Q/LB.□XXXXX-XXXXDB43/TXXXX—2025目次TOC\o"1-1"\h前言 II1范圍 12規范性引用文件 13術語和定義 14方法原理 15試劑與材料 16儀器與設備 27樣品 38測定步驟 49結果計算和表述 410檢測方法的靈敏度、準確度和精密度 4附錄A無機硒標準溶液色譜圖 5前言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由湖南省農業農村廳提出。本文件由湖南省農業標準化技術委員會歸口。本文件起草單位：湖南省水產研究所（湖南省水產原種場）、農業農村部漁業產品質量檢驗測試中心（長沙）、北京吉天儀器有限公司。本文件主要起草人：雷琴、索紋紋、謝玉昆、萬譯文、李小玲、黃華偉、楊霄、許燦、尹升福、洪波、劉伶俐、陳湘藝、何詠、曾春芳。漁業水體中無機硒形態分析液相色譜-原子熒光聯用法范圍本文件描述了漁業水體中無機硒形態分析的液相色譜—原子熒光聯用的測定方法。本文件適用于漁業水體中無機硒[四價硒Se（IV）、六價硒Se（VI）]的測定。規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法SC/T9102.3漁業生態環境監測規范第3部分：淡水術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。方法原理水試樣中的無機硒經磷酸二氫鉀—硫酸銅溶液浸提后，使用C18反相色譜柱分離，色譜流出液進入在線紫外消解系統，在紫外燈照射下Se(VI)與I-發生電子轉移現象，被還原為Se(IV)。在酸性環境中Se(IV)與硼氫化鉀在線反應，生成硒化氫(H?Se)，由載氣(氬氣)帶入原子化器中進行原子化，在硒空心陰極燈的發射光激發下產生原子熒光，其熒光強度在固定條件下與被測溶液中的硒濃度成正比，與標準樣品比較，以保留時間定性，外標法定量。試劑與材料除非另有說明，本方法所用試劑均為優級純，水為GB/T6682規定的一級水。試劑磷酸二氫鉀（KH2PO4）：分析純。磷酸氫二銨（(NH4)2HPO4）：分析純。五水硫酸銅（CuSO4·5H2O）：分析純四丁基溴化銨（TBAB，C16H36BrN）。碘化鉀（KI）。氫氧化鉀（KOH）。硼氫化鉀（KBH4）。甲酸（HCOOH）。鹽酸（HCl）。甲醇（CH3OH）：色譜純。氬氣：純度≥99.99%。溶液配制5.2.1浸提液0.1mol/L磷酸二氫鉀溶液+1.56mmol/L的硫酸銅溶液：稱取13.61g磷酸二氫鉀，用少量水溶解后，再加入65mg五水硫酸銅，溶解后用純水定容至1000mL。配制后4℃保存≤7天，避免Cu2?氧化生成Cu(OH)?沉淀。5.2.2流動相2%甲醇+30mmol/L磷酸氫二銨+0.5mmol/L四丁基溴化銨溶液(pH=6.0)：稱取3.9618g磷酸氫二銨、0.1612g四丁基溴化銨，溶于水中，加入20mL甲醇，用水定容至1000mL，之后用甲酸調節pH=6.0,0.45μm濾膜(水相)過濾，臨用前超聲脫氣。5.2.3還原劑0.5%氫氧化鉀溶液+2%硼氫化鉀+0.2%碘化鉀：稱取5g氫氧化鉀、20g硼氫化鉀、2g碘化鉀，用水溶解并定容至1000mL?，F配現用。5.2.4載流10%鹽酸溶液：量取100mL鹽酸，用水定容至1000mL。需在使用前配制。標準品5.3.1Se（IV）標準溶液：亞硒酸根標準溶液（GBW10032），濃度為42.86μg/mL（以硒計）。5.3.2Se（VI）標準溶液：硒酸根標準溶液（GBW10033），濃度為41.5μg/mL（以硒計）。標準溶液配制無機硒混合標準使用液（1μg/mL）：準確稱取0.2331gSe（IV）標準溶液（5.3.1）、0.2409gSe（VI）（5.3.2）標準溶液于10mL聚丙烯容量瓶中，用水稀釋定容，配制成濃度為1μg/mL的無機硒混合標準使用液。4℃以下避光保存，有效期1個月。