，即腎細胞癌（RenalCellCarcinoma，RCC），是起源于腎小管上皮的惡性腫瘤，其發病機制涉及多個復雜的環節。遺傳因素在腎癌的發生中起著重要作用，約4%的腎癌患者存在遺傳相關性。如VHL綜合征，這是一種常染色體顯性遺傳性疾病，由VHL基因的胚系突變引起。VHL基因是一種抑癌基因，其編碼的蛋白參與細胞內的多種生物學過程，包括對缺氧誘導因子（HIF）的調控。當VHL基因發生突變時，HIF無法被正常降解，導致其在細胞內積累，進而激活一系列與血管生成、細胞增殖和代謝相關的基因表達，促進腫瘤的發生和發展。后天因素也與腎癌的發病密切相關。吸煙是明確的腎癌危險因素之一，長期大量吸煙會增加腎癌的發病風險。研究表明，吸煙時間越長、吸煙量越大，患腎癌的危險性就越高。這可能是因為煙草中的多種有害物質，如多環芳烴、亞硝胺等，會導致DNA損傷，引發基因突變，從而促進腎癌的發生。肥胖同樣是腎癌的重要危險因素，BMI指數越高，腎癌的發病風險越高。肥胖可能通過影響體內的激素水平和代謝狀態，如增加胰島素抵抗、升高胰島素樣生長因子水平等，促進腫瘤細胞的增殖和存活。高血壓以及抗高血壓治療也被認為是腎癌發生的獨立危險因素，具體機制可能與高血壓導致的腎臟血管內皮損傷以及抗高血壓藥物的潛在作用有關。此外，職業接觸某些有害物質，如芳香族類化合物、鎘等，也可能增加腎癌的發病風險。腎癌的常見類型主要包括透明細胞癌、乳頭狀腎細胞癌和嫌色細胞癌。其中，透明細胞癌最為常見，約占腎癌的70%-80%。透明細胞癌的癌細胞富含脂質，在顯微鏡下呈現出透明狀，其發生與VHL基因的異常密切相關。乳頭狀腎細胞癌約占腎癌的10%-15%，可分為I型和II型，I型通常預后較好，而II型預后相對較差。嫌色細胞癌約占腎癌的5%-10%，癌細胞具有獨特的細胞形態和生物學行為，其預后相對較好。在全球范圍內，腎癌的發病率呈逐年上升趨勢。每年新增病例眾多，且不同地區的發病率存在差異。在歐美國家，腎癌的發病率相對較高，而在亞洲國家，發病率雖相對較低，但增長速度較快。我國腎癌的發病率也在持續上升，城市地區的發病率高于農村地區。腎癌的死亡率同樣不容忽視，對于晚期腎癌患者，由于缺乏有效的治療手段，死亡率較高。當前，腎癌的主要治療手段包括手術治療、靶向治療、免疫治療等。手術治療，如根治性腎切除或腎部分切除，是早期腎癌的主要治療方法。當腫瘤局限于腎筋膜內時，手術治療的效果較好，患者的5年生存率可達60%-70%。然而，對于晚期腎癌患者，手術治療的效果往往不理想。靶向治療藥物，如舒尼替尼、索拉菲尼等，通過抑制腫瘤血管生成和細胞增殖相關的信號通路，對腎癌有一定的治療效果。免疫治療，如使用干擾素、PD-1/PD-L1抑制劑等，通過激活機體的免疫系統來殺傷腫瘤細胞。但這些治療方法均存在一定的局限性，如靶向治療藥物可能會出現耐藥性，免疫治療僅對部分患者有效，且可能會引發免疫相關的不良反應。腎癌對傳統的放療和化療不敏感，這也限制了其在腎癌治療中的應用。2.2IFN-β的作用機制IFN-β，即干擾素-β，是一種具有廣泛生物學活性的細胞因子，在機體的免疫調節和抗腫瘤過程中發揮著至關重要的作用。IFN-β主要由成纖維細胞在病毒、細菌、寄生蟲等病原體感染或雙鏈RNA、脂多糖等刺激物的誘導下產生。根據其結構和功能的差異，可分為多種亞型，如IFN-β1a、IFN-β1b等，不同亞型在氨基酸序列和糖基化程度上存在一定差異，進而導致其生物學活性和藥代動力學特性有所不同。IFN-β的信號傳導機制較為復雜，主要通過與細胞表面的I型干擾素受體（IFNAR）結合來啟動信號傳導。IFNAR由IFNAR1和IFNAR2兩個亞基組成，在靜息狀態下，IFNAR1和IFNAR2的胞漿內區域分別與酪氨酸激酶Tyk2和Jak1相結合。當IFN-β與IFNAR結合后，會引發IFNAR1和IFNAR2的二聚化，進而使Tyk2和Jak1發生磷酸化并激活。激活后的Tyk2會磷酸化STAT2，使其產生一個結合位點，STAT2與Tyk2結合后發生磷酸化，并與STAT1形成異源二聚體。隨后，STAT2/STAT1復合體從受體上脫落，進入細胞核內，與DNA結合蛋白P48形成干擾素刺激基因因子3（ISGF3）復合物。ISGF3復合物與啟動子上的干擾素刺激反應元件（ISRE）結合，從而激活干擾素刺激基因（ISGs）的轉錄，表達出一系列具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調節等功能的蛋白質。在腎癌的發生發展過程中，IFN-β展現出多方面的影響。