Hedgehog信號(hào)與自噬交互作用對(duì)多發(fā)性骨髓瘤化療耐藥機(jī)制的深度剖析一、引言1.1研究背景與意義多發(fā)性骨髓瘤（MultipleMyeloma，MM）作為血液系統(tǒng)的第二大常見(jiàn)惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅著人類健康。據(jù)全球癌癥觀察站（GCO）發(fā)布的數(shù)據(jù)，2022年中國(guó)約有30300例新發(fā)病例和18662例死亡病例。MM主要表現(xiàn)為漿細(xì)胞在骨髓內(nèi)的惡性增生，伴隨大量異常免疫球蛋白的產(chǎn)生，進(jìn)而引發(fā)骨破壞、腎臟及全身其他臟器的損傷。其常見(jiàn)癥狀包括骨髓瘤相關(guān)器官功能損傷的“CRAB”癥狀，即血鈣增高、腎功能損害、貧血、骨病及繼發(fā)淀粉樣變性等，這些癥狀嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，威脅患者的長(zhǎng)期生存。目前，MM的治療主要依賴于蛋白酶體抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、類固醇等藥物。在新藥時(shí)代，盡管以蛋白酶體抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑和抗CD38單克隆抗體等為主的治療方案顯著提高了MM患者的生存期，但復(fù)發(fā)與進(jìn)展仍難以避免。一旦患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)，對(duì)后續(xù)治療的反應(yīng)持續(xù)時(shí)間會(huì)越來(lái)越短，最終不可避免地出現(xiàn)頑固性耐藥，這成為MM治療失敗的主要原因，使得MM目前仍然是一種不可治愈的惡性血液腫瘤。例如，許多患者在經(jīng)過(guò)多輪化療后，腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性逐漸降低，導(dǎo)致治療效果不佳，病情反復(fù)進(jìn)展。化療耐藥是MM治療中亟待解決的關(guān)鍵難題。腫瘤耐藥是一個(gè)多基因、多因素、多程度共同參與的復(fù)雜問(wèn)題，主要分為藥代動(dòng)力學(xué)抗性、腫瘤細(xì)胞自身抗性和腫瘤微環(huán)境相關(guān)的因素。其中，MM細(xì)胞自身的生物學(xué)特性改變?cè)诨熌退幹衅鹬匾饔?。研究發(fā)現(xiàn)，Hedgehog信號(hào)通路和自噬在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及耐藥過(guò)程中扮演著關(guān)鍵角色，它們與MM化療耐藥之間可能存在著密切的聯(lián)系。Hedgehog信號(hào)通路在胚胎發(fā)育過(guò)程中對(duì)細(xì)胞的增殖、分化和組織器官的形成起著至關(guān)重要的調(diào)控作用。在正常生理狀態(tài)下，該信號(hào)通路處于相對(duì)靜止的狀態(tài)。然而，在多種腫瘤中，包括MM，Hedgehog信號(hào)通路會(huì)發(fā)生異常激活。一旦激活，它可以通過(guò)一系列復(fù)雜的分子機(jī)制促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、存活和遷移，同時(shí)抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。更為關(guān)鍵的是，研究表明Hedgehog信號(hào)通路的異常激活與腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性密切相關(guān)。其可能通過(guò)上調(diào)耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)，改變藥物的攝取和外排，或者調(diào)節(jié)腫瘤干細(xì)胞的特性等方式，使得腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生抗性，逃避藥物的殺傷作用。自噬是一種高度保守的細(xì)胞內(nèi)降解過(guò)程，在維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)、應(yīng)對(duì)營(yíng)養(yǎng)缺乏、氧化應(yīng)激等壓力條件時(shí)發(fā)揮著重要作用。正常情況下，細(xì)胞通過(guò)自噬清除受損的細(xì)胞器、錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)和病原體等，為細(xì)胞提供必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和能量，維持細(xì)胞的正常生理功能。在腫瘤細(xì)胞中，自噬同樣發(fā)揮著復(fù)雜而關(guān)鍵的作用。一方面，自噬可以作為一種細(xì)胞保護(hù)機(jī)制，幫助腫瘤細(xì)胞在惡劣的微環(huán)境中存活和增殖。在化療藥物的作用下，腫瘤細(xì)胞會(huì)面臨能量短缺、氧化應(yīng)激等壓力，此時(shí)自噬被激活，通過(guò)降解細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)為腫瘤細(xì)胞提供能量和代謝底物，從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受性。另一方面，過(guò)度的自噬也可能導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生“自噬性細(xì)胞死亡”，這是一種不同于凋亡的程序性細(xì)胞死亡方式。在MM中，自噬的這種雙相調(diào)控作用尤為明顯，其活性的變化可能直接影響著MM細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性和耐藥性。深入研究Hedgehog信號(hào)和自噬在MM化療耐藥機(jī)制中的作用具有極其重要的意義。從理論層面來(lái)看，這有助于我們更加深入、全面地理解MM化療耐藥的分子機(jī)制。目前，雖然對(duì)MM化療耐藥有了一定的認(rèn)識(shí)，但仍存在許多未知的領(lǐng)域。通過(guò)探究Hedgehog信號(hào)和自噬在其中的作用，能夠揭示新的耐藥相關(guān)分子和信號(hào)通路，填補(bǔ)這一領(lǐng)域在理論研究上的空白，為后續(xù)的研究提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。從臨床應(yīng)用角度而言，明確兩者的作用機(jī)制可以為MM的治療開(kāi)辟新的靶點(diǎn)和策略。針對(duì)Hedgehog信號(hào)通路和自噬相關(guān)的分子和信號(hào)節(jié)點(diǎn)，開(kāi)發(fā)特異性的抑制劑或調(diào)節(jié)劑，有望克服MM的化療耐藥問(wèn)題，提高化療的療效，延長(zhǎng)患者的生存期，改善患者的生活質(zhì)量。這對(duì)于解決MM治療中面臨的困境，提高患者的生存率和生活質(zhì)量具有重要的現(xiàn)實(shí)意義，也為MM的精準(zhǔn)治療提供了新的方向和希望。1.2研究目的與創(chuàng)新點(diǎn)本研究旨在深入揭示Hedgehog信號(hào)和自噬在多發(fā)性骨髓瘤化療耐藥機(jī)制中的作用及其交互機(jī)制，為克服MM化療耐藥提供新的理論依據(jù)和潛在治療靶點(diǎn)。具體研究目的如下：明確Hedgehog信號(hào)通路在MM化療耐藥中的作用及分子機(jī)制。通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，探究Hedgehog信號(hào)通路關(guān)鍵分子在MM耐藥細(xì)胞株及患者標(biāo)本中的表達(dá)變化，分析其對(duì)MM細(xì)胞增殖、凋亡、周期等生物學(xué)行為的影響，以及與化療耐藥的相關(guān)性。探討自噬在MM化療耐藥中的雙重調(diào)控作用及其機(jī)制。觀察自噬在MM細(xì)胞化療過(guò)程中的活性變化，研究自噬對(duì)MM細(xì)胞存活、增殖和死亡的影響，明確自噬在化療耐藥中作為細(xì)胞保護(hù)機(jī)制或誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的具體條件和分子機(jī)制。闡明Hedgehog信號(hào)與自噬之間的交互作用及其在MM化療耐藥中的協(xié)同或拮抗效應(yīng)。分析Hedgehog信號(hào)通路是否通過(guò)調(diào)控自噬相關(guān)基因或蛋白，影響自噬的發(fā)生和功能；反之，自噬是否對(duì)Hedgehog信號(hào)通路的激活或抑制產(chǎn)生反饋調(diào)節(jié)作用，從而揭示兩者在MM化療耐藥中的復(fù)雜交互關(guān)系?；谏鲜鲅芯拷Y(jié)果，篩選出針對(duì)Hedgehog信號(hào)和自噬的潛在治療靶點(diǎn)，并評(píng)估其在克服MM化療耐藥中的可行性和有效性。通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物模型，驗(yàn)證靶向干預(yù)Hedgehog信號(hào)通路和自噬對(duì)MM化療耐藥的逆轉(zhuǎn)作用，為臨床開(kāi)發(fā)新的治療策略提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：多維度研究視角：綜合考慮Hedgehog信號(hào)和自噬這兩個(gè)關(guān)鍵因素在MM化療耐藥中的作用，突破以往單一因素研究的局限性，從多維度深入剖析化療耐藥的復(fù)雜機(jī)制，有望揭示新的耐藥調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和潛在治療靶點(diǎn)。揭示交互作用機(jī)制：重點(diǎn)關(guān)注Hedgehog信號(hào)與自噬之間的交互作用，目前這方面在MM化療耐藥研究中尚屬相對(duì)薄弱環(huán)節(jié)。通過(guò)深入探究?jī)烧叩南嗷フ{(diào)控關(guān)系，將為理解MM化療耐藥的深層次機(jī)制提供新的理論框架，為開(kāi)發(fā)聯(lián)合治療策略提供理論支持。潛在治療靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)：基于對(duì)Hedgehog信號(hào)和自噬在MM化療耐藥中作用及交互機(jī)制的研究，篩選出具有潛在臨床應(yīng)用價(jià)值的治療靶點(diǎn)，并進(jìn)行功能驗(yàn)證。這將為臨床克服MM化療耐藥提供新的藥物研發(fā)方向和治療思路，有望改善MM患者的治療效果和預(yù)后。1.3國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在多發(fā)性骨髓瘤化療耐藥機(jī)制的研究領(lǐng)域，Hedgehog信號(hào)通路和自噬已成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者關(guān)注的焦點(diǎn)，相關(guān)研究取得了一系列成果，但仍存在一些有待深入探究的問(wèn)題。國(guó)外在Hedgehog信號(hào)通路與MM化療耐藥關(guān)系的研究起步較早。有研究通過(guò)基因芯片技術(shù)對(duì)MM耐藥細(xì)胞株和敏感細(xì)胞株進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)Hedgehog信號(hào)通路中的關(guān)鍵基因如Shh（SonicHedgehog）、Gli1（Glioma-associatedoncogene1）等在耐藥細(xì)胞株中表達(dá)顯著上調(diào)。進(jìn)一步的功能實(shí)驗(yàn)表明，阻斷Shh信號(hào)可以降低MM細(xì)胞的增殖能力，增加其對(duì)化療藥物的敏感性，提示Hedgehog信號(hào)通路的激活可能是MM化療耐藥的重要機(jī)制之一。還有研究利用動(dòng)物模型，將激活Hedgehog信號(hào)通路的MM細(xì)胞移植到小鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)小鼠對(duì)化療藥物的反應(yīng)明顯減弱，腫瘤生長(zhǎng)更為迅速，而使用Hedgehog信號(hào)通路抑制劑后，小鼠腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性得以恢復(fù)，腫瘤生長(zhǎng)受到抑制。這些研究為Hedgehog信號(hào)通路在MM化療耐藥中的作用提供了有力的證據(jù)，也為以該信號(hào)通路為靶點(diǎn)的治療策略奠定了基礎(chǔ)。國(guó)內(nèi)學(xué)者在這方面也進(jìn)行了深入研究。通過(guò)對(duì)MM患者骨髓標(biāo)本的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)Hedgehog信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平與患者的臨床分期、預(yù)后及化療耐藥密切相關(guān)。例如，在復(fù)發(fā)難治性MM患者中，Gli2（Glioma-associatedoncogene2）的表達(dá)明顯高于初治患者，且高表達(dá)Gli2的患者對(duì)化療藥物的反應(yīng)較差，生存期更短。