任務一器官培養（一）莖段培養任務二器官培養（二）植物的再生培養任務三培養物的不良表現及改進措施任務四花卉的組織培養任務五水果作物的組織培養任務六植物液體培養常見植物組配方法與易發問題處理項目四常見植物組培方法與易發問題的處理任務二器官培養（二）植物的再生培養

掌握離體葉片的培養步驟；掌握花器和種子的選擇、處理；一般掌握胚胎培養的類型與各自的注意事項。123能夠根據不同植物及種類選擇合適的外植體進行啟動培養；能夠根據不同的植物器官及器官狀態，選擇合適的滅菌劑和適宜的滅菌時間，對外植體進行表面處理與滅菌；會通過觀察試管苗的長勢，大體判斷采取何種措施改善培養條件；熟練外植體滅菌的工藝操作流程；熟練各種試管苗繼代培養過程中的切割方式與技術；熟練無菌操作技術。123456

葉的組織培養再生成植株的方式有二種：一種是直接誘導形成芽，另一種是先誘導形成愈傷組織，再經愈傷組織分化成植株。后一種方式比較普遍。第四節葉的培養一、培養程序和方法1.取材與滅菌

取植物的幼嫩展開葉片沖洗干凈，用70%酒精漂洗約10秒，再在1-2%次氯酸鈉中浸10～15分鐘，或在0.1%升汞中浸5～8分鐘，用無菌水沖洗數次，無菌的干濾紙上吸干水分。對一些粗糙或帶茸毛的葉片要延長滅菌時間。一般地說，同一葉片的柵欄組織比海綿組織處于較成熟狀態。2.接種

把滅菌過的葉組織切成約0.5cm見方小塊或薄片（如葉柄和子葉），接種在MS或其它培養基上。培養基中附加BA1～3mg/L，NAA0.25～1mg/L，有些植物的葉片需要加2，4-D0.5-1.0mg/L。葉片的切割方式3.培養

葉接種后培養條件為每天10～12小時光照，光強1500～3000Lx。培養約2周至4周，葉切塊開始增厚腫大，進而形成愈傷組織。這時應轉移到再分化培養基上進行分化培養，分化培養基的細胞分裂素含量為2mg/L左右，約10天左右，愈傷組織開始轉綠出現綠色芽點，繼續培養將發育成無根苗。幼葉比成熟葉易培養，子葉比葉片易培養。其次要添加適當的生長素和細胞分裂素，保證利于葉組織的脫分化和再分化。驅蚊草葉片愈傷組織分化出芽

影響的主要因素是激素的種類和濃度。但葉片的培養常常需要多種激素的配合使用，不同培養階段需要更換不同的激素組合。如杏離體葉培養使用1/2MS培養基，ZT與2，4-D的組合可誘導愈傷組織的產生，BA與NAA的組合可從愈傷組織中誘導不定芽的產生。但有些植物比較簡單，可以一步直接產生芽，如驅蚊草在MS+6-BA0.5-1.0+IAA0.1-0.2mg/L中可以直接使葉片產生愈傷組織并分化出芽。二、影響離體葉培養的因素視頻4-2-1再生培養一、花器官培養二、種子培養第五節花器和種子培養

花器官培養是指對植物的整朵花或花的組成部分（如花托、花瓣、花絲、花柄、子房、花藥等）的無菌培養。一、

花器官培養1．取材從健壯植株上取未開放的花蕾，已經開花的不宜用，因為消毒困難。先用75%酒精消毒約30秒鐘，再用次氯酸鈉浸10～15分鐘，取出用無菌水沖洗數次[或氯化汞]。2．接種培養

用整個花蕾培養時，只要把花梗插入培養基中。若用花器的某個部分，則分別取下，切成小片，放入培養基中。要把花器官部分培育成小植株，要加入生長素和細胞分裂素，誘導形成愈傷組織或胚狀體，再分化培養成植株。如菊花的花瓣切片接種在含6-BA

2mg/L、NAA

0.2mg/L的MS培養基上，在26℃、1500Lx光照，每天光照10小時，培養約2周，形成少量愈傷組織。再經1個月就分化出綠色芽點。非洲菊花托形成愈傷組織非洲菊花托分化出芽接種后生長

種子培養是指對受精后發育完全的成熟種子和發育不完全的未成熟種子的無菌培養。利用種子培養可以打破種子休眠，特別對一些休眠期長的植物，可以作為大量生產試管苗的好材料，它具有植株分化容易，無菌操作方便等特點。二、種子培養

1．種子滅菌

種皮厚或不飽滿的種子，宜用0.1%升汞消毒10～20分鐘。幼嫩的或發育不全的種子，宜用飽和漂白粉消毒15～30分鐘。若種子上有絨毛或蠟質，應先用95%酒精或吐溫--40處理，提高消毒效果。對殼厚難萌發的種子，可去殼培養。

馬藺種子的去殼培養2．培養基

若以促進種子萌發為目的的種子培養，培養基的成分要求較簡單，可不加或少加生長激素。當然，對某些發育不全的無胚乳的種子培養，應提供適當的生長激素。種子培養的糖濃度可稍低，一般1～3%。3．接種培養

種子培養的接種較容易，把種子按每瓶3～5粒放入培養瓶中，均勻排列，放在20～28℃的條件下暗培養，發芽后盡快轉移光下，要求1000～2000Lx光強，每天光照10小時。一、胚胎培養的意義二、胚珠、子房和胚乳的培養

第六節胚培養１．克服遠緣雜種的不親和性

２．使胚發育不全的植物獲得后代３．打破種子休眠，縮短育種年限一、胚胎培養的意義培養部位取材時間培養基及培養條件胚珠球形胚Nistch，White，2，4-D，BA，IAA子房開花前1-5天N6，Nistch，2，4-D，BA，IAA胚乳授粉后4～8天MS、White，0.5-