河南歐諾生物科技有限公司HenanOunuoBiotechnologyCo.LTD 地址：河南省鄭州市惠濟區大河路街道中原物流港B6-1-06郵編：450049電話用油中辣椒素（Cap）ELISA檢測試劑盒使用說明書貨號：Ounuo97002檢測限：0.4μg/kg定量區間：1-10μg/kg本產品可以采用單點定標，即點1個標準品實現定量分析，最大可實現47個樣本的檢測。采用單點定標時，數據分析請來電索取專門的Excel數據分析軟件樣本前處理需要但未提供的試劑和器皿如下：二氯甲烷，分析純正己烷，分析純氫氧化鈉，分析純去離子水或蒸餾水10mL、5mL離心管試劑配制樣本預處理液1：將樣本預處理試劑Ⅰ用300mL去離子水溶解，備用，可常溫保存樣本預處理液2：將樣本預處理試劑Ⅱ用去離子水按照1:19的比例稀釋，按需配制，即取1體積的樣本預處理試劑Ⅱ，加入19體積的去離子水或蒸餾水混勻，備用，可常溫保存樣本提取液：稱取8gNaOH，加去離子水200mL使其完全溶解，備用，可常溫保存精煉油、椰子油1）稱取1.0±0.01g油樣于10mL離心管中，先加入4mL樣本提取液，再加1mL二氯甲烷振蕩1min，4000rpm，離心1min2）取步驟1）上層液體1mL于10mL離心管中，加入0.25mL試劑A和2mL正己烷振蕩1min；3）取步驟2）上層溶液1mL于5mL離心管中室溫下氮氣吹干（約10min），加入0.125mL樣本稀釋液振蕩1min；樣本稀釋倍數：1稻米油（稻米油原油除外）1）稱取0.50±0.01g油樣于10mL離心管中，先加入4mL樣本提取液，再加0.5mL二氯甲烷振蕩1min，4000rpm，離心1min2）取步驟1）上層液體2mL于10mL離心管中，加入0.5mL試劑A和2mL正己烷振蕩1min；3）取步驟2）上層溶液1mL于5mL離心管中室溫下氮氣吹干（約10min），加入0.125mL樣本稀釋液振蕩1min；樣本稀釋倍數：1精煉油、風味油、原油(玉米原油和芝麻原油除外）1）取約2.0g油樣于10mL離心管中，加入3mL樣本預處液1和3mL樣本預處理液2，手動劇烈振蕩30-60s，4000rpm，離心1min；2）稱取步驟1）上層樣本（注意務必避開表層漂浮物）1g于10mL離心管中，先加入4mL樣本提取液，再加1mL二氯甲烷振蕩1min，4000rpm，離心1min；3）取步驟2）上層液體1mL于10mL離心管中，加入0.25mL試劑A和2mL正己烷振蕩1min；4）取步驟3）上層溶液1mL于5mL離心管中室溫下氮氣吹干（約10min），加入0.125mL樣本稀釋液振蕩1min；樣本稀釋倍數：1玉米原油、芝麻原油1）稱取約2.0油樣于10mL離心管中，加入3mL樣本預處理液1和3mL樣本預處理液2，手動劇烈振蕩30-60s；4000rpm，離心1min；2）取步驟1）上層樣本（注意務必避開表層漂浮物）1g于10mL離心管中，先加入4mL樣本提取液，再加1mL二氯甲烷振蕩1min，4000rpm，離心1min；3）取步驟2）上層液體1mL于10mL離心管中，加入0.25mL試劑A和2mL正己烷振蕩1min；4）取步驟3）上層溶液1mL于5mL離心管中室溫下氮氣吹干（約10min），加入0.125mL樣本稀釋液振蕩1min；樣本稀釋倍數：1.6操作步驟實驗前，請將檢測試劑盒從2-8℃冰箱中取出，于室內溫度20-28℃下平衡1小時以上！