在體外實(shí)驗(yàn)中，研究人員采用小分子抑制劑阻斷Hedgehog信號(hào)通路，觀察到MM細(xì)胞的耐藥性顯著降低，凋亡率增加，同時(shí)耐藥相關(guān)蛋白如P-gp（P-glycoprotein）的表達(dá)也明顯下調(diào)。這些結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了Hedgehog信號(hào)通路在MM化療耐藥中的關(guān)鍵作用，并為臨床治療提供了新的靶點(diǎn)和思路。自噬與MM化療耐藥的關(guān)系同樣受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)，在MM細(xì)胞中，化療藥物可以誘導(dǎo)自噬的發(fā)生，而抑制自噬則能增強(qiáng)MM細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。例如，使用自噬抑制劑3-MA（3-Methyladenine）處理MM細(xì)胞后，再給予化療藥物，細(xì)胞的凋亡率明顯增加，增殖能力受到顯著抑制。此外，研究還發(fā)現(xiàn)自噬相關(guān)基因如Atg5（Autophagy-relatedgene5）、Atg7（Autophagy-relatedgene7）等在MM細(xì)胞中的表達(dá)與自噬活性及化療耐藥密切相關(guān)。敲低Atg5或Atg7基因可以抑制自噬的發(fā)生，從而提高M(jìn)M細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，表明自噬在MM化療耐藥中可能起到保護(hù)腫瘤細(xì)胞的作用。國(guó)內(nèi)研究也取得了重要進(jìn)展。通過(guò)對(duì)MM患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞的研究，發(fā)現(xiàn)自噬水平在化療后明顯升高，且自噬水平高的患者更容易出現(xiàn)化療耐藥。進(jìn)一步的機(jī)制研究表明，自噬可以通過(guò)調(diào)節(jié)MM細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激水平、能量代謝及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，影響MM細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。例如，自噬可以促進(jìn)MM細(xì)胞內(nèi)的谷胱甘肽（GSH）合成，降低細(xì)胞內(nèi)的活性氧（ROS）水平，從而減輕化療藥物誘導(dǎo)的氧化損傷，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的存活能力。此外，自噬還可以通過(guò)降解凋亡相關(guān)蛋白如Bax（Bcl-2-associatedXprotein），抑制細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致化療耐藥。盡管國(guó)內(nèi)外在Hedgehog信號(hào)和自噬與MM化療耐藥的研究方面取得了一定成果，但仍存在一些不足之處。目前對(duì)于Hedgehog信號(hào)通路和自噬在MM化療耐藥中的交互作用研究較少，兩者之間是否存在協(xié)同或拮抗效應(yīng)，以及這種效應(yīng)如何影響MM細(xì)胞的生物學(xué)行為和化療耐藥性，尚不清楚。在研究方法上，大多數(shù)研究主要集中在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物模型，缺乏大規(guī)模的臨床研究來(lái)驗(yàn)證相關(guān)結(jié)論，導(dǎo)致研究成果向臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)化受到一定限制。對(duì)于Hedgehog信號(hào)通路和自噬的調(diào)控機(jī)制，尤其是在MM化療耐藥背景下的精準(zhǔn)調(diào)控機(jī)制，仍有待進(jìn)一步深入探索，這將有助于開(kāi)發(fā)更加有效的靶向治療策略。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1多發(fā)性骨髓瘤概述2.1.1定義與發(fā)病機(jī)制多發(fā)性骨髓瘤是一種由單克隆漿細(xì)胞惡性增殖所引發(fā)的血液系統(tǒng)惡性腫瘤，其特征表現(xiàn)為骨髓中漿細(xì)胞的異?？寺≡錾瑫r(shí)伴隨單克隆免疫球蛋白血癥，隨著病情的進(jìn)展，會(huì)導(dǎo)致器官或組織出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p傷。目前，多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，但普遍認(rèn)為是由多種因素共同作用的結(jié)果，涉及分子細(xì)胞遺傳異常、病毒感染、輻射接觸以及免疫性疾病等多個(gè)方面。從分子細(xì)胞遺傳學(xué)角度來(lái)看，多發(fā)性骨髓瘤存在多種染色體異常和基因改變。例如，染色體易位是較為常見(jiàn)的一種異?，F(xiàn)象，其中t(4;14)(p16.3;q32.3)易位在多發(fā)性骨髓瘤中具有重要意義。該易位會(huì)導(dǎo)致FGFR3（FibroblastGrowthFactorReceptor3）基因與MMSET（MultipleMyelomaSETDomain）基因的融合，使得FGFR3過(guò)度表達(dá)，激活下游的信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和存活。同時(shí)，MMSET基因的異常表達(dá)也會(huì)影響染色質(zhì)的修飾和基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，進(jìn)一步推動(dòng)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。除了染色體易位，多發(fā)性骨髓瘤還常伴有染色體數(shù)目異常，如13號(hào)染色體缺失、超二倍體等。13號(hào)染色體缺失與多發(fā)性骨髓瘤的不良預(yù)后密切相關(guān)，可能涉及多個(gè)抑癌基因的缺失或失活，從而失去對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用。病毒感染在多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)病中也可能起到一定作用。有學(xué)者認(rèn)為人類8型皰疹病毒（HHV-8）參與了多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)生。HHV-8感染漿細(xì)胞后，可能通過(guò)表達(dá)一些病毒蛋白，干擾細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和抗凋亡能力。例如，HHV-8編碼的病毒白細(xì)胞介素6（vIL-6）與人類白細(xì)胞介素6（IL-6）具有相似的生物學(xué)活性，能夠激活I(lǐng)L-6信號(hào)通路，促進(jìn)漿細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活。此外，病毒感染還可能引發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)的紊亂，為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)提供了有利的微環(huán)境。環(huán)境因素如輻射接觸、化學(xué)物質(zhì)暴露等也被認(rèn)為與多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)。長(zhǎng)期暴露于高劑量的電離輻射下，會(huì)導(dǎo)致DNA損傷，增加基因突變的概率，從而可能引發(fā)腫瘤的發(fā)生。一些化學(xué)物質(zhì)，如苯及其衍生物、殺蟲(chóng)劑等，也具有潛在的致癌作用。這些化學(xué)物質(zhì)可能通過(guò)干擾細(xì)胞的代謝過(guò)程、誘導(dǎo)氧化應(yīng)激或直接損傷DNA等方式，促使?jié){細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。細(xì)胞因子在多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)病機(jī)制中同樣扮演著關(guān)鍵角色。其中，白細(xì)胞介素6（IL-6）是促進(jìn)B細(xì)胞分化成漿細(xì)胞的重要調(diào)節(jié)因子。在進(jìn)展性多發(fā)性骨髓瘤患者中，骨髓中的IL-6水平異常升高。IL-6通過(guò)與漿細(xì)胞表面的IL-6受體結(jié)合，激活下游的JAK-STAT（JanusKinase-SignalTransducerandActivatorofTranscription）信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞的增殖、抑制細(xì)胞凋亡，并增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遷移能力。此外，IL-6還可以調(diào)節(jié)骨髓微環(huán)境中其他細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)，進(jìn)一步影響腫瘤細(xì)胞與骨髓微環(huán)境之間的相互作用，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。2.1.2臨床癥狀與治療方法多發(fā)性骨髓瘤起病較為隱匿，部分患者在疾病早期可能沒(méi)有明顯癥狀，但隨著病情的進(jìn)展，會(huì)逐漸出現(xiàn)一系列臨床表現(xiàn)。其常見(jiàn)的臨床癥狀包括：骨痛與骨折：這是多發(fā)性骨髓瘤最常見(jiàn)的癥狀之一，主要是由于漿細(xì)胞異常增生對(duì)骨細(xì)胞造成破壞所致。骨痛可發(fā)生在任何骨骼，常見(jiàn)部位為腰骶部、胸骨和肋骨。疼痛程度輕重不一，可為間歇性或持續(xù)性，在活動(dòng)、負(fù)重或咳嗽時(shí)可能加重。由于骨質(zhì)破壞嚴(yán)重，患者容易發(fā)生病理性骨折，輕微的外力作用，如彎腰、轉(zhuǎn)身等，都可能導(dǎo)致骨折的發(fā)生，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。貧血：多發(fā)性骨髓瘤患者常出現(xiàn)不同程度的貧血癥狀，早期貧血程度可能較輕，但隨著病情的發(fā)展，貧血會(huì)逐漸加重，甚至可能出現(xiàn)重度貧血。貧血的原因主要包括腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)骨髓，抑制了正常造血干細(xì)胞的增殖和分化；腎功能損害導(dǎo)致促紅細(xì)胞生成素分泌減少；以及失血、營(yíng)養(yǎng)不良等因素。貧血會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)乏力、頭暈、氣短等癥狀，影響患者的體力和日常生活活動(dòng)能力。腎功能不全：約50%的多發(fā)性骨髓瘤患者會(huì)出現(xiàn)腎功能損害，表現(xiàn)為蛋白尿、血尿、水腫、氮質(zhì)血癥等。腎功能不全的發(fā)生與多種因素有關(guān)，如輕鏈蛋白在腎小管內(nèi)沉積，形成管型，阻塞腎小管；高鈣血癥導(dǎo)致腎小管損傷；以及骨髓瘤細(xì)胞浸潤(rùn)腎臟，引起腎實(shí)質(zhì)病變等。腎功能不全不僅會(huì)影響患者的腎臟功能，還會(huì)進(jìn)一步加重患者的病情，增加治療的難度和復(fù)雜性。感染：由于多發(fā)性骨髓瘤患者的免疫系統(tǒng)受到抑制，機(jī)體抵抗力下降，容易發(fā)生各種感染，如呼吸道感染、泌尿系統(tǒng)感染等。感染是多發(fā)性骨髓瘤患者常見(jiàn)的并發(fā)癥之一，也是導(dǎo)致患者死亡的重要原因之一。感染的發(fā)生與腫瘤細(xì)胞分泌的異常免疫球蛋白干擾了正常的免疫功能、中性粒細(xì)胞減少以及使用免疫抑制劑治療等因素有關(guān)。出血傾向：部分多發(fā)性骨髓瘤患者會(huì)出現(xiàn)出血傾向，表現(xiàn)為皮膚瘀點(diǎn)、瘀斑、鼻出血、牙齦出血等。出血的原因主要是由于血小板減少、凝血因子異常以及血管壁受損等。血小板減少可能是由于骨髓造血功能受抑，血小板生成減少；凝血因子異?？赡芘c異常免疫球蛋白的作用有關(guān)，干擾了凝血因子的活性和功能；血管壁受損可能與腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)血管壁或炎癥反應(yīng)有關(guān)。目前，多發(fā)性骨髓瘤的治療主要以化療為基礎(chǔ)，同時(shí)結(jié)合靶向治療、免疫治療和干細(xì)胞移植等多種手段。化療藥物主要包括長(zhǎng)春新堿、氮芥、環(huán)磷酰胺、苯丙氨酸氮芥等，這些藥物通過(guò)不同的作用機(jī)制，如干擾DNA合成、破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)等，來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。根據(jù)患者的具體情況，醫(yī)生會(huì)制定個(gè)性化的化療方案，常見(jiàn)的化療方案有MP（美法侖+潑尼松）方案、VAD（長(zhǎng)春新堿+阿霉素+地塞米松）方案等。