臨床級人體組織來源間充質干細胞質量控制管理規范范圍本規范適用于臨床級人體組織來源間充質干細胞的制備、儲存、運輸以及質量控制等環節，旨在確保干細胞的質量、安全性和有效性，規范臨床應用。術語和定義-間充質干細胞（MSCs）：是一類具有自我更新和多向分化潛能的成體干細胞，可從多種人體組織中分離獲得，在合適的條件下能分化為骨、軟骨、脂肪等多種細胞類型。-臨床級：指符合臨床應用標準，經過嚴格質量控制的干細胞產品。-原代培養：從組織中直接分離培養出的第一代細胞。-傳代培養：將原代培養細胞或經凍存復蘇的細胞從一個培養器皿轉移到另一個培養器皿繼續培養。制備過程的質量控制供體篩選供體必須滿足以下條件：1.年齡適宜：一般選擇18-55歲健康個體。2.無傳染性疾病：通過嚴格的血清學檢測，排除人類免疫缺陷病毒（HIV）-1/2、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、梅毒螺旋體等感染。3.無遺傳疾病：進行必要的遺傳學篩查，如染色體核型分析，確保無遺傳性致病基因攜帶。4.簽署知情同意書：供體充分了解干細胞采集、制備和使用的過程及相關風險，并自愿簽署知情同意書。組織采集1.采集環境：應在符合醫療衛生要求的無菌手術室或采集室進行，環境應定期進行清潔、消毒和監測，空氣潔凈度應達到相應標準。2.采集方法：根據不同組織來源（如骨髓、臍帶、脂肪等）采用合適的采集方法，嚴格遵循無菌操作原則，避免微生物污染。采集設備應經過嚴格的消毒滅菌處理。3.記錄信息：詳細記錄采集的組織名稱、來源、采集量、采集時間、采集人等信息。分離培養1.培養基選擇：選用經過質量驗證的培養基，明確其成分和來源，確保其符合細胞生長的營養需求。避免使用含動物源性成分的培養基，如需使用應進行嚴格的病毒和支原體檢測。2.分離技術：采用標準化的細胞分離技術，如密度梯度離心法、酶消化法等，確保分離得到的細胞純度和活性。對每一批次分離的細胞進行質量初步評估，包括細胞數量、形態、活力等。3.培養條件：對培養過程中的溫度、氣體（如氧氣、二氧化碳）濃度、pH值等條件進行嚴格控制，并實時監測記錄。培養器皿應無菌、無熱原，符合細胞培養要求。傳代擴增1.傳代時機：根據細胞生長狀態和密度，選擇合適的傳代時機，避免細胞過度生長或老化。一般當細胞融合度達到70%-80%時進行傳代。2.傳代比例：合理確定傳代比例，確保細胞在新的培養體系中有足夠的生長空間和營養物質。一般傳代比例為1:2-1:4。3.操作規范：傳代過程中嚴格遵守無菌操作原則，避免交叉污染。操作結束后，對培養瓶或培養皿進行標記，注明細胞名稱、代數、培養時間等信息。凍存復蘇1.凍存液配方：選用合適的凍存液配方，其成分應明確且無毒性。凍存液應經過質量驗證，符合細胞凍存的要求。2.凍存程序：采用梯度降溫法進行細胞凍存，降溫速率應控制在一定范圍內，以降低細胞內冰晶形成對細胞的損傷。3.復蘇條件：嚴格控制復蘇過程中的溫度和時間，快速將凍存細胞解凍至室溫，避免細胞受到二次損傷。復蘇后的細胞應進行活力和功能評估。質量檢測標準鑒別檢測1.表面標志物檢測：采用流式細胞術檢測細胞表面標志物，如CD73、CD90、CD105等陽性表達，CD34、CD45等陰性表達，以明確細胞為間充質干細胞。2.多向分化潛能檢測：在特定的誘導條件下，檢測細胞向成骨、成軟骨、成脂肪等方向分化的能力，通過顯微鏡觀察、組織化學染色等方法進行鑒定。純度檢測采用適當的檢測方法（如流式細胞術）測定細胞懸液中間充質干細胞的純度，要求純度不低于95%。活力檢測通過臺盼藍拒染法檢測細胞活力，細胞活力應不低于90%。微生物檢測1.細菌和真菌檢測：采用培養法，將細胞樣品接種于相應的培養基中，在適宜的條件下培養一定時間，觀察有無細菌和真菌生長。每批次產品均應進行檢測，結果應為陰性。