試劑配制洗滌液（1×）：取1體積的20×濃縮洗液，加入19體積的去離子水或蒸餾水混勻，備用，可按需配制1）取出平衡后的適量板條，其余放回鋁膜袋中；2）依次加50μL標準品/樣本于相應微孔中；加50μL酶結合物和50μL抗體至所有微孔；輕敲板架；3）蓋上板貼，于20-28℃下，孵育20分鐘；倒出微孔中液體；4）將洗滌液注滿微孔浸泡15s倒出，重復4次，共計5次；并于拍板布上盡可能干的拍出孔內液體；5）加100μL底物至微孔中，輕敲板架，蓋上板貼，于20-28℃下，孵育10分鐘；揭開板貼，不要倒出液體，直接加100μL終止液至微孔中，輕敲板架，于450/630nm波長下，讀數；結果分析1）結果計算將檢測的吸光度值輸入到配套計算軟件的相應位置即可計算出樣本中辣椒素的含量。。2）超出檢測上限的樣本稀釋方法（只針對少量超限的樣本）稱樣時待測樣本（或者預處理完的樣本）只稱取0.5g，加入0.5g同種類空白樣本，后續操作不變；或者復溶時多加1倍的樣本稀釋液（最多只能多1倍，再多恐有差異）。將得出的含量再乘以2，即為最終樣本中辣椒素的含量。注意事項、常見問題分析及解決辦法1）注意事項不同產品、不同批次之間試劑不得混用；吸取不同試劑，要更換吸頭，以免造成試劑污染；底物變為藍色，表示已污染變質或過期，不得使用；終止液中含鹽酸，使用時防止接觸皮膚，如不小心濺到，及時用大量流水沖洗，嚴重時請及時就醫；2）常見問題分析及解決辦法問題原因分析解決辦法1.不顯色或顯色淺①試劑變質：酶、抗體、底物、酶標板等失活；②未復溫或復溫時間不夠；③室內環境溫度過低（低于18℃）④其他原因：操作不當1）更換新產品2）參照說明書復溫3）控制室內環境溫度或借助恒溫培養箱4）使用前請仔細閱讀說明書2.顯色過深①未及時終止；②環境溫度過高（超過30℃）；③洗板不徹底或未洗板；1）及時進行相應地實驗操作2）控制室內環境溫度或借助3）恒溫培養箱4）洗板嚴格參照說明書執行需要但未提供的試劑及設備耗材1）設備耗材油脂安全檢測儀：配備450nm/630nm兩種波長濾光片，1臺離心機：4000rpm以上振蕩器/渦旋混勻儀：1臺移液器：量程1000-5000μL;100-1000μL;20-200μL三種規格氮吹儀：1臺；電子天平：感量0.01g，1臺；10mL、5mL離心管、一次性滴管、吸頭2）試劑二氯甲烷：分析純正己烷：分析純氫氧化鈉：分析純去離子水或蒸餾水背景及適用范圍辣椒素，又稱辣椒堿，被用于餐廚回收油，俗稱地溝油的鑒定標志物。本產品采用酶聯免疫吸附檢測技術，可實現食用油中辣椒素的快速定量檢測，可以作為地溝油的初篩方法。一次性檢測15個油樣，僅需約50min。原理采用間接競爭ELISA法，標準品或樣品中辣椒素（以下簡稱Cap），與預包被在微孔中的抗原競爭結合溶液中Cap抗體，經酶結合物反應，洗滌除去未反應試劑，再經底物顯色；標準品或樣品中Cap含量與其吸光度呈負相關。產品性能1）適用動植物性食用油脂2）檢測限：0.4μg/kg3）定量范圍：1.0-10μg/kg4）靈敏度：0.1μg/kg5）精密度：批內CV<10%；批間CV<15%6）準確度：100±20%7）檢測時間：30min8）交叉反應：化合物交叉反應辣椒素（Capsaicin）100%二氫辣椒素（Dihydrocapsaicin）76%合成辣椒素（Nonivamide）100%9）包裝規格48T板條及板架：6*8孔，板架1個標準品：1mL抗體：1瓶4mL，綠蓋酶結合物：1瓶4mL，紅蓋底物