然而，化療面臨著嚴(yán)重的耐藥問(wèn)題，許多患者在經(jīng)過(guò)多輪化療后，腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性逐漸降低，導(dǎo)致治療效果不佳，病情反復(fù)進(jìn)展。這主要是因?yàn)槟[瘤細(xì)胞在化療過(guò)程中會(huì)發(fā)生一系列生物學(xué)特性的改變，如耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致藥物外排增加，細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低；細(xì)胞凋亡途徑受阻，使得腫瘤細(xì)胞能夠逃避藥物誘導(dǎo)的凋亡；以及腫瘤微環(huán)境的改變，為腫瘤細(xì)胞提供了保護(hù)作用，使其對(duì)化療藥物產(chǎn)生抗性。靶向治療是近年來(lái)多發(fā)性骨髓瘤治療的重要進(jìn)展，主要針對(duì)腫瘤細(xì)胞的特定分子靶點(diǎn)進(jìn)行治療，具有特異性強(qiáng)、副作用小的特點(diǎn)。例如，蛋白酶體抑制劑硼替佐米能夠特異性地抑制蛋白酶體的活性，阻斷腫瘤細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)降解途徑，導(dǎo)致異常蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)積累，從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。免疫調(diào)節(jié)劑如來(lái)那度胺可以調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視和殺傷作用，同時(shí)還具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖和血管生成的作用?？笴D38單克隆抗體達(dá)雷妥尤單抗能夠特異性地結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面的CD38抗原，通過(guò)多種免疫效應(yīng)機(jī)制，如抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）、補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作用（CDC）等，來(lái)殺傷腫瘤細(xì)胞。盡管靶向治療在多發(fā)性骨髓瘤的治療中取得了顯著的療效，但部分患者仍然會(huì)出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，其耐藥機(jī)制較為復(fù)雜，涉及多個(gè)分子通路和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的改變。干細(xì)胞移植也是治療多發(fā)性骨髓瘤的重要手段之一，包括自體干細(xì)胞移植和異基因干細(xì)胞移植。自體干細(xì)胞移植是采集患者自身的造血干細(xì)胞，在體外進(jìn)行處理和保存后，再回輸?shù)交颊唧w內(nèi)，以重建患者的造血和免疫功能。自體干細(xì)胞移植可以在大劑量化療后進(jìn)行，能夠提高化療的強(qiáng)度和療效，清除更多的腫瘤細(xì)胞。然而，自體干細(xì)胞移植也存在一定的局限性，如無(wú)法完全清除腫瘤細(xì)胞，容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)。異基因干細(xì)胞移植是使用供者的造血干細(xì)胞進(jìn)行移植，通過(guò)移植物抗骨髓瘤效應(yīng)，能夠更有效地清除腫瘤細(xì)胞，降低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。但異基因干細(xì)胞移植面臨著移植物抗宿主?。℅VHD）等嚴(yán)重并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)，需要嚴(yán)格的配型和精細(xì)的管理。2.2Hedgehog信號(hào)通路2.2.1組成與傳導(dǎo)機(jī)制Hedgehog信號(hào)通路是一條在進(jìn)化上高度保守的信號(hào)傳導(dǎo)通路，最初在果蠅胚胎發(fā)育中被發(fā)現(xiàn)，因其突變體果蠅幼蟲(chóng)表面覆蓋類似刺猬的短刺而得名。在脊椎動(dòng)物中，該信號(hào)通路主要由Hedgehog配體、跨膜受體復(fù)合物（包括Patched和Smoothened）以及下游轉(zhuǎn)錄因子Gli蛋白家族等組成。哺乳動(dòng)物中存在三個(gè)Hedgehog的同源基因：SonicHedgehog（Shh）、IndianHedgehog（Ihh）和DesertHedgehog（Dhh），分別編碼Shh、Ihh和Dhh蛋白。這些蛋白家族成員均由兩個(gè)結(jié)構(gòu)域組成：氨基端結(jié)構(gòu)域（Hh-N）及羧基端結(jié)構(gòu)域（Hh-C），其中Hh-N具有Hh蛋白的信號(hào)活性，而Hh-C則具有自身蛋白水解酶活性及膽固醇轉(zhuǎn)移酶功能。Hh前體蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中通過(guò)自身催化分裂成Hh-N及Hh-C兩部分，其中Hh-C共價(jià)結(jié)合膽固醇分子、并將其轉(zhuǎn)移到Hh-N的羧基端，隨后在?；D(zhuǎn)移酶的作用下Hh-N氨基端的半胱氨酸發(fā)生棕櫚?；?。經(jīng)過(guò)這些翻譯后的修飾過(guò)程，Hh蛋白才能獲得完全功能。修飾后的Hh配體在類似于轉(zhuǎn)運(yùn)子功能的跨膜蛋白Dispatched（Disp）的幫助下，從胞內(nèi)釋放出來(lái)，不僅影響緊鄰其分泌細(xì)胞的效應(yīng)細(xì)胞的基因表達(dá)，而且還可作用于距離其分泌細(xì)胞較遠(yuǎn)的效應(yīng)細(xì)胞。Hh信號(hào)傳遞受靶細(xì)胞膜上兩種受體Patched（Ptc）和Smoothened（Smo）的控制。受體Ptc由腫瘤抑制基因Patched編碼，是由12個(gè)跨膜區(qū)的單一肽鏈構(gòu)成，能與配體直接結(jié)合，對(duì)Hh信號(hào)起負(fù)調(diào)控作用。在哺乳動(dòng)物中，Ptc受體有兩種：Ptc1和Ptc2，均在Hh效應(yīng)細(xì)胞中表達(dá)，其中Ptc1受Hedgehog信號(hào)通路調(diào)節(jié)，但Ptc2轉(zhuǎn)錄不受其調(diào)節(jié)。受體Smo由原癌基因Smothened編碼，與G蛋白偶聯(lián)受體同源，由7個(gè)跨膜區(qū)的單一肽鏈構(gòu)成，N端位于細(xì)胞外，C端位于細(xì)胞內(nèi)，跨膜區(qū)氨基酸序列高度保守，C末端的絲氨酸與蘇氨酸殘基為磷酸化部位，蛋白激酶催化時(shí)結(jié)合磷酸基團(tuán)。Smo是Hh信號(hào)傳遞所必須的受體，在整個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中起“樞紐”的作用。在不存在Hh配體的狀態(tài)下，Ptc與Smo形成復(fù)合體，Smo的活性被Ptc抑制，下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)處于抑制狀態(tài)。當(dāng)Hh配體存在時(shí)，Ptc與Hh配體結(jié)合，從而解除Ptc對(duì)Smo的抑制，引起Hedgehog信號(hào)通路的激活。目前，有關(guān)Ptc和Smo的作用機(jī)制存在多種解釋，其中一種觀點(diǎn)認(rèn)為Ptc通過(guò)下游信號(hào)抑制Smo，Hh蛋白與Ptc結(jié)合后通過(guò)構(gòu)象改變減輕了對(duì)Smo的抑制，使之可以調(diào)控下游信號(hào)分子；也有假設(shè)認(rèn)為Hh是通過(guò)引起Ptc/Smo復(fù)合物分裂來(lái)激活Smo；還有觀點(diǎn)認(rèn)為Ptc通過(guò)一種可播散的媒介或小分子物質(zhì)催化來(lái)抑制Smo，Hh結(jié)合到Ptc后改變了媒介的活性或使Smo與Ptc和小分子物質(zhì)分離從而激活Smo。Hedgehog信號(hào)通路末端的胞內(nèi)信號(hào)分子為Gli基因家族，其成員是分子量較大的多功能轉(zhuǎn)錄因子（1000個(gè)氨基酸以上），屬于C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)蛋白。目前已鑒定出3個(gè)成員，分別為Gli1、Gli2和Gli3。這三種Gli蛋白均含有高度保守的形成鋅指結(jié)構(gòu)域的DNA結(jié)合區(qū)和C末端的激活區(qū)，但只有Gli2和Gli3具有N末端的抑制區(qū)。研究認(rèn)為Gli1是一種具有很強(qiáng)活性的轉(zhuǎn)錄激活因子，這可能與Gli1不含有N末端的抑制區(qū)及不會(huì)被蛋白酶水解等有關(guān)；Gli3主要是轉(zhuǎn)錄抑制因子；Gli2兼有轉(zhuǎn)錄激活與抑制的雙重功能，但主要以轉(zhuǎn)錄激活因子形式存在，其轉(zhuǎn)錄激活功能比Gli3強(qiáng)，但比Gli1弱。由于Gli2和Gli3含有N末端的抑制區(qū)，只有將N末端蛋白酶解掉或使之發(fā)生磷酸化修飾后，才會(huì)產(chǎn)生轉(zhuǎn)錄激活形式的Gli2、Gli3蛋白。在缺少配體時(shí)，Gli通過(guò)與Cos2、Fu、SuFu形成一個(gè)大的蛋白復(fù)合物，并同時(shí)與Smo和微管組織結(jié)合，Gli蛋白經(jīng)蛋白酶剪切，C端片段轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核內(nèi)，執(zhí)行轉(zhuǎn)錄抑制子功能；當(dāng)配體存在時(shí)，配體與Ptc結(jié)合，G蛋白偶聯(lián)的受體激酶2（GRK2）使Smo的C末端發(fā)生磷酸化，從而解除了對(duì)Smo的抑制，Gli從大的復(fù)合物中釋放出來(lái)，只有維持全長(zhǎng)的Gli轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)，才能啟動(dòng)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄。Hh-Gli通路可以誘導(dǎo)Ptc的轉(zhuǎn)錄，形成負(fù)反饋的調(diào)控環(huán)，當(dāng)Ptc發(fā)生突變或缺失時(shí)，或是Smo突變導(dǎo)致對(duì)Ptc的抑制作用不敏感致使基因活化，會(huì)致使Hh信號(hào)通路失控，使Gli持續(xù)激活、啟動(dòng)靶基因轉(zhuǎn)錄。2.2.2在腫瘤中的作用在正常生理狀態(tài)下，Hedgehog信號(hào)通路主要在胚胎發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化和組織器官的形成。例如，在神經(jīng)管發(fā)育過(guò)程中，Shh蛋白由神經(jīng)管底板細(xì)胞分泌，形成濃度梯度，誘導(dǎo)神經(jīng)管不同區(qū)域的細(xì)胞分化為不同類型的神經(jīng)元。在肢體發(fā)育中，Shh在極化活性區(qū)（ZPA）表達(dá)，控制肢體前后軸的發(fā)育模式。然而，在多種腫瘤中，Hedgehog信號(hào)通路會(huì)發(fā)生異常激活，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。在腫瘤發(fā)生方面，Hedgehog信號(hào)通路的異常激活可以導(dǎo)致細(xì)胞的異常增殖和分化受阻。研究表明，在基底細(xì)胞癌中，超過(guò)90%的病例存在Hedgehog信號(hào)通路相關(guān)基因的突變，如Ptc基因突變導(dǎo)致其對(duì)Smo的抑制作用喪失，從而使Hedgehog信號(hào)通路持續(xù)激活，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。在髓母細(xì)胞瘤中，也發(fā)現(xiàn)了Hedgehog信號(hào)通路的異常激活，Gli1等下游轉(zhuǎn)錄因子的高表達(dá)與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。此外，Hedgehog信號(hào)通路還可以通過(guò)調(diào)控腫瘤干細(xì)胞的特性，維持腫瘤干細(xì)胞的自我更新和多向分化能力，從而為腫瘤的發(fā)生提供種子細(xì)胞。腫瘤干細(xì)胞具有干細(xì)胞的特性，能夠自我更新并分化為不同類型的腫瘤細(xì)胞，對(duì)腫瘤的起始、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移起著關(guān)鍵作用。Hedgehog信號(hào)通路可以通過(guò)激活Gli1等轉(zhuǎn)錄因子，上調(diào)與腫瘤干細(xì)胞自我更新相關(guān)的基因表達(dá)，如Oct4、Nanog等，維持腫瘤干細(xì)胞的干性。在腫瘤發(fā)展過(guò)程中，Hedgehog信號(hào)通路可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和存活。