DB62/T4756—20玉米抗北方炭疽病鑒定技術規程2023-09-25實施2023-09-25實施 1范圍 12規范性引用文件 13術語和定義 14田間癥狀表現型 25人工接種抗病性鑒定方法 26抗性評價 5附錄A(規范性)玉米北方炭疽病癥狀、玉蜀黍球梗孢菌形態特征 6I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。本文件由甘肅省農業農村廳提出并監督實施。本文件由甘肅省糧食油料作物栽培標準化技術委員會歸口。本文件起草單位：河西學院、泉州師范學院、高臺縣農業技術推廣中心、甘肅省會寧縣農業技術推廣中心、德農種業股份有限公司、沈陽農業大學、甘肅前進生物科技發展有限公司、金塔縣農業技術推廣中心、甘州區農畜產品質量檢測服務中心、甘州區種子產業發展中心、甘肅德光農業有限公司、酒泉市通盈種苗有限公司、莊浪縣鄉村振興事務服務中心、莊浪縣農業農村局。本文件主要起草人：雷玉明、雷鑫、秦國偉、任雯麗、鄭天翔、王偉、吳堯、濮超、楊國振、薛春生、馬金、李棟、冒國偉、張琪、陳海龍、陸靜、李會文、王廷三、程紫霞、蘇朋朋。本文件由河西學院負責解釋。本文件規定了玉米品種北方炭疽抗病性鑒定技術和抗病性評價標準。本文件規定了玉米北方炭疽病接種體制備、菌種繁殖與保存、鑒定圃設置、接種、病情調查、抗性評價等的技術要求及玉米自交系、雜交種等抗性鑒定。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。DB62/T4180玉米主要病蟲害綜合防治技術規程3術語和定義下列術語和定義適用于本文件。玉米北方炭疽病一種由玉蜀黍球梗孢菌引起玉米的真菌性葉部病害。玉蜀黍球梗孢菌學名KabatiellazeaeNaritaetHiratsuka,一種引起玉米北方炭疽病的致病菌，屬無性型真菌，腔孢綱、黑盤孢目、黑盤孢科、球梗霉屬的一種真菌。單孢分離一種分離孢子的方法。在無菌條件下，通過解剖鏡或顯微鏡觀察孢子菌懸液或瓊脂平板表面，利用解剖針或移植器、玻璃毛細管等挑取單一孢子，置于相應培養基上，萌發形成菌絲而獲得純菌種的方法。稱取馬鈴薯200g,洗凈去皮切碎，加水1000mL煮沸20min～30min,紗布過濾，補水至1000mL,加入葡萄糖18g～20g,瓊膠18g～20g,攪拌均勻，120℃~125℃高壓滅菌30min。KZM培養基稱取羧甲基纖維素10g,麥芽糖5g,蛋白胨1.5g,KH?OPO?1g,加入1000mL蒸餾水中，加熱溶解，補水至1000mL,120℃~125℃高壓滅菌30min。PD液體培養基PDA培養基中不添加瓊脂制作的液體培養基。12利用組織分離法分離病原菌，將采集到的典型癥狀病葉，剪取病健交界處(0.2mm～0.3mm)× (0.2mm～0.3mm)小塊，經70%酒精溶液消毒15s～20s,0.1%升汞溶液消毒30s,無菌水沖洗3次，將純培養物在PDA平板上培養15d,刮取PDA平板上的分生孢子，用無菌水配制成濃度為1×10?個/mL～1×10?個/mL的孢子懸浮液，噴霧接種于人工氣候室栽培的玉米6葉期的葉片上，保持室內溫度25℃±2℃,相對濕度90%～92%,持續時間48h。接種10d后觀察發病情況，葉片癥狀與A.1規定一致，獲得病原物形態與A.2規定一致，確定分離物為致病菌。將純化培養物接種于PDA培養基25℃±1℃黑暗培養8d～10d后，用滅菌內徑6mm打孔器切取菌落將帶菌KZM液體培養基進行過濾，血球計數板測定濾液中分生孢子數量，無菌水調制濾液濃度至1×10?