2.支原體檢測：采用培養法或核酸擴增法檢測細胞中是否存在支原體污染，每批次產品均需檢測，結果應為陰性。內毒素檢測采用鱟試劑法檢測細胞懸液中的內毒素含量，內毒素含量應不超過規定標準（如每毫升不超過5EU）。遺傳穩定性檢測定期對細胞進行染色體核型分析，確保細胞的染色體數目和結構正常，無明顯的染色體畸變。生物學效力檢測根據細胞的臨床應用目的，設計相應的生物學效力檢測方法，評估細胞的治療效果和功能活性，如免疫調節能力、組織修復能力等。儲存管理儲存條件1.液氮儲存：將細胞凍存管置于液氮中儲存，液氮溫度應保持在-196℃左右，定期監測液氮液面高度并及時補充。2.分區管理：對儲存的細胞進行分區管理，建立清晰的儲存坐標系統，便于快速查找和取用。庫存管理1.庫存記錄：建立詳細的庫存管理系統，記錄每一批次細胞的入庫時間、儲存位置、數量、傳代信息、質量檢測報告等內容。2.庫存盤點：定期進行庫存盤點，確保庫存信息與實際存儲情況一致。對即將過期或質量異常的細胞進行及時處理。運輸管理運輸條件1.運輸包裝：采用專門設計的運輸包裝材料，確保細胞在運輸過程中的穩定性和安全性。包裝材料應具有良好的保溫、防震性能，防止細胞受到溫度、震動等因素的影響。2.運輸溫度：根據細胞的特性和儲存要求，控制運輸過程中的溫度。如低溫運輸（如干冰運輸，溫度保持在-70℃以下），并在運輸過程中實時監測溫度。運輸記錄記錄運輸的細胞名稱、來源、數量、運輸時間、運輸方式、運輸溫度等信息，以便追溯查詢。運輸到達目的地后，及時進行細胞質量復核。人員管理資質要求從事干細胞制備、檢測、儲存等工作的人員應具備相關專業知識和技能，經過專業培訓并考核合格。技術人員應熟悉干細胞相關的操作規范和質量控制要求。培訓計劃定期組織人員參加專業培訓，內容包括細胞生物學、微生物學、質量控制等方面的知識和技能更新。對新入職人員進行系統的崗位培訓，確保其掌握正確的操作方法和質量意識。健康管理要求工作人員定期進行健康檢查，防止患有傳染性疾病的人員參與細胞制備和操作過程。在工作過程中，工作人員應嚴格遵守個人衛生和防護要求，佩戴工作服、口罩、手套等防護用品。文件管理標準操作程序（SOP）制定涵蓋干細胞制備、檢測、儲存、運輸等各個環節的標準操作程序，明確操作步驟、質量要求、注意事項等內容，并定期進行更新和完善。所有操作人員應嚴格按照SOP進行操作。質量記錄建立完善的質量記錄體系，包括供體資料、采集記錄、培養記錄、檢測報告、庫存記錄、運輸記錄等。質量記錄應真實、完整、清晰，具有可追溯性。記錄保存期限應符合相關法規要求。檔案管理將與干細胞相關的各類文件和記錄進行分類整理，建立檔案管理系統。檔案應妥善保存，便于查閱和審計，確保在需要時能夠迅速提供相關資料。臨床級人體組織來源間充質干細胞質量控制管理規范試題單選題（20題）1.臨床級間充質干細胞供體年齡一般選擇（）A.10-30歲B.18-55歲C.20-60歲D.30-70歲答案：B2.以下哪種不是供體篩選需要排除的傳染性疾病（）A.艾滋病B.高血壓C.乙型肝炎D.梅毒答案：B3.采集組織時，空氣潔凈度應達到（）A.一般標準B.較高標準C.相應標準D.任意標準答案：C4.用于細胞培養的培養基應（）A.成分不明確B.含大量動物源性成分C.經過質量驗證D.隨意選用答案：C5.細胞傳代一般當融合度達到（）進行A.40%-50%B.50%-60%C.60%-70%D.70%-80%答案：D6.凍存液配方成分應（）A.不明確B.有毒性C.無毒性D.隨意添加答案：C7.用鱟試劑法檢測細胞懸液內毒素含量，每毫升應不超過（）A.1EUB.5EUC.10EUD.20EU答案：B8.支原體檢測每批次產品應（）A.可檢可不檢B.檢測一次即可C.每批次均需檢測D.隔批次檢測答案：C9.