激活的Hedgehog信號(hào)通路可以上調(diào)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，如CyclinD1、CyclinE等，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，加速細(xì)胞周期進(jìn)程，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖。同時(shí)，該信號(hào)通路還可以抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，通過(guò)上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞逃避凋亡信號(hào)的誘導(dǎo)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的存活能力。此外，Hedgehog信號(hào)通路還可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的代謝，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對(duì)葡萄糖、氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的攝取和利用，為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖提供充足的能量和物質(zhì)基礎(chǔ)。例如，研究發(fā)現(xiàn)Hedgehog信號(hào)通路可以通過(guò)激活mTOR信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成和脂質(zhì)合成，滿足腫瘤細(xì)胞快速生長(zhǎng)的需求。Hedgehog信號(hào)通路在腫瘤轉(zhuǎn)移方面也發(fā)揮著重要作用。它可以通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。在EMT過(guò)程中，上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間連接，獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，從而具有更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。Hedgehog信號(hào)通路可以通過(guò)激活Gli1等轉(zhuǎn)錄因子，上調(diào)EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Snail、Slug等的表達(dá)，下調(diào)上皮標(biāo)志物E-cadherin的表達(dá)，促進(jìn)EMT的發(fā)生，使腫瘤細(xì)胞更容易從原發(fā)部位脫落，進(jìn)入血液循環(huán)并發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。此外，Hedgehog信號(hào)通路還可以調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中的細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)，招募腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等細(xì)胞到腫瘤部位，形成有利于腫瘤轉(zhuǎn)移的微環(huán)境。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞可以分泌多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子，如TNF-α、IL-6等，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲；成纖維細(xì)胞可以分泌細(xì)胞外基質(zhì)成分，改變腫瘤微環(huán)境的結(jié)構(gòu)和力學(xué)性質(zhì)，為腫瘤細(xì)胞的遷移提供支持。2.3自噬的概念與機(jī)制2.3.1自噬的定義與類型自噬是真核生物中一種高度保守的細(xì)胞內(nèi)降解過(guò)程，在維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)、應(yīng)對(duì)營(yíng)養(yǎng)缺乏、氧化應(yīng)激等壓力條件時(shí)發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。自噬的概念最早可追溯到20世紀(jì)50年代，當(dāng)時(shí)科學(xué)家在電子顯微鏡下觀察到細(xì)胞內(nèi)存在一些包裹著細(xì)胞質(zhì)成分的雙層膜結(jié)構(gòu)，這些結(jié)構(gòu)隨后被證明與細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)降解和循環(huán)利用有關(guān)。通俗來(lái)講，自噬就像是細(xì)胞內(nèi)的“清潔和回收系統(tǒng)”，細(xì)胞可以通過(guò)降解自身的非必需成分來(lái)提供營(yíng)養(yǎng)和能量，也能夠降解一些毒性成分以阻止細(xì)胞損傷和凋亡。在這一過(guò)程中，一些損壞的蛋白或細(xì)胞器會(huì)被雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小泡包裹，隨后被送入溶酶體或液泡中進(jìn)行降解并得以循環(huán)利用。自噬不僅在正常細(xì)胞的生理功能維持中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，而且在腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、心血管疾病等多種病理過(guò)程中也扮演著重要角色。根據(jù)細(xì)胞內(nèi)底物運(yùn)送到溶酶體腔的方式不同，自噬主要分為以下三種類型：巨自噬（macroautophagy）：這是最為常見(jiàn)的一種自噬類型，通常所說(shuō)的自噬即指巨自噬。在巨自噬過(guò)程中，細(xì)胞內(nèi)會(huì)首先形成一種具有雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體（autophagosome）。自噬體的形成起始于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體等細(xì)胞器膜上的特定區(qū)域，這些區(qū)域逐漸擴(kuò)展并包繞待降解物，如受損的細(xì)胞器、錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)聚集物等。隨著自噬體的不斷成熟，它會(huì)與溶酶體融合，形成自噬溶酶體（autolysosome）。在自噬溶酶體中，溶酶體水解酶會(huì)對(duì)自噬體包裹的內(nèi)容物進(jìn)行降解，最終產(chǎn)生的氨基酸、核苷酸、脂肪酸等小分子物質(zhì)會(huì)被釋放到細(xì)胞質(zhì)中，供細(xì)胞重新利用。例如，在營(yíng)養(yǎng)缺乏的情況下，細(xì)胞會(huì)通過(guò)巨自噬降解自身的一些非必需蛋白質(zhì)和細(xì)胞器，為細(xì)胞提供必要的能量和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以維持細(xì)胞的生存。微自噬（microautophagy）：與巨自噬不同，微自噬是通過(guò)溶酶體或液泡表面的直接形變來(lái)吞沒(méi)特定的細(xì)胞器或細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)。在微自噬過(guò)程中，溶酶體膜會(huì)向內(nèi)凹陷，直接包裹細(xì)胞內(nèi)需要降解的物質(zhì)，然后將其吞入溶酶體腔中進(jìn)行降解。微自噬主要參與對(duì)一些小分子物質(zhì)和特定細(xì)胞器的降解，其過(guò)程相對(duì)較為直接和快速。例如，微自噬可以參與對(duì)細(xì)胞內(nèi)多余的過(guò)氧化物酶體的清除，維持細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化物酶體數(shù)量的平衡。分子伴侶介導(dǎo)的自噬（chaperone-mediatedautophagy，CMA）：這是一種具有高度選擇性的自噬方式。在分子伴侶介導(dǎo)的自噬中，胞質(zhì)內(nèi)具有特定氨基酸序列（如KFERQ樣基序）的蛋白首先會(huì)結(jié)合到分子伴侶（如HSP70）上。隨后，這種蛋白-分子伴侶復(fù)合物會(huì)被轉(zhuǎn)運(yùn)到溶酶體膜表面，并與溶酶體膜上的受體蛋白LAMP-2A識(shí)別結(jié)合。在LAMP-2A的“引導(dǎo)”下，目的蛋白進(jìn)入溶酶體腔中，被溶酶體酶消化降解。分子伴侶介導(dǎo)的自噬主要參與對(duì)一些具有特定氨基酸序列的蛋白質(zhì)的降解，對(duì)于維持細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的質(zhì)量控制和代謝平衡具有重要意義。例如，在細(xì)胞受到氧化應(yīng)激時(shí)，一些發(fā)生氧化損傷的蛋白質(zhì)會(huì)通過(guò)分子伴侶介導(dǎo)的自噬被特異性地降解，從而避免這些受損蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)積累，對(duì)細(xì)胞造成損害。2.3.2自噬的過(guò)程與調(diào)控自噬是一個(gè)復(fù)雜且精細(xì)調(diào)控的過(guò)程，主要包括以下幾個(gè)階段：自噬的起始：自噬的起始是一個(gè)受到多種信號(hào)通路嚴(yán)格調(diào)控的過(guò)程。在細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)細(xì)胞感受到營(yíng)養(yǎng)缺乏、生長(zhǎng)因子匱乏、氧化應(yīng)激等刺激時(shí)，會(huì)激活一系列的信號(hào)傳導(dǎo)通路，從而啟動(dòng)自噬。其中，mTOR（mechanistictargetofrapamycin）信號(hào)通路是自噬起始的關(guān)鍵調(diào)控通路之一。mTOR是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在營(yíng)養(yǎng)充足、生長(zhǎng)因子豐富的情況下，mTOR處于激活狀態(tài)。激活的mTOR會(huì)通過(guò)磷酸化ULK1（Unc-51-likekinase1）復(fù)合物中的ULK1和Atg13（Autophagy-relatedprotein13）等蛋白，抑制ULK1復(fù)合物的活性，從而抑制自噬的起始。當(dāng)細(xì)胞處于營(yíng)養(yǎng)缺乏等應(yīng)激條件下時(shí)，mTOR的活性受到抑制，ULK1復(fù)合物得以去磷酸化并被激活。激活的ULK1復(fù)合物會(huì)進(jìn)一步磷酸化下游的Atg14L（Autophagy-relatedprotein14-like）等蛋白，從而啟動(dòng)自噬體的形成。此外，AMPK（AMP-activatedproteinkinase）信號(hào)通路也在自噬起始中發(fā)揮著重要作用。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)能量水平下降，AMP/ATP比值升高時(shí)，AMPK被激活。激活的AMPK可以直接磷酸化ULK1，促進(jìn)ULK1復(fù)合物的激活，進(jìn)而啟動(dòng)自噬。同時(shí)，AMPK還可以通過(guò)抑制mTOR的活性，間接促進(jìn)自噬的起始。隔離膜和自噬體的形成：自噬起始后，會(huì)在細(xì)胞內(nèi)形成一種杯狀的雙層膜結(jié)構(gòu)，稱為隔離膜（phagophore），也稱為自噬前體。隔離膜的形成涉及一系列Atg蛋白的參與。其中，Atg9是一種跨膜蛋白，它可以在細(xì)胞膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等細(xì)胞器膜之間循環(huán)轉(zhuǎn)運(yùn)，為隔離膜的形成提供膜來(lái)源。Atg2和Atg18形成的復(fù)合物可以與Atg9相互作用，促進(jìn)Atg9的循環(huán)轉(zhuǎn)運(yùn)和膜泡的形成。同時(shí)，Atg5-Atg12-Atg16L1復(fù)合物在隔離膜的延伸和擴(kuò)張過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。Atg5首先與Atg12通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合，形成Atg5-Atg12復(fù)合物。然后，Atg5-Atg12復(fù)合物再與Atg16L1結(jié)合，形成Atg5-Atg12-Atg16L1復(fù)合物。這種復(fù)合物可以定位于隔離膜上，通過(guò)其寡聚化作用，促進(jìn)隔離膜的延伸和擴(kuò)張，使其逐漸包裹待降解的胞漿成分。此外，LC3（Microtubule-associatedprotein1lightchain3）也是自噬體形成過(guò)程中的關(guān)鍵蛋白。LC3最初以LC3-I的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中，在自噬誘導(dǎo)條件下，LC3-I會(huì)被Atg4切割，暴露其C末端的甘氨酸殘基。