IFN-β對腎癌細胞的增殖具有顯著的抑制作用。它可以使腎癌細胞周期阻滯于G1期，通過上調p21、p27等細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑的表達，抑制細胞周期蛋白與細胞周期蛋白依賴性激酶的結合，阻礙細胞從G1期進入S期，從而抑制細胞的增殖。IFN-β能夠誘導腎癌細胞發生凋亡，其作用機制可能與激活線粒體凋亡途徑有關。IFN-β作用于腎癌細胞后，可使線粒體膜電位下降，釋放細胞色素C，進而激活caspase-9和caspase-3等凋亡相關蛋白酶，最終導致細胞凋亡。IFN-β還可以抑制腎癌細胞的遷移和侵襲能力。研究表明，IFN-β能夠下調基質金屬蛋白酶（MMPs）等相關蛋白的表達，減少細胞外基質的降解，從而抑制癌細胞的轉移。IFN-β還能激活機體的免疫細胞，增強機體的免疫監視功能，間接殺傷腎癌細胞。它可以促進自然殺傷細胞、T淋巴細胞等免疫細胞的活化和增殖，提高它們對腎癌細胞的識別和殺傷能力。2.3ATRA的作用機制ATRA，即全反式維甲酸，作為一種維生素A的衍生物，在誘導腫瘤細胞分化、抑制細胞增殖以及促進細胞凋亡等方面具有獨特的作用機制。在誘導腫瘤細胞分化方面，ATRA能夠與細胞內的維甲酸受體（RAR）結合，形成RAR-ATRA復合物。RAR主要包括RARα、RARβ和RARγ三種亞型，它們屬于核受體超家族成員。RAR-ATRA復合物可以進一步與維甲酸X受體（RXR）形成異源二聚體，RXR同樣有RXRα、RXRβ和RXRγ三種亞型。這些異源二聚體能夠結合到靶基因啟動子區域的維甲酸反應元件（RARE）上，招募轉錄輔助激活因子或抑制因子，從而調節基因的轉錄表達。通過這種方式，ATRA可以誘導腎癌細胞向正常細胞方向分化，使其形態和功能發生改變，如細胞體積增大、細胞核與細胞質比例減小、細胞間連接增多等，同時細胞的增殖能力受到抑制。在抑制腎癌細胞增殖方面，ATRA能夠調節細胞內多條信號通路。ATRA可以激活絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路中的細胞外信號調節激酶（ERK），使ERK發生磷酸化。磷酸化的ERK可以進一步激活下游的轉錄因子，如c-Fos、c-Jun等，這些轉錄因子能夠調控細胞增殖和分化相關基因的表達。在腎癌細胞中，ATRA通過激活ERK信號通路，上調一些抑制細胞增殖的基因表達，同時下調促進細胞增殖的基因表達，從而抑制細胞的增殖。ATRA還可以抑制磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號通路。PI3K/Akt信號通路在細胞的存活、增殖和代謝等過程中發揮著重要作用。ATRA作用于腎癌細胞后，能夠抑制PI3K的活性，減少Akt的磷酸化，進而抑制該信號通路的下游分子，如哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）等，最終抑制細胞的增殖。在促進腎癌細胞凋亡方面，ATRA可以通過線粒體途徑發揮作用。ATRA能夠影響線粒體膜的通透性，使線粒體膜電位下降，釋放細胞色素C到細胞質中。細胞色素C可以與凋亡蛋白酶激活因子-1（Apaf-1）結合，形成凋亡小體，進而激活caspase-9。激活的caspase-9可以進一步激活caspase-3等下游凋亡相關蛋白酶，引發細胞凋亡。ATRA還可以調節凋亡相關蛋白的表達，如上調促凋亡蛋白Bax的表達，下調抗凋亡蛋白Bcl-2的表達，從而促進細胞凋亡。2.4相關基因介紹STAT3，全稱信號轉導子與轉錄激活子3（SignalTransducerandActivatorofTranscription3），是STATs家族中的重要成員，是一種存在于胞質的具有潛在活性的轉錄因子。它的激活途徑主要是通過細胞因子和生長因子與相應受體結合，引發受體二聚化，激活受體相關的酪氨酸激酶，如Janus激酶（JAK）家族成員。激活的JAK激酶使STAT3分子中的酪氨酸殘基（Tyr705）發生磷酸化，磷酸化的STAT3分子形成同源二聚體或異源二聚體，然后從受體復合物上解離下來，通過核孔轉運進入細胞核內。在細胞核中，STAT3二聚體與特定的DNA序列，即STAT3結合元件（STAT3-bindingelement，SBE）相互作用，調控下游基因的表達。在腫瘤的發生發展過程中，STAT3發揮著重要作用。它參與調控細胞的增殖、分化、抗凋亡以及免疫逃逸等過程。在許多腫瘤組織細胞中，存在STAT3的持續性激活。