材料容量瓶：10mL，聚丙烯材質。樣品瓶：500mL，聚丙烯材質。離心管：10mL，聚丙烯材質。進樣瓶：2mL，聚丙烯材質。儀器與設備注：實驗中所用玻璃儀器均需以硝酸(1+4)浸泡過夜，用水反復沖洗，最后用去離子水沖冼干凈。液相色譜-原子熒光聯用儀（LC-AFS）：由液相色譜儀（包括液相色譜泵和進樣閥）與原子熒光光譜儀組成。分析天平：感量0.01g和0.00001g。高速離心機：轉速≥8000r/min。電熱板。超級恒溫混勻儀。pH計：精度為0.01。針筒式過濾器：5mL。濾膜:0.45μm。樣品樣品采集水樣按照SC/T9102.3規定的方法進行采集。試樣制備水樣采樣量應不少于500mL，置于樣品瓶中，0℃～4℃避光保存?？瞻自嚇又苽溥x取不含無機硒的同類樣品，按照7.2進行制備。測定步驟試樣前處理準確吸取試樣30mL(精確到0.01mL)于100mL短頸小燒杯中，在150℃左右加熱濃縮至1mL以下，轉入10mL離心管中，用浸提液(5.2.1)定容至5mL，在超級恒溫混勻儀上于70℃、1500r/min條件下振蕩浸提30min后，3000r/min離心10min,用0.45μm濾膜(水相)過濾，濾液裝入聚丙烯進樣瓶待測。浸提液體積按5mL計算。按同一操作方法作空白實驗。儀器參考條件液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：色譜柱：C18分析柱（250mm×4.6mm，粒徑5μm），或性能相當者；C18預柱（4.0mm×20mm，粒徑5μm），或性能相當者；等度洗脫流動相：2%甲醇+30mmol/L磷酸氫二銨+0.5mmol/L四丁基溴化銨溶液(pH=6.0)，流動相流速1.0mL/min；進樣量：100μL；柱溫：20℃。原子熒光檢測參考條件原子熒光檢測參條件如下：負高壓：300V；硒燈電流：主電流100mA、輔助電流50mA；原子化方式：火焰原子化；載液：10%鹽酸溶液；還原劑：0.5%氫氧化鉀溶液+2%硼氫化鉀+1%碘化鉀；氧化劑：水；爐高：8mm；載氣流速：500mL/min；屏蔽氣流速：800mL/min；標準曲線制作取7支10mL容量瓶，分別準確加入1μg/mL混合標準使用液0.00mL、0.03mL、0.050mL、0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.0mL，加水稀釋至刻度，配制成濃度分別為0.0ng/mL、3.0ng/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL、60ng/mL、80ng/mL、100ng/mL的標準系列溶液。吸取標準系列溶液100μL注入液相色譜—原子熒光聯用儀進行分析，得到色譜圖，以保留時間定性。以標準溶液系列溶液中目標化合物的濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。標準溶液色譜圖見附錄A中的圖A.1。試樣溶液的測定吸取試樣溶液100μL注入液相色譜-原子熒光光譜聯用儀中，得到色譜圖，以保留時間定性，根據標準曲線得到試樣溶液中Se（IV）與Se（VI）含量，平行測定次數不少于2次。結果計算和表述按式（1）計算試樣中無機硒的含量； X=(C?C0)×V1式中：X——試樣中無機硒的含量，單位為毫克每升（mg/L）；C——從標準工作曲線得到的待測物溶液濃度，單位為微克每升（μg/L）；C0——空白溶液中無機硒的質量濃度，單位為（μg/L）；V1——試樣提取液體積，單位毫升（mL）；V2——試樣移取液體積，單位毫升（mL）；1000——換算系數?？偀o機硒含量等于Se（IV）含量與Se（VI）含量的加和。當無機硒含量≥1.00mg/L時，計算結果保留三位有效數字，當無機硒含量<1.00mg/L時，計算結果保留兩位有效數字。檢測方法的靈敏度、準確度和精密度靈敏度本方法Se(IV)檢出限為