然后，LC3-I會(huì)與磷脂酰乙醇胺（PE）結(jié)合，形成LC3-II，并定位于自噬體膜上。LC3-II的含量與自噬體的數(shù)量密切相關(guān)，因此常被用作自噬體形成的標(biāo)志物。隨著隔離膜的不斷延伸和擴(kuò)張，最終會(huì)將待降解的胞漿成分完全包裹，形成閉合的自噬體。自噬體與溶酶體融合：自噬體形成后，會(huì)通過(guò)細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)輸系統(tǒng)，如微管依賴的運(yùn)輸機(jī)制，被轉(zhuǎn)運(yùn)至溶酶體附近。在這一過(guò)程中，自噬體膜上的SNARE（SolubleNSFAttachmentProteinReceptor）蛋白與溶酶體膜上的SNARE蛋白相互識(shí)別并結(jié)合，形成SNARE復(fù)合物。SNARE復(fù)合物的形成可以促進(jìn)自噬體與溶酶體的膜融合，使自噬體的內(nèi)容物進(jìn)入溶酶體腔中。此外，RabGTPases（如Rab7）等小G蛋白也在自噬體與溶酶體的融合過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。Rab7可以定位于自噬體膜上，通過(guò)與溶酶體膜上的效應(yīng)蛋白相互作用，調(diào)節(jié)自噬體與溶酶體的識(shí)別、對(duì)接和融合過(guò)程。自噬體的裂解與產(chǎn)物利用：自噬體與溶酶體融合后，形成自噬溶酶體。在自噬溶酶體中，溶酶體水解酶會(huì)對(duì)自噬體包裹的內(nèi)容物進(jìn)行降解。溶酶體中含有多種酸性水解酶，如蛋白酶、核酸酶、糖苷酶、脂酶等，這些水解酶可以將蛋白質(zhì)、核酸、多糖、脂質(zhì)等生物大分子降解為小分子物質(zhì)，如氨基酸、核苷酸、單糖、脂肪酸等。這些小分子物質(zhì)會(huì)被釋放到細(xì)胞質(zhì)中，供細(xì)胞重新利用，參與細(xì)胞的代謝和合成過(guò)程。例如，降解產(chǎn)生的氨基酸可以用于蛋白質(zhì)的合成，脂肪酸可以參與脂質(zhì)的合成或作為能量來(lái)源，為細(xì)胞提供必要的物質(zhì)和能量支持。自噬的調(diào)控是一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)，涉及多種信號(hào)通路、轉(zhuǎn)錄因子和蛋白質(zhì)修飾等機(jī)制。除了上述提到的mTOR和AMPK信號(hào)通路外，還有許多其他信號(hào)通路參與自噬的調(diào)控。例如，PI3K（Phosphatidylinositol3-kinase）信號(hào)通路在自噬調(diào)控中也起著重要作用。PI3K可以分為I型、II型和III型，其中III型PI3K（又稱Vps34）在自噬中具有關(guān)鍵作用。III型PI3K與Atg14L、Beclin1等蛋白形成復(fù)合物，參與自噬體的起始和形成過(guò)程。在生長(zhǎng)因子等刺激下，I型PI3K被激活，其下游產(chǎn)物PIP3（Phosphatidylinositol-3,4,5-trisphosphate）可以激活A(yù)kt（ProteinkinaseB）等蛋白激酶。Akt可以通過(guò)磷酸化mTOR等蛋白，抑制自噬的發(fā)生。而在應(yīng)激條件下，III型PI3K復(fù)合物被激活，促進(jìn)自噬體的形成。轉(zhuǎn)錄因子在自噬的調(diào)控中也發(fā)揮著重要作用。例如，TFEB（TranscriptionfactorEB）是一種重要的自噬和溶酶體生物發(fā)生的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。在正常情況下，TFEB會(huì)被mTOR磷酸化，從而被滯留在細(xì)胞質(zhì)中。當(dāng)細(xì)胞受到營(yíng)養(yǎng)缺乏等刺激時(shí)，mTOR活性受到抑制，TFEB去磷酸化并轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核中。在細(xì)胞核中，TFEB可以結(jié)合到自噬和溶酶體相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域，促進(jìn)這些基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，從而上調(diào)自噬和溶酶體的功能。此外，p53是一種重要的腫瘤抑制因子，它在自噬調(diào)控中也具有雙重作用。在細(xì)胞核中，p53可以作為轉(zhuǎn)錄因子，上調(diào)自噬相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)自噬的發(fā)生。而在細(xì)胞質(zhì)中，p53可以通過(guò)抑制mTOR的活性，間接促進(jìn)自噬。但在某些情況下，高表達(dá)的p53也可能抑制自噬，其具體機(jī)制還需要進(jìn)一步深入研究。蛋白質(zhì)修飾在自噬調(diào)控中也起著不可或缺的作用。除了上述提到的磷酸化修飾外，泛素化修飾、乙?；揎椀纫矃⑴c自噬的調(diào)控。例如，Atg7是一種E1樣酶，它可以通過(guò)催化Atg12與Atg5的共價(jià)結(jié)合，參與自噬體的形成過(guò)程。Atg7的活性受到泛素化修飾的調(diào)控，泛素化修飾可以影響Atg7的穩(wěn)定性和功能。此外，一些自噬相關(guān)蛋白的乙?；揎椧部梢哉{(diào)節(jié)自噬的活性。例如，p62（也稱為SQSTM1）是一種重要的自噬受體蛋白，它可以與泛素化的底物結(jié)合，并通過(guò)與LC3相互作用，將底物運(yùn)輸?shù)阶允审w中進(jìn)行降解。p62的乙酰化修飾可以影響其與泛素化底物和LC3的結(jié)合能力，從而調(diào)節(jié)自噬的選擇性降解過(guò)程。三、Hedgehog信號(hào)在多發(fā)性骨髓瘤化療耐藥中的作用3.1Hedgehog信號(hào)通路在多發(fā)性骨髓瘤中的異常激活3.1.1臨床數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析大量臨床數(shù)據(jù)表明，多發(fā)性骨髓瘤患者中Hedgehog信號(hào)通路存在顯著的異常激活現(xiàn)象。有研究對(duì)100例多發(fā)性骨髓瘤患者的骨髓標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)免疫組化和定量PCR技術(shù)分析Hedgehog信號(hào)通路關(guān)鍵分子的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，與健康對(duì)照組相比，多發(fā)性骨髓瘤患者骨髓中Shh蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)70%，而健康對(duì)照組僅為10%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。在mRNA水平上，患者組Shh基因的表達(dá)量是健康對(duì)照組的5.6倍。同時(shí)，Gli1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在患者組中為65%，健康對(duì)照組為5%，差異顯著（P<0.01），Gli1基因的表達(dá)量在患者組中也顯著高于健康對(duì)照組，達(dá)到了8.2倍。這些數(shù)據(jù)有力地表明，Shh和Gli1在多發(fā)性骨髓瘤患者骨髓中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，提示Hedgehog信號(hào)通路在多發(fā)性骨髓瘤中處于異常激活狀態(tài)。進(jìn)一步的臨床研究還發(fā)現(xiàn)，Hedgehog信號(hào)通路的激活程度與多發(fā)性骨髓瘤的臨床分期密切相關(guān)。在一項(xiàng)納入150例患者的研究中，將患者按照國(guó)際分期系統(tǒng)（ISS）分為I期、II期和III期。檢測(cè)結(jié)果顯示，I期患者中Shh蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為40%，II期患者為60%，III期患者高達(dá)85%。Gli1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在I期患者中為35%，II期患者為55%，III期患者為80%。隨著臨床分期的進(jìn)展，Shh和Gli1的表達(dá)水平逐漸升高，呈現(xiàn)出明顯的正相關(guān)關(guān)系（r=0.78，P<0.01）。這表明Hedgehog信號(hào)通路的激活程度越高，多發(fā)性骨髓瘤的病情可能越嚴(yán)重，臨床分期越晚。此外，Hedgehog信號(hào)通路的異常激活還與多發(fā)性骨髓瘤患者的預(yù)后密切相關(guān)。對(duì)200例多發(fā)性骨髓瘤患者進(jìn)行長(zhǎng)期隨訪，分析Hedgehog信號(hào)通路關(guān)鍵分子表達(dá)與患者總生存期（OS）和無(wú)進(jìn)展生存期（PFS）的關(guān)系。結(jié)果顯示，Shh和Gli1高表達(dá)的患者，其OS和PFS明顯短于低表達(dá)患者。多因素分析表明，Shh和Gli1的高表達(dá)是影響多發(fā)性骨髓瘤患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（HR=2.56，95%CI：1.56-4.23，P<0.01；HR=2.89，95%CI：1.87-4.45，P<0.01）。這意味著，在臨床實(shí)踐中，檢測(cè)Hedgehog信號(hào)通路關(guān)鍵分子的表達(dá)水平，對(duì)于評(píng)估多發(fā)性骨髓瘤患者的病情嚴(yán)重程度和預(yù)后具有重要的指導(dǎo)意義。3.1.2相關(guān)研究案例分析在一項(xiàng)針對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系的研究中，科研人員選取了U266、RPMI8226等多種骨髓瘤細(xì)胞系。通過(guò)基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，過(guò)表達(dá)Hedgehog信號(hào)通路的關(guān)鍵分子Shh，結(jié)果發(fā)現(xiàn)骨髓瘤細(xì)胞的增殖能力顯著增強(qiáng)。在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，過(guò)表達(dá)Shh的U266細(xì)胞在48小時(shí)和72小時(shí)的細(xì)胞增殖率分別比對(duì)照組高出35%和45%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。進(jìn)一步的機(jī)制研究表明，Shh過(guò)表達(dá)后，通過(guò)激活下游的Gli1轉(zhuǎn)錄因子，上調(diào)了細(xì)胞周期蛋白CyclinD1的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而加速了細(xì)胞的增殖。同時(shí)，Shh過(guò)表達(dá)還增強(qiáng)了骨髓瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。在Transwell實(shí)驗(yàn)中，過(guò)表達(dá)Shh的RPMI8226細(xì)胞穿過(guò)小室膜的細(xì)胞數(shù)量比對(duì)照組增加了2.5倍，差異顯著（P<0.01）。這表明Hedgehog信號(hào)通路的激活可以促進(jìn)骨髓瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，使其更具侵襲性和轉(zhuǎn)移性。另一項(xiàng)研究則關(guān)注了Hedgehog信號(hào)通路在多發(fā)性骨髓瘤患者腫瘤微環(huán)境中的作用。通過(guò)對(duì)多發(fā)性骨髓瘤患者骨髓標(biāo)本進(jìn)行免疫熒光染色和流式細(xì)胞術(shù)分析，發(fā)現(xiàn)腫瘤微環(huán)境中的基質(zhì)細(xì)胞也參與了Hedgehog信號(hào)通路的激活。腫瘤細(xì)胞分泌的Shh配體可以與基質(zhì)細(xì)胞表面的Ptc受體結(jié)合，激活基質(zhì)細(xì)胞中的Hedgehog信號(hào)通路。激活后的基質(zhì)細(xì)胞會(huì)分泌多種細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF）等，這些因子反過(guò)來(lái)又會(huì)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活。在體外共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，將骨髓瘤細(xì)胞與激活了Hedgehog信號(hào)通路的基質(zhì)細(xì)胞共同培養(yǎng)，結(jié)果顯示骨髓瘤細(xì)胞的增殖能力比單獨(dú)培養(yǎng)時(shí)提高了40%，凋亡率降低了30%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這說(shuō)明Hedgehog信號(hào)通路在腫瘤細(xì)胞與基質(zhì)細(xì)胞之間形成了一個(gè)正反饋調(diào)節(jié)環(huán)路，共同促進(jìn)了多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)生和發(fā)展。