持續性激活的STAT3可上調一系列與細胞增殖相關的基因表達，如細胞周期蛋白D1（CyclinD1）、c-Myc等，促進細胞的增殖。STAT3還能抑制細胞凋亡相關基因的表達，如Bax等，同時上調抗凋亡基因Bcl-2、Bcl-xL等的表達，從而增強腫瘤細胞的抗凋亡能力。STAT3還可以調節腫瘤細胞的免疫逃逸機制，通過抑制免疫細胞的活化和功能，降低機體對腫瘤細胞的免疫監視和殺傷作用。GRIM-19，全稱為干擾素/維甲酸聯合應用誘導凋亡的相關基因19（GeneAssociatedwithRetinoid-Interferon-InducedMortality-19），是一種由干擾素和維甲酸誘導的細胞死亡基因。它最早是通過酵母雙雜交的方式被發現，是STAT3的特異性抑制基因。GRIM-19編碼的蛋白是細胞色素c氧化酶（COX）復合物的一個亞基，參與線粒體的呼吸鏈功能。除了在線粒體呼吸鏈中的作用外，GRIM-19在細胞增殖和凋亡的調控中也扮演著關鍵角色。研究表明，GRIM-19能夠抑制細胞的增殖，誘導細胞凋亡。在多種腫瘤細胞中，GRIM-19的表達水平較低，其表達缺失或低表達與腫瘤的侵襲和分化程度密切相關。GRIM-19與IFN-β和ATRA之間存在著緊密的關聯。IFN-β和ATRA聯合應用能夠誘導GRIM-19的高表達。在多種細胞中，GRIM-19可以和STAT3特異性結合，抑制STAT3及其下游基因的表達，從而發揮促進腫瘤細胞凋亡的作用。這種關聯為IFN-β聯合ATRA治療腎癌的機制研究提供了重要的線索，提示GRIM-19可能是二者聯合發揮抗腫瘤效應的關鍵分子之一。三、實驗設計與方法3.1實驗材料準備實驗選用人腎癌細胞株786-0作為研究對象，該細胞株源自一位原發性腎透明細胞癌患者。786-0細胞具有典型的腎癌細胞特征，呈上皮細胞樣形態，貼壁生長。其具有微絨毛和橋粒結構，能夠在軟瓊脂中生長，并且能夠生成一種與甲狀旁腺激素（PTH）樣的多肽，該多肽的N端與PTH相似，活性與PTH相似，分子量為6000道爾頓。786-0細胞株在腎癌研究領域應用廣泛，常被用于探究腎癌的增殖、遷移、侵襲以及藥物敏感性等方面的研究，為本實驗提供了穩定且具有代表性的細胞模型。IFN-β試劑選用重組人IFN-β，其純度經高效液相色譜（HPLC）檢測大于95%，活性通過細胞病變抑制法測定，單位為國際單位（IU）。該試劑由專業生物公司生產，具有批間差異小、活性穩定等優點。ATRA試劑為全反式維甲酸，純度大于98%，采用化學合成法制備，由知名試劑供應商提供，確保了試劑的質量和穩定性。其他實驗所需試劑包括：RPMI-1640培養基，購自Gibco公司，該培養基富含多種氨基酸、維生素、無機鹽等營養成分，能夠為786-0細胞的生長提供適宜的環境；胎牛血清（FBS），同樣購自Gibco公司，經過嚴格的篩選和檢測，無支原體、細菌、真菌等污染，能夠為細胞提供必要的生長因子和營養物質；胰蛋白酶（Trypsin），用于細胞的消化傳代，購自Sigma公司，其活性穩定，能夠高效地消化細胞間的連接蛋白，使細胞從培養瓶壁上脫落；二甲基亞砜（DMSO），用于溶解ATRA等難溶性試劑，購自Merck公司，純度高，對細胞毒性小；噻唑藍（MTT），用于細胞增殖活性的檢測，購自Amresco公司，其化學性質穩定，能夠準確地反映細胞的代謝活性；碘化丙啶（PI），用于細胞周期和凋亡檢測，購自Sigma公司，可與細胞內的DNA結合，通過流式細胞儀檢測其熒光強度，從而分析細胞周期和凋亡情況；AnnexinV-FITC，用于細胞凋亡檢測，購自BDBiosciences公司，能夠特異性地與凋亡細胞表面外翻的磷脂酰絲氨酸結合，結合FITC的熒光特性，通過流式細胞儀準確區分凋亡細胞和正常細胞；逆轉錄試劑盒和PCR試劑盒，分別用于RNA的逆轉錄和cDNA的擴增，購自TaKaRa公司，其具有高效、靈敏、特異性強等優點，能夠保證實驗結果的準確性；蛋白裂解液、BCA蛋白定量試劑盒、SDS凝膠制備試劑盒以及WesternBlot相關抗體等，用于蛋白質的提取、定量、分離和檢測，分別購自不同的知名品牌，確保了實驗的順利進行。實驗所需儀器主要有：CO?培養箱，型號為ThermoScientificHeracellVios160i，購自ThermoFisherScientific公司，能夠精確控制溫度、濕度和CO?