病毒感染的檢查方法電鏡技術血清學試驗分子生物學技術病毒的分離鑒定標本采集與送檢病毒的檢測-病毒感染微生物的方法一、標本采集與送檢原則：1.盡早采取：發病初期

2.部位適宜：由感染部位采取

3.冷藏速送：裝有冰塊或干冰的容器內（一）供分離病毒、檢出核酸及抗原的標本（二）檢測特異性抗體的標本

采集雙份血清，4-20℃保存病毒的檢測-病毒感染微生物的方法病毒材料采集與檢驗結果的關系采取標本的時期檢查病毒及其成分測定抗體潛伏期及前驅期剛發病或急性期恢復期及康復期較難查見最多查見很難查見未增多未增多或增多不明顯明顯增多（常超過4倍）病毒的檢測-病毒感染微生物的方法病毒分離是診斷病毒感染的金標準，一旦陽性，即可確診。不適用于快速診斷，操作復雜，實驗成本高，陽性檢出率低等有時不得不分離病毒，例如發現了一種新的病毒病，必須分離病毒進行研究，或者分離株的鑒定對流行病學有很大作用（如流感病毒），或者需要培育疫苗，或者希望獲得天然弱毒株等。二、常規分離與鑒定病毒的檢測-病毒感染微生物的方法（一）病毒分離標本采集殺滅雜菌（青鏈霉素）接種鑒定病毒種型易感動物出現病狀雞胚病變或死亡細胞培養細胞病變三大方法病毒的檢測-病毒感染微生物的方法（二）病毒鑒定1.形態學鑒定觀察CPE。常見的細胞形態學變化為細胞變圓、壞死、溶解、脫落或形成合胞體。有些病毒能形成包涵體。正常細胞病變細胞病毒的檢測-病毒感染微生物的方法感染細胞具有吸附紅細胞的能力感染細胞的培養液中有許多游離病毒存在，具有凝集紅細胞的作用2.血吸附和血凝作用多見于以出芽方式釋放的病毒。病毒的檢測-病毒感染微生物的方法紅細胞吸附正常細胞（1）血吸附作用吸附試驗可通過特異抗血清抑制來達到鑒定具有吸附特性的病毒病毒的檢測-病毒感染微生物的方法（2）血凝作用血凝試驗血凝抑制試驗病毒的檢測-病毒感染微生物的方法（3）病毒成分的直接檢測用免疫學或分子生物學技術直接檢查感染細胞或其上清液中病毒抗原（或核酸）。病毒的檢測-病毒感染微生物的方法三、電子顯微鏡檢查

病毒的很多特征如大小、形態、結構等必須借助電子顯微鏡進行檢查。對于目前尚難培養而形態又非常典型的病毒，可直接從感染組織或分泌液，或者接種病料的雞胚和細胞培養收獲的材料作電子顯微鏡檢查，直接觀察病毒粒子。病毒的檢測-病毒感染微生物的方法透射電子顯微鏡

病毒的檢測-病毒感染微生物的方法1.正染法：超薄切片法取材固定戊二醛四氧化鋨清洗與脫水浸透包埋聚合切片染色鈾染鉛染病毒的檢測-病毒感染微生物的方法雞痘病毒（超薄切片）病毒的檢測-病毒感染微生物的方法超薄切片法的優缺點：優點：可觀察病毒形態和形態發生過程缺點：操作復雜，費時，但標本可長時間保存病毒的檢測-病毒感染微生物的方法2.負染技術負染是指通過重金屬鹽在樣品四周的堆積而加強樣品外周的電子密度，使樣品顯示負的反差，襯托出樣品的形態和大小。銅網樣品

濾紙染液（常用磷鎢酸）1-2分鐘后電鏡觀察病毒的檢測-病毒感染微生物的方法口蹄疫病毒的電鏡負染病毒的檢測-病毒感染微生物的方法負染法的優缺點：優點：快速簡易（10-20min）；分辨率高；圖象清晰地病毒結構缺點：敏感性低，要求病毒量在107以上；所有樣品應處于懸浮狀態病毒的檢測-病毒感染微生物的方法免疫電鏡技術是將抗原抗體反應的特異性與電子顯微鏡的高分辨力相結合，在亞細胞和超微結構水平上對抗原物質進行定位分析的一種高度精確、靈敏的方法。

3.免疫電鏡技術(Immuneelectronmicroscopy，IEM)病毒的檢測-病毒感染微生物的方法（1）免疫凝集電鏡技術抗原與抗體凝集反應后，可使標本中病毒顆粒聚集成團，再經負染直接在電鏡下觀察，提高了敏感性，確定病毒的血清學性質。病毒的檢測-病毒感染微生物的方法（2）免疫電鏡定位技術特異性抗體用電子致密物質，如鐵蛋白、過氧化物酶等標記后，使之與組織超薄切片中的抗原結合，在電鏡下觀察到標記物所在位置，即為抗原抗體反應的部位。

酶標記染色

病毒的檢測-病毒感染微生物的方法四、血清學試驗

是一種常用的診斷病毒病的方法。可采用ELISA、瓊脂擴散、中和試驗、標記抗體技術等免疫血清學方法檢查病畜的抗體消長情況和發病組織中的病毒抗原。病毒的檢測-病毒感染微生物的方法virus1.中和反應觀察特異性抗體能否保護易感的試驗動物死亡，能否抑制病毒的細胞病變效應。凡能與病毒結合，使其失去感染力的抗體又稱中和抗體。病毒的檢測-病毒感染微生物的方法2.補體結合反應

AgAb紅細胞溶血素補體AbAg紅細胞補體溶血素溶血（-）不溶血（+）病毒的檢測-病毒感染微生物的方法3.免疫擴散

病毒的檢測-病毒感染微生物的方法4.酶聯免疫吸附試驗（ELISA）將已知的抗體或抗原結合在某種固相裁體上，并保持其免疫活性。測定時，將待檢標本和酶標抗原或抗體按不同步驟與固相載體表面吸附的抗體或抗原發生反應。然后加入酶的作用底物催化顯色，進行定性或定量測定。病毒的檢測-病毒感染微生物的方法（1）間接ELISA病毒的檢測-病毒感染微生物的方法（2）夾心ELISA病毒的檢測-病毒感染微生物的方法3′3′5′5′3′3′3′3′3′3′5′5′5′5′5′5′3′3′5′5′3′3′5′5′模板DNA雙鏈形成新的雙鏈DNA退火變性五、分子生物學技術聚合酶鏈反應（PCR）病毒的檢測-病毒感染微生物的方法2.核酸雜交技術核酸探針（probe）是指能與特定核酸序列發生特異性互補的已知核酸片段，可檢測待檢樣品中特定的基因順序。病毒的檢測-病毒感染微生物的方法六、感染組織的組織學檢查

病毒在光學顯微鏡下無法看到，但是在某些病毒感染細胞內出現包涵體，或者細胞形態發生變化，則對診斷有