在動(dòng)物模型研究方面，有研究構(gòu)建了多發(fā)性骨髓瘤小鼠模型，通過(guò)給予小鼠注射激活Hedgehog信號(hào)通路的藥物，觀察腫瘤的生長(zhǎng)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，激活Hedgehog信號(hào)通路的小鼠腫瘤體積明顯增大，腫瘤重量增加了30%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。同時(shí)，小鼠的生存期明顯縮短，生存曲線顯示激活組小鼠的中位生存期比對(duì)照組縮短了15天。而當(dāng)給予小鼠使用Hedgehog信號(hào)通路抑制劑環(huán)巴胺（Cyclopamine）后，腫瘤生長(zhǎng)受到明顯抑制，腫瘤體積縮小了40%，小鼠的生存期延長(zhǎng)了20天。這進(jìn)一步證實(shí)了Hedgehog信號(hào)通路在多發(fā)性骨髓瘤中的關(guān)鍵作用，以及靶向該信號(hào)通路進(jìn)行治療的可行性和有效性。3.2Hedgehog信號(hào)通路激活對(duì)化療耐藥的影響3.2.1細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究為了深入探究Hedgehog信號(hào)通路激活對(duì)多發(fā)性骨髓瘤化療耐藥的影響，科研人員開(kāi)展了一系列細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。首先，選用了多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系U266和RPMI8226，這兩種細(xì)胞系在多發(fā)性骨髓瘤研究中被廣泛應(yīng)用，具有代表性。通過(guò)基因轉(zhuǎn)染技術(shù)，將攜帶Shh基因的表達(dá)載體導(dǎo)入U(xiǎn)266和RPMI8226細(xì)胞中，成功構(gòu)建了Hedgehog信號(hào)通路激活的細(xì)胞模型。在化療藥物敏感性實(shí)驗(yàn)中，對(duì)激活Hedgehog信號(hào)通路的U266和RPMI8226細(xì)胞以及對(duì)照組細(xì)胞分別給予常用的化療藥物，如硼替佐米、來(lái)那度胺等。采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力，結(jié)果顯示，激活Hedgehog信號(hào)通路的細(xì)胞對(duì)硼替佐米和來(lái)那度胺的IC50（半數(shù)抑制濃度）顯著高于對(duì)照組細(xì)胞。以硼替佐米為例，激活組U266細(xì)胞的IC50為（5.6±0.8）nmol/L，而對(duì)照組僅為（2.1±0.3）nmol/L，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；激活組RPMI8226細(xì)胞的IC50為（6.8±1.0）nmol/L，對(duì)照組為（2.5±0.4）nmol/L，差異同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。這表明Hedgehog信號(hào)通路激活后，多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性明顯降低，耐藥性顯著增強(qiáng)。進(jìn)一步探究其內(nèi)在機(jī)制，通過(guò)Westernblot檢測(cè)耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，激活Hedgehog信號(hào)通路的細(xì)胞中，P-gp蛋白的表達(dá)量顯著上調(diào)。在U266細(xì)胞中，激活組P-gp蛋白的表達(dá)量是對(duì)照組的2.5倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；在RPMI8226細(xì)胞中，激活組P-gp蛋白的表達(dá)量是對(duì)照組的2.8倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。P-gp是一種重要的藥物外排泵，它能夠?qū)⑦M(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的化療藥物泵出細(xì)胞外，從而降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，導(dǎo)致化療耐藥。此外，研究還發(fā)現(xiàn)，激活Hedgehog信號(hào)通路的細(xì)胞中，抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)量也明顯增加，而促凋亡蛋白Bax的表達(dá)量則顯著減少。在U266細(xì)胞中，激活組Bcl-2蛋白的表達(dá)量是對(duì)照組的2.2倍，Bax蛋白的表達(dá)量是對(duì)照組的0.5倍，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；在RPMI8226細(xì)胞中，激活組Bcl-2蛋白的表達(dá)量是對(duì)照組的2.4倍，Bax蛋白的表達(dá)量是對(duì)照組的0.4倍，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。這表明Hedgehog信號(hào)通路激活可能通過(guò)上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡，從而增強(qiáng)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性。為了驗(yàn)證上述結(jié)果的可靠性，進(jìn)行了rescue實(shí)驗(yàn)。使用Hedgehog信號(hào)通路抑制劑環(huán)巴胺處理激活Hedgehog信號(hào)通路的細(xì)胞，然后再給予化療藥物。結(jié)果顯示，環(huán)巴胺處理后，細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性顯著恢復(fù)，IC50明顯降低。同時(shí)，P-gp蛋白的表達(dá)量顯著下調(diào)，抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)量減少，促凋亡蛋白Bax的表達(dá)量增加。這進(jìn)一步證實(shí)了Hedgehog信號(hào)通路激活通過(guò)上調(diào)P-gp蛋白表達(dá)和調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白，導(dǎo)致多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。3.2.2動(dòng)物模型驗(yàn)證為了進(jìn)一步驗(yàn)證細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，科研人員構(gòu)建了多發(fā)性骨髓瘤的動(dòng)物模型。選用BALB/c裸鼠，將人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞U266或RPMI8226接種到裸鼠的右側(cè)腋下，待腫瘤體積生長(zhǎng)至約100-150mm3時(shí)，將裸鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、激活組和抑制劑組，每組10只。激活組通過(guò)腹腔注射攜帶Shh基因的腺病毒，以激活腫瘤細(xì)胞中的Hedgehog信號(hào)通路。抑制劑組在激活Hedgehog信號(hào)通路后，給予Hedgehog信號(hào)通路抑制劑環(huán)巴胺進(jìn)行干預(yù)。對(duì)照組則注射等量的生理鹽水。隨后，三組裸鼠均給予硼替佐米進(jìn)行化療，每周給藥2次，共給藥4周。在化療過(guò)程中，每隔3天測(cè)量一次腫瘤體積，計(jì)算公式為：腫瘤體積（mm3）=長(zhǎng)徑×短徑2×0.5。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)照組裸鼠的腫瘤體積在化療后逐漸縮小，在第21天腫瘤體積為（150.2±25.6）mm3。而激活組裸鼠的腫瘤體積在化療后縮小不明顯，在第21天腫瘤體積仍高達(dá)（350.8±45.3）mm3，與對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。這表明激活Hedgehog信號(hào)通路顯著降低了腫瘤對(duì)硼替佐米的化療敏感性，導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)不受抑制。抑制劑組裸鼠在給予環(huán)巴胺干預(yù)后，腫瘤體積在化療后明顯縮小，在第21天腫瘤體積為（200.5±30.8）mm3，與激活組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。這說(shuō)明抑制Hedgehog信號(hào)通路可以部分恢復(fù)腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性，抑制腫瘤生長(zhǎng)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死裸鼠，取出腫瘤組織進(jìn)行分析。通過(guò)免疫組化檢測(cè)腫瘤組織中P-gp和凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，激活組腫瘤組織中P-gp和Bcl-2的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組，分別為70%和65%，而對(duì)照組僅為30%和35%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。激活組腫瘤組織中Bax的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于對(duì)照組，為25%，而對(duì)照組為50%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。抑制劑組腫瘤組織中P-gp和Bcl-2的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于激活組，分別為40%和45%，Bax的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于激活組，為40%，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。這與細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中觀察到的結(jié)果一致，進(jìn)一步證實(shí)了Hedgehog信號(hào)通路激活通過(guò)上調(diào)P-gp蛋白表達(dá)和調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白，導(dǎo)致多發(fā)性骨髓瘤在體內(nèi)對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。3.3Hedgehog信號(hào)通路相關(guān)分子機(jī)制研究3.3.1關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子GLI2的作用在Hedgehog信號(hào)通路中，關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子GLI2發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，尤其是在影響多發(fā)性骨髓瘤化療耐藥方面。GLI2屬于Gli基因家族，是Hedgehog信號(hào)通路的重要下游效應(yīng)分子。研究表明，GLI2在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，且其表達(dá)水平與化療耐藥密切相關(guān)。在一項(xiàng)針對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系的研究中，通過(guò)RNA干擾技術(shù)敲低GLI2的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物硼替佐米的敏感性顯著提高。在細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中，敲低GLI2后的細(xì)胞在給予硼替佐米處理后，細(xì)胞增殖率明顯低于對(duì)照組，在48小時(shí)的細(xì)胞增殖率降低了30%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這表明GLI2的表達(dá)下調(diào)能夠增強(qiáng)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，提示GLI2在化療耐藥中起到了關(guān)鍵的促進(jìn)作用。進(jìn)一步探究其作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)GLI2可以通過(guò)直接結(jié)合到耐藥相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域，調(diào)控這些基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。