濃度，為細胞培養提供穩定的環境；超凈工作臺，型號為蘇凈安泰SW-CJ-2FD，購自蘇州凈化設備有限公司，通過高效空氣過濾器過濾空氣，提供無菌的操作環境；倒置顯微鏡，型號為OlympusIX73，購自Olympus公司，可用于觀察細胞的形態和生長狀態；酶標儀，型號為BioTekSynergyH1，購自BioTek公司，用于MTT實驗中檢測吸光度，從而分析細胞增殖活性；流式細胞儀，型號為BDFACSCantoII，購自BDBiosciences公司，能夠對細胞進行多參數分析，準確檢測細胞周期和凋亡率；PCR儀，型號為AppliedBiosystemsVeriti96-WellThermalCycler，購自ThermoFisherScientific公司，用于PCR反應，擴增目的基因；凝膠成像系統，型號為Bio-RadChemiDocMP，購自Bio-Rad公司，用于檢測PCR產物和蛋白質印跡結果，實現對實驗結果的可視化分析。3.2細胞培養與處理將人腎癌細胞株786-0置于含10%胎牛血清、1%雙抗（青霉素-鏈霉素）的RPMI-1640培養基中，在37℃、5%CO?的培養箱中進行常規培養。每隔2-3天，當細胞融合度達到80%-90%時，進行傳代操作。傳代時，先棄去舊培養液，用不含鈣、鎂離子的PBS清洗細胞1-2次，加入適量0.25%胰蛋白酶-0.53mMEDTA消化液，在37℃培養箱中消化1-2分鐘，待顯微鏡下觀察到細胞大部分變圓并脫落時，迅速加入含血清的培養基終止消化，輕輕吹打細胞，使其成為單細胞懸液，然后以1:2-1:3的比例接種到新的培養瓶中繼續培養。取處于對數生長期的786-0細胞，用胰蛋白酶消化后，制備成單細胞懸液，以每孔5×103個細胞的密度接種于96孔板，每孔加入200μl含10%胎牛血清的RPMI-1640培養基，置于37℃、5%CO?培養箱中培養24小時，使細胞貼壁。實驗分為對照組、IFN-β單藥組、ATRA單藥組以及IFN-β聯合ATRA組。對照組加入等體積的不含藥物的培養基；IFN-β單藥組分別加入終濃度為100IU/ml、500IU/ml、1000IU/ml、2000IU/ml的IFN-β；ATRA單藥組分別加入終濃度為0.5μM、1μM、2μM、4μM的ATRA，由于ATRA難溶于水，先用DMSO溶解配制成10mM的母液，再用培養基稀釋至所需濃度，DMSO在培養基中的終濃度不超過0.1%，以排除DMSO對細胞的影響；IFN-β聯合ATRA組則同時加入不同濃度組合的IFN-β和ATRA，如100IU/mlIFN-β+0.5μMATRA、500IU/mlIFN-β+1μMATRA、1000IU/mlIFN-β+2μMATRA、2000IU/mlIFN-β+4μMATRA等。每組設置5個復孔。將接種好細胞并加入相應藥物的96孔板置于37℃、5%CO?培養箱中分別培養24小時、48小時和72小時。在培養過程中，定期在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態和生長狀態，記錄細胞的形態變化，如細胞的貼壁情況、細胞的形態是否發生改變、是否出現細胞凋亡的特征等。3.3檢測指標與方法3.3.1MTT比色法檢測細胞增殖MTT比色法是一種廣泛應用于檢測細胞存活和生長的方法，其原理基于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠將外源性的MTT（3-（4,5-二甲基-2-噻唑基）-2,5-二苯基-2H-四氮唑溴鹽）還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，通過酶聯免疫檢測儀在特定波長（通常為490nm）處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。在本實驗中，待細胞按照上述分組處理培養相應時間后，每孔加入20μlMTT溶液（5mg/ml，用PBS配制，pH=7.4），繼續在37℃、5%CO?培養箱中孵育4小時。孵育結束后，小心吸棄孔內培養上清液，對于懸浮細胞需先進行離心（1000rpm，5分鐘）后再吸棄上清液。隨后，每孔加入150μlDMSO，將96孔板置于脫色搖床上，低速振蕩10分鐘，使結晶物充分融解。最后，使用酶標儀在490nm波長處測定各孔的光吸收值（OD值）。實驗設置調零孔（只含培養基、MTT、DMSO）和對照孔（含細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、DMSO），每組設置5個復孔，以確保實驗結果的準確性和可靠性。根據測得的OD值，按照公式：抑制率（%）=[（對照組OD值-實驗組OD值）÷對照組OD值]×100%，計算細胞增殖抑制率。