個/mL～1×10?個/mL,加入0.02%吐溫-20(v/v),子懸浮液，按照體積比1:1比例加入50%甘油，配制成甘油菌懸液，保存于-20℃低溫冰箱，備用。效種植面積≥500m2,溫室凈高≥4.0m,溫濕度可控，具備滴灌設施，種植鑒定材料≥5個。霧接種于植株葉片，接種量控制8mL/株～10mL/株。要求接菌時每個處理之間采用薄膜隔離b)灌注接種，適合于成株期鑒定，用一個帶刻度的10mL注射器吸取孢子懸浮液，從玉米心葉與其下的展開葉葉鞘相接處以下灌注心葉，接種量控制5mL/株～6mL/株。要求注射器不帶度≥60%,持續時間48h;溫室鑒定圃接種后灌水，溫度控制在25℃±2℃,相對濕度≥90%,持續時間28h。34參照A.1中田間癥狀表現型的特征，每小區隨機五點取樣，每點調查3株，苗期接種每株自上而下調查5～10片葉，成株期接種每株調查穗位節上下6～10片葉，記載病葉數，按照表1發病程度統計病情級別數。5.6.3病情分級與嚴重度以穗位節上部和下部葉片病斑的數量和病斑面積占葉面積的百分比表示發病程度，發病程度特征應符合表1;病情級別依據發病程度由輕到重，采取數值連續法劃分1～7級；嚴重度級值依據病情級別由小到大，采取數值間隔法賦予每個級別0～11的代表值，以表示受害玉米葉片的嚴重度。表1玉米抗北方炭疽病鑒定的病情級別和嚴重度劃分病情級別10葉片上無病斑21僅在穗位節下部葉片上有少量病斑，病斑占葉面積≤533穗位節下部葉片有少量病斑，病斑占葉面積的5.1%～10%,穗位節上部45穗位節下部葉片有大量病斑，病斑占葉面積的10.1%～25%,穗位節上部57穗位節上部葉片有大量病斑，病斑占葉面積的25.1%～50%,穗位節下部葉片病斑相連，69穗位節上部葉片病斑相連，病斑占葉面積的50.1%～75%,穗位節下部和7全株葉片覆蓋病斑，病斑占葉面積≥75.1%以受侵染葉片數占調查總葉片數的百分率表示，用以表示發病的普遍程度。每一鑒定材料根據苗期接種、成株期接種分別調查75～150片、90～150片葉，采用公式(1)計算普遍率。I(%)=d/M×100………………(1)式中：d——發病葉片數；M——調查總葉片數。5.6.5病情指數計算以普遍率和葉片受侵染的嚴重程度數值化的綜合表示指標，用以衡量玉米群體受北方炭疽病的危害程度。每一鑒定材料根據苗期接種、成株期接種分別調查75～150片、90～150片葉，采用公式DI=5(X×S)M×Smax×100………式中：DI——病情指數；∑——為累加符號，從0級病級數開始累加；X?第i病級數的發病葉片數；S;——第i病級數的嚴重度級值；病情指數(DI)類別縮寫免疫I抗病R中抗感病S高感6.4.1同一鑒定品種2年的抗性類別一致時，則此抗性類別為最終鑒定結論。6.4.2同一鑒定品種做第三次抗性鑒定時，取2次一致的抗性類別為最終鑒定結論。56(規范性)玉米北方炭疽病癥狀、玉蜀黍球梗孢菌形態特征A.1玉米北方炭疽病癥狀表現型A.1.1眼狀斑危害葉片，初期呈水浸狀病斑，后漸擴大呈圓形、橢圓形或長圓形，草黃色，中央乳白色，邊緣褐色，外圍鮮黃色的狹窄暈環。A.1.2枯斑型病斑大小為(0.5mm～2.0mm)×(0.5mm～1.5mm),病斑多相互融合，病斑正面中脈為淡褐色，形成不規則枯斑。A.2學名和形態描述異名：玉蜀黍出芽短梗霉菌Aureobasidiumzeae(Na