例如，GLI2能夠上調(diào)P-gp基因的表達(dá)，從而增加P-gp蛋白的合成。P-gp是一種重要的藥物外排泵，它能夠?qū)⑦M(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的化療藥物泵出細(xì)胞外，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低，從而產(chǎn)生化療耐藥。通過(guò)染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實(shí)驗(yàn)證實(shí)，GLI2可以與P-gp基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄。在過(guò)表達(dá)GLI2的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中，P-gp基因的mRNA表達(dá)量是對(duì)照組的2.5倍，P-gp蛋白的表達(dá)量也相應(yīng)增加。而敲低GLI2后，P-gp基因的mRNA表達(dá)量和蛋白表達(dá)量均顯著降低，分別降至對(duì)照組的0.5倍和0.4倍。這表明GLI2通過(guò)上調(diào)P-gp基因的表達(dá)，增強(qiáng)了多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的藥物外排能力，進(jìn)而導(dǎo)致化療耐藥。此外，GLI2還可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，影響多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。研究發(fā)現(xiàn)，GLI2能夠下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)。在GLI2過(guò)表達(dá)的細(xì)胞中，Bax蛋白的表達(dá)量是對(duì)照組的0.4倍，Bcl-2蛋白的表達(dá)量是對(duì)照組的2.2倍。這種凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的改變使得細(xì)胞對(duì)化療藥物誘導(dǎo)的凋亡產(chǎn)生抵抗，從而增強(qiáng)了化療耐藥性。其作用機(jī)制可能是GLI2通過(guò)與Bax和Bcl-2基因啟動(dòng)子區(qū)域的順式作用元件結(jié)合，直接調(diào)控它們的轉(zhuǎn)錄。也可能是GLI2通過(guò)調(diào)節(jié)其他轉(zhuǎn)錄因子或信號(hào)通路，間接影響B(tài)ax和Bcl-2的表達(dá)。例如，GLI2可以激活PI3K/Akt信號(hào)通路，而Akt可以通過(guò)磷酸化作用抑制Bax的活性，同時(shí)上調(diào)Bcl-2的表達(dá)，從而抑制細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致化療耐藥。3.3.2與其他信號(hào)通路的交互作用Hedgehog信號(hào)通路并非孤立地發(fā)揮作用，它與其他多種信號(hào)通路之間存在著復(fù)雜的交互作用，這些交互作用在多發(fā)性骨髓瘤化療耐藥中也起著重要的影響。與PI3K/Akt信號(hào)通路的交互是其中一個(gè)重要方面。PI3K/Akt信號(hào)通路在細(xì)胞的增殖、存活、代謝等過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。研究表明，Hedgehog信號(hào)通路可以激活PI3K/Akt信號(hào)通路，從而促進(jìn)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的化療耐藥。在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中，激活Hedgehog信號(hào)通路后，PI3K的活性明顯增強(qiáng)，Akt的磷酸化水平顯著升高。通過(guò)Westernblot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，激活Hedgehog信號(hào)通路的細(xì)胞中，p-Akt（磷酸化的Akt）的表達(dá)量是對(duì)照組的2.8倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。進(jìn)一步的機(jī)制研究表明，Hedgehog信號(hào)通路激活后，其下游的轉(zhuǎn)錄因子Gli1可以上調(diào)PI3K的催化亞基p110α的表達(dá)，從而增強(qiáng)PI3K的活性。PI3K被激活后，會(huì)催化磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）生成磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），PIP3可以招募Akt到細(xì)胞膜上，并在PDK1和mTORC2等激酶的作用下，使Akt發(fā)生磷酸化而激活。激活的Akt可以通過(guò)多種途徑導(dǎo)致化療耐藥，例如，Akt可以磷酸化并抑制促凋亡蛋白Bad、FoxO1等的活性，從而抑制細(xì)胞凋亡；Akt還可以激活mTOR信號(hào)通路，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞生長(zhǎng)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的存活能力。Hedgehog信號(hào)通路與NF-κB信號(hào)通路之間也存在著密切的交互作用。NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥、免疫應(yīng)答和腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在多發(fā)性骨髓瘤中，Hedgehog信號(hào)通路的激活可以促進(jìn)NF-κB的活化。當(dāng)Hedgehog信號(hào)通路激活后，細(xì)胞內(nèi)的IκB激酶（IKK）被激活，IKK可以磷酸化IκBα，使其降解，從而釋放出NF-κB，使其進(jìn)入細(xì)胞核，啟動(dòng)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。在激活Hedgehog信號(hào)通路的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中，NF-κB的核轉(zhuǎn)位明顯增加，通過(guò)免疫熒光染色可以觀察到細(xì)胞核內(nèi)NF-κB的熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。激活的NF-κB可以上調(diào)多種與化療耐藥相關(guān)的基因表達(dá)，如抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL等，以及耐藥相關(guān)蛋白P-gp等。在NF-κB激活的細(xì)胞中，Bcl-2的表達(dá)量是對(duì)照組的2.5倍，P-gp的表達(dá)量是對(duì)照組的2.3倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。這些基因的上調(diào)使得多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受性增強(qiáng)，導(dǎo)致化療耐藥。同時(shí)，NF-κB還可以調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中的細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和免疫逃逸，進(jìn)一步加重化療耐藥。Hedgehog信號(hào)通路與MAPK信號(hào)通路也存在交互作用。MAPK信號(hào)通路包括ERK、JNK和p38MAPK等多條分支，在細(xì)胞的增殖、分化、凋亡和應(yīng)激反應(yīng)等過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中，Hedgehog信號(hào)通路的激活可以導(dǎo)致ERK信號(hào)通路的激活。激活Hedgehog信號(hào)通路后，ERK的磷酸化水平明顯升高，通過(guò)Westernblot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，p-ERK（磷酸化的ERK）的表達(dá)量是對(duì)照組的2.6倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。激活的ERK可以通過(guò)磷酸化多種轉(zhuǎn)錄因子，如Elk-1、c-Fos等，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，從而影響多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的化療耐藥。例如，ERK可以上調(diào)CyclinD1的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的增殖能力；ERK還可以調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致化療耐藥。此外，JNK和p38MAPK信號(hào)通路也可能與Hedgehog信號(hào)通路相互作用，共同影響多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為和化療耐藥性，但具體的作用機(jī)制還需要進(jìn)一步深入研究。四、自噬在多發(fā)性骨髓瘤化療耐藥中的作用4.1多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中的自噬現(xiàn)象4.1.1自噬水平檢測(cè)與分析在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中，自噬水平的檢測(cè)對(duì)于深入了解其生物學(xué)特性及化療耐藥機(jī)制至關(guān)重要?？蒲腥藛T通常采用多種方法來(lái)檢測(cè)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的自噬水平。其中，蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）技術(shù)是常用的方法之一，通過(guò)檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平來(lái)間接反映自噬水平。例如，微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3）是自噬過(guò)程中的關(guān)鍵蛋白，在自噬誘導(dǎo)時(shí)，胞漿型LC3（LC3-I）會(huì)被加工修飾，與磷脂酰乙醇胺結(jié)合，形成膜結(jié)合型LC3（LC3-II），并定位于自噬體膜上。LC3-II的含量與自噬體的數(shù)量密切相關(guān)，因此LC3-II/LC3-I的比值常被用作衡量自噬水平的重要指標(biāo)。在對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系U266和RPMI8226的研究中，通過(guò)Westernblot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與正常漿細(xì)胞相比，多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中LC3-II/LC3-I的比值明顯升高，表明多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的自噬水平顯著上調(diào)。免疫熒光技術(shù)也是檢測(cè)自噬水平的重要手段。利用特異性抗體標(biāo)記LC3蛋白，通過(guò)熒光顯微鏡觀察LC3蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位和表達(dá)情況。在正常細(xì)胞中，LC3蛋白主要以彌散的形式分布于細(xì)胞質(zhì)中，而在自噬激活的細(xì)胞中，LC3蛋白會(huì)聚集形成明亮的點(diǎn)狀結(jié)構(gòu)，即自噬體，這些自噬體在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)為綠色熒光斑點(diǎn)。對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色后，可觀察到大量的LC3陽(yáng)性斑點(diǎn)，進(jìn)一步證實(shí)了多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中自噬的激活。而且，隨著自噬水平的升高，LC3陽(yáng)性斑點(diǎn)的數(shù)量和熒光強(qiáng)度也會(huì)相應(yīng)增加。通過(guò)對(duì)不同處理組的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光檢測(cè)，可以直觀地比較自噬水平的變化。例如，在給予化療藥物處理后，觀察到LC3陽(yáng)性斑點(diǎn)的數(shù)量明顯增多，表明化療藥物可以誘導(dǎo)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的自噬發(fā)生。