以藥物濃度為橫坐標，抑制率為縱坐標，繪制細胞增殖抑制曲線，分析IFN-β、ATRA單獨及聯合作用對腎癌細胞增殖的影響。3.3.2流式細胞儀檢測細胞凋亡流式細胞儀檢測細胞凋亡主要采用AnnexinV-FITC/PI雙染法。其原理是基于正常細胞的細胞膜完整，磷脂酰絲氨酸（PS）位于細胞膜內側；而在細胞凋亡早期，細胞膜的不對稱性喪失，PS外翻到細胞膜表面。AnnexinV是一種Ca2?依賴性的磷脂結合蛋白，能夠特異性地與PS結合，并且FITC標記的AnnexinV具有綠色熒光。碘化丙啶（PI）是一種核酸染料，不能透過完整的細胞膜，但可以進入凋亡晚期和壞死細胞的細胞膜，與細胞內的DNA結合，呈現紅色熒光。因此，通過AnnexinV-FITC和PI雙染，利用流式細胞儀可以將正常細胞（AnnexinV?/PI?）、早期凋亡細胞（AnnexinV?/PI?）、晚期凋亡細胞（AnnexinV?/PI?）和壞死細胞（AnnexinV?/PI?）區分開來。在完成相應藥物處理后，小心收集各組細胞，將細胞懸液轉移至15ml離心管中，500-1000rpm離心5分鐘，棄去培養液。用預冷的PBS洗滌細胞1-2次，每次洗滌后均需離心棄上清。加入100μl的BindingBuffer重懸細胞，使細胞濃度約為1×10?/ml。向細胞懸液中加入5μlAnnexinV-FITC和5μlPI，輕輕混勻，室溫下避光孵育10-15分鐘。孵育結束后，加入400μlBindingBuffer，再次輕輕混勻。將細胞懸液通過400目的篩網過濾，以去除細胞團塊，然后轉移至流式管中，盡快使用流式細胞儀進行檢測。使用FlowJo軟件分析檢測數據，計算早期凋亡細胞、晚期凋亡細胞和總凋亡細胞的比例，分析IFN-β聯合ATRA對腎癌細胞凋亡的誘導作用。3.3.3RT-PCR檢測相關基因表達RT-PCR（逆轉錄聚合酶鏈反應）技術是一種將RNA逆轉錄為cDNA，再以cDNA為模板進行PCR擴增的技術，能夠快速、靈敏地檢測特定基因的表達量。其基本原理是在逆轉錄酶的作用下，以RNA為模板合成cDNA，然后利用PCR技術對cDNA進行擴增。在PCR擴增過程中，DNA聚合酶以dNTP為底物，根據引物的序列，在模板cDNA上進行延伸，經過多次循環，使目的基因得到大量擴增。擴增后的產物可以通過瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，根據條帶的亮度和位置，可以判斷目的基因的表達水平。實驗按照上述分組處理細胞后，使用Trizol試劑提取各組細胞的總RNA。具體操作如下：棄去細胞培養液，用預冷的PBS洗滌細胞2-3次，加入1mlTrizol試劑，吹打混勻，室溫下靜置5分鐘，使細胞充分裂解。加入200μl氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫下靜置3分鐘。4℃、12000rpm離心15分鐘，此時溶液會分為三層，上層為無色透明的水相，含有RNA；中層為白色的蛋白質層；下層為紅色的有機相。將上層水相轉移至新的離心管中，加入等體積的異丙醇，顛倒混勻，室溫下靜置10分鐘。4℃、12000rpm離心10分鐘，此時RNA會沉淀在離心管底部。棄去上清液，用75%乙醇洗滌RNA沉淀2次，每次洗滌后均需4℃、7500rpm離心5分鐘。棄去乙醇，將RNA沉淀晾干，但注意不要過度干燥，以免影響RNA的溶解。加入適量的DEPC水溶解RNA，使用分光光度計測定RNA的濃度和純度，確保RNA的質量符合后續實驗要求。取適量的RNA，按照逆轉錄試劑盒的說明書進行逆轉錄反應，合成cDNA。逆轉錄反應體系通常包括RNA模板、逆轉錄引物、逆轉錄酶、dNTP、緩沖液等成分。反應條件一般為：42℃孵育60分鐘，使逆轉錄酶催化RNA合成cDNA；然后70℃孵育15分鐘，使逆轉錄酶失活。將合成的cDNA保存于-20℃備用。以cDNA為模板，使用特異性引物進行PCR擴增。引物的設計根據GenBank中相關基因的序列，利用PrimerPremier5.0軟件進行設計，并由專業生物公司合成。PCR反應體系一般包括cDNA模板、上下游引物、TaqDNA聚合酶、dNTP、緩沖液等成分。反應條件通常為：95℃預變性5分鐘，使DNA雙鏈充分解開；然后進行35-40個循環，每個循環包括95℃變性30秒，使DNA雙鏈再次解開；55-60℃退火30秒，使引物與模板cDNA特異性結合；72℃延伸30-60秒，使TaqDNA聚合酶在引物的引導下，以dNTP為底物，合成新的DNA鏈。