細胞儲存采用液氮儲存，溫度應保持在（）A.-80℃B.-120℃C.-196℃D.-200℃答案：C10.以下對庫存管理記錄內容描述錯誤的是（）A.只需記錄入庫時間B.要記錄儲存位置C.要記錄傳代信息D.要記錄質量檢測報告答案：A11.細胞運輸包裝材料應（）A.無保溫性能B.無防震性能C.有良好保溫和防震性能D.隨意包裝答案：C12.從事干細胞相關工作的人員應（）A.無需專業培訓B.具備相關專業知識和技能C.不要求熟悉操作規范D.任意上崗答案：B13.標準操作程序（SOP）應（）A.隨意更改B.定期更新完善C.制定后不再變D.只在部分環節執行答案：B14.以下不屬于質量記錄內容的是（）A.供體資料B.細胞培養時個人生活情況C.檢測報告D.運輸記錄答案：B15.間充質干細胞一般CD73、CD90、CD105為（）A.陰性表達B.陽性表達C.不確定表達D.部分陽性表達答案：B16.細胞傳代比例一般為（）A.1:1-1:2B.1:2-1:4C.1:4-1:6D.1:6-1:8答案：B17.細胞活力檢測采用的方法通常是（）A.密度梯度離心法B.臺盼藍拒染法C.酶消化法D.鱟試劑法答案：B18.長期儲存細胞時液氮液面（）A.不用監測B.偶爾監測C.定期監測并及時補充D.等全部揮發完再補充答案：C19.細胞分離后初步質量評估不包括（）A.細胞數量B.細胞顏色C.細胞形態D.細胞活力答案：B20.儲存細胞進行分區管理的目的是（）A.好看美觀B.便于快速查找和取用C.無實際作用D.防止細胞混合答案：B多選題（15題）1.供體篩選需要考慮的因素有（）A.年齡B.傳染性疾病C.遺傳疾病D.簽署知情同意書答案：ABCD2.組織采集時需要做的有（）A.在合適的環境進行B.遵循無菌操作原則C.詳細記錄采集信息D.使用未消毒設備采集答案：ABC3.培養基選擇應（）A.選用經過質量驗證的B.避免含動物源性成分C.不考慮成分和來源D.若含動物源性成分需嚴格檢測答案：ABD4.細胞培養條件需要控制的有（）A.溫度B.氧氣濃度C.pH值D.氣壓答案：ABC5.傳代培養時要注意（）A.合適的傳代時機B.合理的傳代比例C.嚴格無菌操作D.不做任何標記答案：ABC6.細胞質量檢測包括（）A.鑒別檢測B.微生物檢測C.內毒素檢測D.遺傳穩定性檢測答案：ABCD7.鑒別檢測的內容有（）A.表面標志物檢測B.多向分化潛能檢測C.內毒素檢測D.支原體檢測答案：AB8.微生物檢測包括（）A.細菌檢測B.真菌檢測C.支原體檢測D.病毒檢測答案：ABC9.庫存管理需要（）A.建立詳細庫存記錄B.定期進行庫存盤點C.隨意處理異常細胞D.記錄模糊不清答案：AB10.運輸細胞時（）A.采用合適的運輸包裝B.控制運輸溫度C.無需記錄運輸信息D.不進行質量復核答案：AB11.人員管理包括（）A.資質要求B.培訓計劃C.健康管理D.隨意安排工作答案：ABC12.標準操作程序涵蓋的環節有（）A.細胞制備B.細胞檢測C.細胞儲存D.細胞運輸答案：ABCD13.質量記錄包括（）A.供體資料B.采集記錄C.培養記錄D.檢測報告答案：ABCD14.細胞生物學效力檢測可評估的有（）A.免疫調節能力B.組織修復能力C.細胞顏色D.細胞大小答案：AB15.分離培養細胞時采用的方法有（）A.密度梯度離心法B.酶消化法C.臺盼藍拒染法D.鱟試劑法答案：AB判斷題（15題）1.供體篩選時可不用考慮年齡因素。（）答案：錯誤2.組織采集在普通環境下進行即可。（）答案：錯誤3.培養基可隨意選擇。（）答案：錯誤4.細胞培養過程中溫度可隨意變化。（）答案：錯誤5.傳代擴增時傳代時機不重要。（）答案：錯誤6.凍存復蘇對細胞沒有影響。（）答案：錯誤7.細胞質量檢測中鑒別檢測只需要檢測表面標志物。（）答案：錯誤8.微生物檢測并非每批次細胞都需要。（