此外，透射電子顯微鏡（TEM）能夠直接觀察到自噬體和自噬溶酶體的形態(tài)結(jié)構(gòu)，是檢測(cè)自噬的金標(biāo)準(zhǔn)。在透射電子顯微鏡下，自噬體呈現(xiàn)為雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡，內(nèi)部包裹著待降解的細(xì)胞器、蛋白質(zhì)等物質(zhì)。自噬溶酶體則是自噬體與溶酶體融合后形成的結(jié)構(gòu)，其內(nèi)部的物質(zhì)正在被溶酶體酶降解。對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行透射電子顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)存在大量典型的自噬體和自噬溶酶體結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步驗(yàn)證了多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中自噬的活躍狀態(tài)。通過(guò)對(duì)自噬體和自噬溶酶體的數(shù)量、大小和形態(tài)進(jìn)行分析，可以更準(zhǔn)確地評(píng)估自噬水平。例如，在某些情況下，自噬體的數(shù)量增加，但自噬溶酶體的數(shù)量減少，可能提示自噬流受阻，即自噬體與溶酶體的融合過(guò)程出現(xiàn)異常。這種自噬流的異常在多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)生發(fā)展及化療耐藥中可能具有重要意義。4.1.2自噬在不同階段的表現(xiàn)在多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)生階段，自噬發(fā)揮著復(fù)雜的作用。一方面，自噬可以作為一種細(xì)胞保護(hù)機(jī)制，幫助漿細(xì)胞應(yīng)對(duì)腫瘤發(fā)生過(guò)程中的各種應(yīng)激壓力。在腫瘤發(fā)生初期，細(xì)胞會(huì)面臨營(yíng)養(yǎng)缺乏、缺氧等不利環(huán)境，自噬被激活后，通過(guò)降解細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)，為細(xì)胞提供必要的能量和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，維持細(xì)胞的存活和增殖。例如，自噬可以降解受損的線粒體，減少活性氧（ROS）的產(chǎn)生，降低氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷。自噬還可以清除細(xì)胞內(nèi)的錯(cuò)誤折疊蛋白和病原體等，維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)，為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)提供有利條件。另一方面，自噬也可能具有抑制腫瘤發(fā)生的作用。在正常細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化的過(guò)程中，自噬可以識(shí)別并清除異常的蛋白質(zhì)和細(xì)胞器，防止細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。研究發(fā)現(xiàn)，一些自噬相關(guān)基因的缺失或功能異常與腫瘤的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)。在多發(fā)性骨髓瘤中，自噬相關(guān)基因的突變或表達(dá)異?？赡軐?dǎo)致自噬功能失調(diào)，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生。例如，Beclin1是自噬起始階段的關(guān)鍵蛋白，其表達(dá)下調(diào)在多發(fā)性骨髓瘤中較為常見(jiàn)，可能影響自噬的正常啟動(dòng)，削弱自噬對(duì)腫瘤的抑制作用。在多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)展階段，自噬對(duì)腫瘤細(xì)胞的存活和增殖起到重要的支持作用。隨著腫瘤的生長(zhǎng)，腫瘤細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)和能量的需求不斷增加，自噬通過(guò)降解細(xì)胞內(nèi)的大分子物質(zhì)，為腫瘤細(xì)胞提供氨基酸、脂肪酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，滿足腫瘤細(xì)胞快速生長(zhǎng)的需求。研究表明，在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中，抑制自噬會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞增殖能力明顯下降，細(xì)胞周期停滯在G0/G1期。通過(guò)CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，發(fā)現(xiàn)使用自噬抑制劑3-MA處理多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞后，細(xì)胞的增殖活性顯著降低，與對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。自噬還可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的存活。例如，自噬可以抑制細(xì)胞凋亡信號(hào)通路，上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白Bax的表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞逃避凋亡的誘導(dǎo)。在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中，激活自噬后，Bcl-2蛋白的表達(dá)量明顯增加，Bax蛋白的表達(dá)量顯著減少，細(xì)胞凋亡率降低。自噬還可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的代謝，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對(duì)葡萄糖、氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的攝取和利用，為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖提供充足的能量和物質(zhì)基礎(chǔ)。例如，自噬可以通過(guò)激活mTOR信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成和脂質(zhì)合成，滿足腫瘤細(xì)胞快速生長(zhǎng)的需求。在化療過(guò)程中，自噬在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中的表現(xiàn)更為復(fù)雜?；熕幬锟梢哉T導(dǎo)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生自噬，而自噬的發(fā)生對(duì)化療效果具有雙重影響。一方面，自噬可以作為一種細(xì)胞保護(hù)機(jī)制，幫助腫瘤細(xì)胞抵抗化療藥物的殺傷作用，導(dǎo)致化療耐藥。化療藥物會(huì)引起腫瘤細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激、DNA損傷等，這些應(yīng)激信號(hào)會(huì)激活自噬。自噬通過(guò)清除受損的細(xì)胞器和蛋白質(zhì)，減少氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷，修復(fù)DNA損傷，從而使腫瘤細(xì)胞在化療藥物的作用下得以存活。自噬還可以通過(guò)降解化療藥物，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，或者調(diào)節(jié)耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的外排能力，導(dǎo)致化療耐藥。例如，在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中，使用化療藥物硼替佐米處理后，自噬被激活，細(xì)胞內(nèi)的P-gp蛋白表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致硼替佐米的外排增加，細(xì)胞對(duì)硼替佐米的耐藥性增強(qiáng)。另一方面，在某些情況下，化療藥物誘導(dǎo)的自噬也可能導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生“自噬性細(xì)胞死亡”，這是一種不同于凋亡的程序性細(xì)胞死亡方式。當(dāng)自噬過(guò)度激活或自噬流受阻時(shí)，自噬體的大量積累會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)環(huán)境紊亂，最終引發(fā)細(xì)胞死亡。研究發(fā)現(xiàn)，在使用高劑量的化療藥物或聯(lián)合使用自噬調(diào)節(jié)劑時(shí)，可以誘導(dǎo)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生自噬性細(xì)胞死亡，從而增強(qiáng)化療效果。例如，使用自噬抑制劑氯喹聯(lián)合化療藥物處理多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞，可抑制自噬體與溶酶體的融合，導(dǎo)致自噬體的積累，增強(qiáng)化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。4.2自噬對(duì)化療耐藥的雙重影響4.2.1促進(jìn)細(xì)胞存活與耐藥在營(yíng)養(yǎng)缺乏、化療藥物刺激等應(yīng)激條件下，自噬對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的存活和耐藥起著重要的促進(jìn)作用。當(dāng)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞處于營(yíng)養(yǎng)匱乏的微環(huán)境中時(shí)，自噬被激活，通過(guò)降解細(xì)胞內(nèi)的大分子物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸等，為細(xì)胞提供氨基酸、脂肪酸和核苷酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，滿足細(xì)胞生存和增殖的能量需求。例如，在血清饑餓實(shí)驗(yàn)中，多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系U266在無(wú)血清培養(yǎng)條件下，自噬水平顯著上調(diào)，細(xì)胞通過(guò)自噬降解自身的一些非必需蛋白質(zhì)和細(xì)胞器，為細(xì)胞提供必要的能量和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，從而維持細(xì)胞的存活和增殖。在這一過(guò)程中，自噬相關(guān)蛋白LC3-II的表達(dá)明顯增加，表明自噬體的形成增多，自噬活性增強(qiáng)。通過(guò)使用自噬抑制劑3-MA抑制自噬后，U266細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)條件下的存活和增殖能力顯著下降，細(xì)胞凋亡率明顯升高。這表明自噬在營(yíng)養(yǎng)缺乏條件下對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的存活起著關(guān)鍵的保護(hù)作用?；熕幬锏拇碳ひ彩羌せ钭允傻闹匾蛩刂?。化療藥物如硼替佐米、來(lái)那度胺等在殺傷多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞的同時(shí)，也會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，激活自噬。自噬通過(guò)多種機(jī)制幫助腫瘤細(xì)胞抵抗化療藥物的殺傷作用，導(dǎo)致化療耐藥。一方面，自噬可以通過(guò)清除受損的細(xì)胞器和蛋白質(zhì)，減少化療藥物誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激對(duì)細(xì)胞的損傷?；熕幬飼?huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平升高，過(guò)多的ROS會(huì)損傷細(xì)胞的DNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等生物大分子，引發(fā)細(xì)胞凋亡。自噬可以降解受損的線粒體等細(xì)胞器，減少ROS的產(chǎn)生，同時(shí)清除氧化損傷的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)