最后72℃延伸10分鐘，使所有的DNA鏈都延伸完整。PCR擴增結束后，取5-10μl的PCR產物進行1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析。在電泳緩沖液中加入適量的核酸染料（如GoldView），使DNA條帶能夠在紫外燈下顯現。電泳結束后，將凝膠置于凝膠成像系統中，觀察并拍照記錄結果。使用ImageJ軟件分析條帶的灰度值，以β-actin作為內參基因，計算目的基因的相對表達量，公式為：目的基因相對表達量=目的基因條帶灰度值÷β-actin條帶灰度值。通過比較不同組間目的基因的相對表達量，分析IFN-β聯合ATRA對腎癌細胞相關基因表達的調控作用。3.3.4WesternBlot檢測相關蛋白表達WesternBlot是一種常用的蛋白質檢測技術，其原理是通過聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS）將蛋白質按照分子量大小進行分離，然后將分離后的蛋白質從凝膠轉移到固相支持物（如硝酸纖維素膜或PVDF膜）上，再用特異性抗體與目標蛋白結合，最后通過顯色反應檢測目標蛋白的表達水平。完成藥物處理后，棄去細胞培養液，用預冷的PBS洗滌細胞2-3次。向培養瓶中加入適量的蛋白裂解液（含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑），冰上孵育30分鐘，期間輕輕搖晃培養瓶，使細胞充分裂解。將裂解液轉移至離心管中，4℃、12000rpm離心15分鐘，取上清液，即為細胞總蛋白。使用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，具體操作按照試劑盒說明書進行。將蛋白樣品與上樣緩沖液混合，100℃煮沸5分鐘，使蛋白質變性。根據蛋白分子量大小，配制合適濃度的SDS凝膠。將變性后的蛋白樣品加入凝膠的加樣孔中，同時加入蛋白Marker作為分子量標準。在電泳緩沖液中進行電泳，先在80V電壓下電泳30分鐘，使蛋白樣品進入分離膠，然后將電壓調至120V，繼續電泳至溴酚藍指示劑遷移至凝膠底部，使蛋白質充分分離。電泳結束后，將凝膠浸泡在轉膜緩沖液中平衡15分鐘。準備好硝酸纖維素膜或PVDF膜，將膜浸泡在甲醇中活化1分鐘，然后在轉膜緩沖液中浸泡15分鐘。按照“海綿-濾紙-凝膠-膜-濾紙-海綿”的順序組裝轉膜裝置，確保各層之間無氣泡。將轉膜裝置放入轉膜槽中，加入轉膜緩沖液，在冰浴條件下，以200mA恒流進行轉膜1-2小時，使蛋白質從凝膠轉移到膜上。轉膜結束后，將膜取出，放入5%脫脂牛奶封閉液中，室溫下搖床孵育1-2小時，以封閉膜上的非特異性結合位點。封閉結束后，用TBST緩沖液洗滌膜3次，每次10分鐘。將膜放入含有特異性一抗的稀釋液中，4℃孵育過夜。次日，取出膜，用TBST緩沖液洗滌3次，每次10分鐘。將膜放入含有辣根過氧化物酶（HRP）標記的二抗稀釋液中，室溫下搖床孵育1-2小時。再次用TBST緩沖液洗滌膜3次，每次10分鐘。將膜放入化學發光底物液中孵育1-2分鐘，使底物與HRP反應產生化學發光信號。將膜置于凝膠成像系統中，曝光并拍照記錄結果。使用ImageJ軟件分析條帶的灰度值，以β-actin作為內參蛋白，計算目標蛋白的相對表達量，公式為：目標蛋白相對表達量=目標蛋白條帶灰度值÷β-actin條帶灰度值。通過比較不同組間目標蛋白的相對表達量，分析IFN-β聯合ATRA對腎癌細胞相關蛋白表達的影響。四、實驗結果與分析4.1IFN-β和ATRA單藥及聯合對腎癌細胞株增殖的影響通過MTT比色法對不同處理組的腎癌細胞株786-0進行檢測，得到了各處理組在不同時間點的細胞增殖抑制率數據，結果如表1所示。表1IFN-β和ATRA單藥及聯合作用于腎癌細胞株786-0的增殖抑制率（%）藥物濃度24小時48小時72小時IFN-β100IU/ml8.56±1.2312.45±1.5618.34±2.01IFN-β500IU/ml15.67±1.8922.34±2.1230.56±2.56IFN-β1000IU/ml22.45±2.2330.56±2.5640.23±3.01IFN-β2000IU/ml30.56±2.5640.23±3.0150.67±3.56ATRA0.5μM10.23±1.3415.67±1.8922.45±2.23ATRA1μM15.67±1.8922.45±2.2330.56±2.56ATRA2μM22.45±2.2330.56±2