DB23ICS65.020.20B38黑龍江省地方標準DB23/T2735-2020水稻穗頸瘟人工接種鑒定技術規程2021-01-02實施發布黑龍江省市場監督管理局DB23/T2735-2020前??言本標準依據GB/T1.1-2009的編寫規則起草。本標準由黑龍江省農業農村廳提出。本標準起草單位：黑龍江省農業科學院生物技術研究所。本標準主要起草人：張國民、馬軍韜、鄧凌韋、趙文生、宋顯東、張麗艷、王春榮、胡亞軍、王永力、張齊鳳、高洪儒、張君、王南博、任洋。IDB23/T2735-2020水稻穗頸瘟人工接種鑒定技術規程1范圍本標準規定了水稻穗頸瘟人工接種鑒定技術的術語與定義、環境條件、技術流程、評價標準和技術檔案。本標準適用于水稻資源、品種（系）等材料對穗頸瘟抗性的人工鑒定。2規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB3095環境空氣質量標準GB5084農田灌溉水質標準GB15618土壤環境質量農用地土壤污染風險管控標準（試行）GB/T15970稻瘟病測報調查規范NY/T3257-2018稻水稻稻瘟病抗性室內離體葉片鑒定技術規程下列術語與定義適用于本文件。穗頸瘟和枝梗瘟穗頸瘟是稻瘟病的一種形式，發生在穗頸、穗軸和枝梗上，初期為暗褐色小斑點，后逐步呈環狀或上下擴展，因品種不同，病部分別呈現黃褐色、褐色或黑褐色。早期發病大多形成全白穗或局部白穗，谷粒瘟是稻瘟病的一種形式，發生在谷殼和護穎上，早期發病，病斑呈橢圓形，較大，中央灰白色，以后可逐漸擴展至整個谷粒，造成灰白色至暗灰色癟粒。后期發病，多形成橢圓形或近圓形斑點，褐色至紅褐色，嚴重時谷粒不飽滿，米粒變黑。能夠侵染水稻植株并引起病害的病原體。1DB23/T2735-2020用醫用注射器將一定量的接種體注射進水稻植株體內的接種方法。3.63.73.8對照品種在人工接種鑒定時以全感水稻品種為對照?？共⌒灾参矬w所具有的能夠減輕或克服病原物致病作用的可遺傳性狀。病情指數一種評價植物病害發生程度的綜合性指標，包括植物病害的發病率與嚴重度。其中，發病率是指感病樣本數占調查總樣本數的百分率，表示發病的普遍程度；嚴重度用分級法表示，即將發病的嚴重程度由輕到重劃分出若干個級別，分別用各級的代表值或百分率表示。3.9水稻品種水稻品種包括對照品種和待測水稻材料。3.10產量損失率一種評價植物受逆性條件影響后產量損失程度的指標，包括未發病植株產量和發病植株產量。以穗為單位，產量損失率計算公式為：A(BC)/B100%...........................（1）4環境條件鑒定時的環境條件，環境空氣質量應符合GB3095規定；土壤環境質量應符合GB15618規定；農田灌溉用水質量應符合GB5084規定。選擇易發病環境條件的較為中間的整塊田塊，有獨立的進水口和排水口。在鑒定圃內種植對照和待測材料。依據水稻材料的數量，在鑒定圃內布局若干個小區，小區內種植待測水稻材料，小區設置為2行區，行距為30cm，株距為12cm，每行15蔸，單本插秧。根據試驗目的，設置重復。水稻種植全過程在常規管理的基礎上，創造有利于稻瘟病發病的條件。不帶藥移栽，偏重施用氮肥（一般情況下比生產用氮肥增加30%左右），生長過程中可防蟲、除草，但不能施用任何殺菌劑。在水稻生長的中后期，若發生倒伏，需及時地搭建竹架。2DB23/T2735-20205.3接種鑒定5.3.1接種體制備將稻瘟病菌接種在燕麥片番茄汁瓊脂培養基上，于25℃-27℃條件下培養5d-7d，用無菌水輕輕洗下菌絲（菌絲團要?。┖头稚咦?，將其懸浮液均勻涂于另一新的平板培養基上（培養基要適當硬一些），每皿約400μl，超凈工作臺中吹干。置于25℃培養箱中培養約35-40h至培養基表面長出一層稀疏的氣生菌絲體。向菌落上加少量無菌水，用棉簽輕輕擦去表面的氣生菌絲，并用水將培養基表面的菌絲和分生孢子清洗干凈，待培養基表面晾干后罩上2層紗布，用皮筋綁好，于25℃光照條件下培養至有大量分生孢子產生。從培養基上洗下分生孢子，離心（3000轉/min），棄上清，沉淀下的分生孢子用0.025%吐溫20水溶液懸浮，血球計數板計數，孢子懸浮液濃度調至2×10個孢子/mL，可用混合菌株或單個5菌株，供接種使用。5.3.2接種方法在水稻始穗期（稻穗抽出1/3左右）用醫用注射器將合格的孢子懸浮液注入水稻穗苞中下部，接種量為1mL/穗，依據試驗所需，每個處理接種100穗以上。接種后，如中午日照強烈，建議應用單層遮陰網進行遮擋，以創造利于穗頸瘟發病的田間小氣候。5.4病情調查5.4.1調查時間水稻乳熟期進行調查，調查2次，間隔7d-10d。5.4.2調查方法0級：整穗無穗頸瘟、枝梗瘟和谷粒瘟；將水稻穗頸瘟的田間調查數據，鑒定圃中水稻農事操作及相關情況進行電子數據登記。計算每個水3DB23/T2735-20206.2病情指數計算公式以穗為單位，當嚴重度用分級指標表示時，病情指數計算公式為：R100(PiDi)/(PDM)........................（2）式中：R——病情指數；Pi——各級病穗數，個；Di——各級代表值；P——調查總穗數，個；DM——最高級代表值。6.3抗瘟性評價標準依據水稻材料的病情指數評價其抗穗頸瘟性，評價標準見表A.3。7技術檔案建立水稻穗頸瘟人工接種鑒定技術檔案，內容包括環境條件、技術流程、評價標