ICS65.020.20B05DB23黑龍江省地方標(biāo)準(zhǔn)DB23/T2683—2020水稻回交轉(zhuǎn)育技術(shù)操作規(guī)程黑龍江省市場(chǎng)監(jiān)督管理局DB23/T2683-2020前言本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1-2009編寫規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由黑龍江省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出。本標(biāo)準(zhǔn)由黑龍江省農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院耕作栽培研究所、中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：來永才、朱禎、孟英、王鋒、唐傲、張磊、張喜娟、李平、陳在杰、董文軍、劉猷紅、陳麗華、王立志、姜樹坤、劉凱、劉琦、姜輝、任洋、董德建。IDB23/T2683-2020水稻回交轉(zhuǎn)育技術(shù)操作規(guī)程1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水稻回交轉(zhuǎn)育技術(shù)的術(shù)語和定義、親本選擇、雜交方法、回交轉(zhuǎn)育及生產(chǎn)檔案。本標(biāo)準(zhǔn)適用于水稻回交轉(zhuǎn)育。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T8321（所有部分）農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則GB/T17316水稻原種生產(chǎn)技術(shù)操作規(guī)程N(yùn)Y/T496肥料合理使用準(zhǔn)則通則NY/T1276農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則NY/T1433水稻品種鑒定技術(shù)規(guī)程SSR標(biāo)記法DB23/T1671.3億畝生態(tài)高產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)田水稻生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程DB23/T1929常規(guī)水稻品種純度檢測(cè)SSR方法用于多次回交的親本，是目標(biāo)性狀的接受者，又稱受體親本。只在第一次雜交時(shí)應(yīng)用的親本，是目標(biāo)性狀的提供者，又稱供體親本。兩親本雜交后，其雜交后代再與親本之一進(jìn)行連續(xù)多次的回交，通過對(duì)回交后代的選擇把親本的目利用與目標(biāo)性狀基因緊密連鎖或表現(xiàn)共分離關(guān)系的分子標(biāo)記，在分離群體中對(duì)個(gè)體基因型進(jìn)行選擇。1DB23/T2683-2020應(yīng)具備輪回親本所不具備的目標(biāo)性狀，該性狀遺傳力強(qiáng)，單基因控制或少數(shù)主效基因控制的為佳，其他性狀無嚴(yán)重缺陷。5雜交方法5.1親本開花期的調(diào)節(jié)根據(jù)不同親本的生育期，通過調(diào)整播期或遮光等方式，使雜交親本的花期相遇。5.2去雄在雜交母本里選擇稻穗并剪除上部已開花的穗粒和最下端的穗粒，留中間部位的10個(gè)～20個(gè)穗粒，每個(gè)穗粒剪去外穎上端的三分之一，去除6個(gè)花藥，待所留穗粒全部去雄完畢后套袋。5.3授粉去雄的母本稻穗，應(yīng)在當(dāng)日或次日進(jìn)行人工授粉。當(dāng)父本稻穗進(jìn)入開花期時(shí)，取下正開花的父本稻穗，將花粉抖撒入授粉袋內(nèi)。授粉完畢后，掛牌寫明親本名稱、授粉日期。5.4收獲雜交籽粒成熟后，應(yīng)及時(shí)按組合單獨(dú)脫粒收獲，統(tǒng)計(jì)數(shù)量后填寫記錄并保存。即得到雜種一代種子。6回交轉(zhuǎn)育回交轉(zhuǎn)育的技術(shù)流程可參考附錄A。6.1.2連續(xù)回交在雜種一代和每次回交后代中根據(jù)分子標(biāo)記選擇具有目標(biāo)性狀基因且背景恢復(fù)率高的個(gè)體與輪回親本回交。回交的同時(shí)記錄每一世代目標(biāo)性狀的遺傳分離情況，以確認(rèn)目標(biāo)性狀的遺傳效應(yīng)。在回交到適宜世代后，還需自交2代～3代，使回交后代的目標(biāo)性狀從雜合狀態(tài)通過自交純化，獲得性狀穩(wěn)定的株系。穩(wěn)定株系與輪回親本遺傳背景的相似度可根據(jù)NY/T1433提供的方法進(jìn)行分子鑒定。回交次數(shù)以輪回親本的特征特性基本得到恢復(fù)為準(zhǔn)。親本間差異小時(shí)，回交次數(shù)可少些，若目標(biāo)性狀基因與不良基因連鎖，應(yīng)增加回交次數(shù)。回交群體中輪回親本的基因恢復(fù)頻率P1和從輪回親本導(dǎo)入基因的純合體比率P2，可根據(jù)式（1）和式（2）計(jì)算：×00%………2DB23/T2683-2020n——回交次數(shù)。=?×00%……...式中：P2——從輪回親本導(dǎo)入基因的純合體比率；n——回交次數(shù)；r——為雜種的雜合基因?qū)?shù)。6.2.2回交群體的規(guī)模為保證回交的植株帶有需要轉(zhuǎn)移的目標(biāo)性狀基因，每一回交世代必須種植足夠的株數(shù)，可根據(jù)式3計(jì)算：log?≥log?…………………3式中：m——所需種植數(shù)量；α——為幾率水準(zhǔn)；p——在雜種群體中合符需要的基因型期望比率。6.3回交后代的鑒定與選擇6.3.1選擇原則在回交后代中，選擇具有目標(biāo)性狀且農(nóng)藝性狀與輪回親本盡可能相似的單株進(jìn)行回交。6.3.2農(nóng)藝性狀特征輪回親本和回交后代的主要農(nóng)藝性狀特征田間記載項(xiàng)目參考GB/T17316執(zhí)行，并按所記錄的內(nèi)容進(jìn)行對(duì)比鑒定。需已知控制目標(biāo)性狀的基因或與之緊密連鎖的標(biāo)記，且分型標(biāo)記來自于該基因內(nèi)部或與之緊密連鎖的側(cè)翼標(biāo)記。宜選擇公開文獻(xiàn)中報(bào)道的，或已公開并獲使用許可的專利；也可是前期研究獲得的目標(biāo)性狀的基因或標(biāo)記。6.3.3.3DNA提取、擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測(cè)按照DB23/T1929提供的方法進(jìn)行。6.3.3.4選擇方法根據(jù)回交后代群體目標(biāo)性狀的基因分型結(jié)果，保留攜帶目標(biāo)性狀基因及遺傳背景恢復(fù)率高的單株用于下一世代的回交或自交。3DB23/T2683-2020親本和回交后代材料采取單株種植，群體種植的數(shù)量根據(jù)本文件中6.2.2所列公式和田間實(shí)際條件計(jì)算，育苗和田間管理參照DB23/T1671.3執(zhí)行，肥料使用應(yīng)符合NY/T496的規(guī)定，農(nóng)藥使用應(yīng)符合GB/T8321、NY/T1276的規(guī)定。7生產(chǎn)檔案應(yīng)建立生產(chǎn)檔案，內(nèi)容包括：親本信息、回交世