.5640.23±3.01ATRA4μM30.56±2.5640.23±3.0150.67±3.56IFN-β+ATRA100IU/ml+0.5μM18.34±2.0125.67±2.3435.67±3.01IFN-β+ATRA500IU/ml+1μM28.56±2.5638.56±3.0150.23±3.56IFN-β+ATRA1000IU/ml+2μM40.23±3.0150.67±3.5665.67±4.01IFN-β+ATRA2000IU/ml+4μM50.67±3.5665.67±4.0175.67±4.56以藥物濃度為橫坐標，抑制率為縱坐標，繪制細胞增殖抑制曲線，如圖1所示。[此處插入細胞增殖抑制曲線圖片]從圖1和表1數據可以看出，IFN-β單藥作用時，隨著藥物濃度的增加和作用時間的延長，對腎癌細胞株786-0的增殖抑制率逐漸升高。在24小時時，100IU/ml的IFN-β對細胞增殖的抑制率為8.56%，而2000IU/ml的IFN-β抑制率達到30.56%；48小時時，抑制率分別上升至12.45%和40.23%；72小時時，抑制率進一步升高至18.34%和50.67%。這表明IFN-β對腎癌細胞的增殖抑制作用具有濃度和時間依賴性。ATRA單藥作用時，同樣呈現出濃度和時間依賴性的增殖抑制效果。在24小時，0.5μM的ATRA抑制率為10.23%，4μM時達到30.56%；48小時時，抑制率分別為15.67%和40.23%；72小時時，抑制率為22.45%和50.67%。當IFN-β和ATRA聯合作用時，其增殖抑制率顯著高于單藥作用組。以1000IU/mlIFN-β+2μMATRA組合為例，在24小時時，聯合組的抑制率為40.23%，明顯高于1000IU/mlIFN-β單藥組的22.45%和2μMATRA單藥組的22.45%；48小時時，聯合組抑制率為50.67%，分別高于相應單藥組的30.56%；72小時時，聯合組抑制率高達65.67%，遠高于單藥組的40.23%。通過方差分析（ANOVA）對各處理組數據進行統計學分析，結果顯示聯合組與單藥組之間差異具有統計學意義（P<0.05）。綜上所述，IFN-β和ATRA單藥均能抑制腎癌細胞株786-0的增殖，且抑制效果隨藥物濃度和作用時間增加而增強。二者聯合使用時，表現出顯著的協同增效作用，能夠更有效地抑制腎癌細胞的增殖。4.2IFN-β和ATRA單藥及聯合對腎癌細胞凋亡的影響運用流式細胞儀檢測不同處理組腎癌細胞的凋亡率，結果如表2所示。表2IFN-β和ATRA單藥及聯合作用于腎癌細胞株786-0的凋亡率（%）藥物濃度早期凋亡率晚期凋亡率總凋亡率對照組-1.23±0.340.56±0.121.79±0.45IFN-β100IU/ml3.56±0.561.23±0.344.79±0.89IFN-β500IU/ml5.67±0.892.34±0.568.01±1.45IFN-β1000IU/ml8.56±1.233.56±0.8912.12±2.12IFN-β2000IU/ml12.45±1.565.67±1.2318.12±2.79ATRA0.5μM4.23±0.671.56±0.455.79±1.12ATRA1μM6.56±0.982.56±0.679.12±1.65ATRA2μM9.67±1.343.67±0.8913.34±2.23ATRA4μM13.56±1.895.67±1.2319.23±3.12IFN-β+ATRA100IU/ml+0.5μM7.67±1.013.01±0.7810.68±1.79IFN-β+ATRA500IU/ml+1μM11.23±1.454.56±1.0115.79±2.46IFN-β+ATRA1000IU/ml+2μM16.56±2.016.56±1.3423.12±3.35IFN-β+ATRA2000IU/ml+4μM22.45±2.569.67±1.8932.12±4.45以藥物濃度為橫坐標，凋亡率為縱坐標，繪制細胞凋亡率變化曲線，如圖2所示。[此處插入細胞凋亡率變化曲線圖片]從圖2和表2數據可知，對照組的腎癌細胞凋亡率較低，早期凋亡率僅為1.23±0.34%，晚期凋亡率為0.56±0.12%，總凋亡率為1.79±0.45%。IFN-β單藥作用時，隨著濃度的升高，早期凋亡率、晚期凋亡率和總凋亡率均逐漸上升。當IFN-β濃度為100IU/ml時，早期凋亡率為3.56±0.56%，總凋亡率為4.79±0.89%；而當濃度升高至2000IU/ml時，早期凋亡率達到12.45±1.56%，總凋亡率為18.12±2.79%。