標準解讀

《DB31/T 531-2011 動物戊型肝炎RT-nPCR和ELISA檢測方法》是一項地方標準，由上海市質量技術監督局發布，主要針對動物戊型肝炎的診斷提供了一種基于逆轉錄巢式聚合酶鏈反應（RT-nPCR）和酶聯免疫吸附測定（ELISA）的技術方法。該標準旨在規范動物戊型肝炎病毒（HEV）感染狀態的實驗室檢測流程，提高檢測結果的準確性和可靠性。

標準中詳細描述了從樣本采集到最終結果分析的全過程。對于RT-nPCR方法，規定了使用特定引物對目標RNA進行兩次連續擴增以提高檢測靈敏度的具體步驟，包括但不限于提取樣本中的總RNA、利用逆轉錄酶將RNA轉化為cDNA、通過巢式PCR擴增目標序列以及如何正確讀取和解釋凝膠電泳結果。此外，還明確了陽性對照與陰性對照的重要性及其設置方式，確保實驗過程的有效監控。

關于ELISA檢測部分，則側重于抗體或抗原的存在與否來判斷動物是否曾暴露于HEV或者正處于感染狀態。這部分內容覆蓋了選擇合適的包被抗原/抗體、封閉非特異性結合位點、加入待測血清樣本及相應標記二抗等操作細節，并給出了計算吸光度值、確定截斷值(Cut-off)的方法，以便于區分陽性與陰性結果。

整個文件不僅提供了詳盡的操作指南，還包括了對所需試劑、儀器設備的基本要求，以及質量控制措施等內容，為相關科研機構、獸醫部門開展動物戊型肝炎監測工作提供了科學依據和技術支持。


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....

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  • 2011-04-19 頒布
  • 2011-08-01 實施
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文檔簡介

ICS11

B11

備案號30980—2011

:

上海市地方標準

DB31/T531—2011

動物戊型肝炎RT-nPCR和

ELISA檢測方法

DetectionmethodofhepatitisEinanimalsbyRT-nPCRandELISA

2011-04-19發布2011-08-01實施

上海市質量技術監督局發布

DB31/T531—2011

前言

本標準按照給出的規則起草

GB/T1.1—2009。

本標準由上海市畜牧獸醫辦公室提出

。

本標準由上海市畜牧業標準化技術委員會歸口

。

本標準起草單位上海市動物疫病預防控制中心上海科華生物工程股份有限公司

:、。

本標準主要起草人劉佩紅周錦萍王縵張維誼李凱航劉健鞠厚斌薛霞鄧波祝長城

:、、、、、、、、、。

Ⅰ

DB31/T531—2011

動物戊型肝炎RT-nPCR和

ELISA檢測方法

1范圍

本標準規定了動物戊型肝炎病毒核酸的反轉錄套式聚合酶鏈反應檢測方法以

(HEV)(RT-nPCR)

及動物血漿和血清中戊型肝炎抗體的酶聯免疫吸附試驗檢測方法

(ELISA)。

本標準適用于動物戊型肝炎的診斷檢測監測和流行病學調查

、、。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規格和試驗方法

GB/T6682

3符號

下列符號適用于本文件

。

堿基對

bp:。

光密度

OD:。

開放閱讀框

ORF:。

4原理

本標準的方法針對保守區域設計兩對特異引物即內外套引物進

RT-nPCRHEVORF2PCR,、,

行兩輪擴增第一輪擴增用外套引物其生成的擴增產物進入第二輪擴增第二輪擴

PCR。,PCR,PCR

增用內套引物又稱套式引物通過兩輪擴增增加檢測的敏感性和特異性適用于模板濃度低

(),PCR,,、

病毒含量少的核酸檢測

HEV。

本標準的方法是雙抗原夾心以的和融合抗原包被微孔反應

ELISAELISA,HEVORF2ORF3

板加入待檢樣本再加入辣根過氧化物酶標記的保守抗原片段如果樣本中含有

,,(HRP)HEV。HEV

抗體則能與包被在反應板上的融合抗原和酶標保守抗原片段結合形成抗原抗體抗原

,HEV,“---HRP

復合物加入底物產生顯色反應反之則無顯色反應

”,,。

5RT-nPCR檢測方法

51試驗環境

.

環境干凈并分區即分為試劑制備核酸提取核酸擴增和產物分析四個區

,:、、。

52儀器和設備

.

擴增儀核酸電泳儀電泳槽水浴鍋紫外凝膠成像系統或紫外透射儀

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