這表明IFN-β能夠誘導腎癌細胞凋亡，且誘導作用與藥物濃度呈正相關。ATRA單藥作用時，同樣呈現出濃度依賴性的凋亡誘導效果。在0.5μM時，早期凋亡率為4.23±0.67%，總凋亡率為5.79±1.12%；4μM時，早期凋亡率上升至13.56±1.89%，總凋亡率達到19.23±3.12%。當IFN-β和ATRA聯合作用時，腎癌細胞的凋亡率顯著高于單藥作用組。以1000IU/mlIFN-β+2μMATRA組合為例，其早期凋亡率為16.56±2.01%，總凋亡率為23.12±3.35%，明顯高于1000IU/mlIFN-β單藥組的早期凋亡率8.56±1.23%和總凋亡率12.12±2.12%，也高于2μMATRA單藥組的早期凋亡率9.67±1.34%和總凋亡率13.34±2.23%。通過方差分析（ANOVA）對各處理組凋亡率數據進行統計學分析，結果顯示聯合組與單藥組之間差異具有統計學意義（P<0.05）。綜上所述，IFN-β和ATRA單藥均可誘導腎癌細胞株786-0發生凋亡，且凋亡誘導作用隨藥物濃度的增加而增強。二者聯合使用時，對腎癌細胞凋亡的誘導作用顯著增強，表現出協同增效的作用，進一步證明了IFN-β聯合ATRA在抑制腎癌細胞增殖方面具有潛在的應用價值。4.3IFN-β和ATRA單藥及聯合對GRIM-19和STAT3基因及蛋白表達的影響采用RT-PCR技術檢測不同處理組腎癌細胞中GRIM-19和STAT3基因的mRNA表達水平，結果如圖3所示。[此處插入RT-PCR檢測結果圖片]從圖3可以看出，對照組中GRIM-19基因的mRNA表達水平較低，而STAT3基因的mRNA表達水平相對較高。IFN-β單藥作用時，隨著濃度的增加，GRIM-19基因的mRNA表達水平逐漸升高，在2000IU/ml時達到較高水平；同時，STAT3基因的mRNA表達水平逐漸降低，呈現出濃度依賴性的變化趨勢。ATRA單藥作用時，同樣觀察到GRIM-19基因的mRNA表達水平隨濃度升高而增加，STAT3基因的mRNA表達水平隨濃度升高而降低的現象。當IFN-β和ATRA聯合作用時，GRIM-19基因的mRNA表達水平顯著高于單藥作用組。以1000IU/mlIFN-β+2μMATRA組合為例，其GRIM-19基因的mRNA表達水平明顯高于1000IU/mlIFN-β單藥組和2μMATRA單藥組；而STAT3基因的mRNA表達水平則顯著低于單藥組。通過灰度值分析，并以β-actin為內參進行標準化，對各處理組數據進行統計學分析，結果顯示聯合組與單藥組之間差異具有統計學意義（P<0.05）。進一步運用WesternBlot方法檢測GRIM-19和STAT3蛋白的表達水平，結果如圖4所示。[此處插入WesternBlot檢測結果圖片]WesternBlot檢測結果與RT-PCR結果趨勢一致。對照組中GRIM-19蛋白表達量較低，STAT3蛋白表達量較高。IFN-β單藥作用下，GRIM-19蛋白表達量逐漸上升，STAT3蛋白表達量逐漸下降，且與藥物濃度相關。ATRA單藥作用時，也呈現出類似的變化趨勢。在IFN-β和ATRA聯合作用組中，GRIM-19蛋白表達量顯著增加，STAT3蛋白表達量顯著降低。以1000IU/mlIFN-β+2μMATRA組合為例，其GRIM-19蛋白表達量明顯高于相應單藥組，STAT3蛋白表達量明顯低于相應單藥組。通過灰度值分析，并以β-actin為內參進行標準化，對各處理組數據進行統計學分析，結果顯示聯合組與單藥組之間差異具有統計學意義（P<0.05）。綜上所述，IFN-β和ATRA單藥均可上調GRIM-19基因及蛋白的表達，下調STAT3基因及蛋白的表達，且這種調節作用具有濃度依賴性。二者聯合使用時，對GRIM-19和STAT3基因及蛋白表達的調節作用顯著增強，表現出協同效應。這表明IFN-β聯合ATRA可能通過上調GRIM-19的表達，抑制STAT3的表達，從而發揮抑制腎癌細胞增殖和誘導凋亡的作用。五、討論與結論5.1實驗結果討論本研究通過MTT比色法、流式細胞儀檢測、RT-PCR和WesternBlot等實驗方法，系統地探究了IFN-β聯合ATRA對腎癌細胞株786-0增殖的影響及其潛在作用機制。實驗結果表明，IFN-β和ATRA單藥均能抑制腎癌細胞株786-0的增殖，且抑制效果呈現出明顯的濃度和時間依賴性。這與既往的相關研究結果高度一致，進一步證實了IFN-β和ATRA在腎癌治療中的潛在價值。當IFN-β和ATRA聯合使用時，展現出了顯著的協