ICS65.020DB22CCSB05吉林省地方標準DB22/T3333—2022雜交大豆RN型“三系”恢保快速鑒定規程CordofpracticeforrestorerlineormaintainerlineofhybridsoybeanRNthree-line吉林省市場監督管理廳發布DB22/T3333—2022前言本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件中的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由吉林省農業農村廳提出并歸口。本文件起草單位：吉林省農業科學院。本文件主要起草人：張井勇、張春寶、趙麗梅、彭寶、閆昊、張偉、林春晶、王鵬年、丁孝羊、李慧、孫寰、劉大壯、姚福山。IDB22/T3333—2022雜交大豆RN型"三系"恢保快速鑒定規程1范圍本文件確立了雜交大豆RN型“三系”恢保快速鑒定的程序，規定了測交材料準備、測交、測交結果的鑒定等階段的操作指示，描述了記錄與檔案等追溯方法。本文件適用于雜交大豆RN型“三系”恢保快速鑒定。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T1299-2007農作物品種區域試驗技術規程大豆DB22/T2209-2014DB22/T3177-2020雜交大豆種子雜交大豆質核互作雄性不育系鑒定規程雄蕊發育退化或敗育，不能產生有功能的花粉，但它的雌蕊發育正常，能接受正常花粉而受精結實，由細胞質基因與核基因互作控制的雄性不育系類型，是廣泛存在于高等植物中的一種自然現象。在農作物的雜種優勢利用上具有重要價值。按照雄性不育花粉的敗育過程，可分為孢子體不育和配子體不不育細胞質來源為大豆地方品種“汝南天鵝蛋”的雄性不育系、對應保持系和恢復系，簡稱RN型“三系”。利用育成的穩定不育系為母本，待測種質為父本進行雜交，測驗大豆種質的恢復或保持特性。1DB22/T3333—2022參與雜交的親本之一，也指不同植株的花進行異花傳粉時，接收花粉的植株，本標準中，母本指測交用RN型大豆不育系。3.6父本themaleparent參與雜交的親本之一，在植物中是雄性個體或產生雄性生殖細胞的個體，本標準中為提供花粉的個體，本標準中，父本指待測大豆種質。3.7花粉敗育率pollenabortionrate不育花粉數占總花粉數的百分比。[來源：DB22/T3177-2020，2.5]3.8恢復系restorerline大豆品種或品系，它的特殊功能是用它的花粉授給不育系，所產生的雜交種育性恢復正常，能自交結實，如果該雜交種有優勢，可用于生產。[來源：DB22/T2209-2014，3.3，有修改]3.9保持系maintainerline保持系可以保持不育系的不育特性，和不育系雜交，當代可以結實，但是子代仍然是不育系，可以讓不育系得到繁殖，保有不育系材料。[來源：DB22/T2209-2014，3.2]雜交大豆RN型“三系”恢保快速鑒定規程包括4個階段，其中測交結果鑒定分3種情況（7.2.2～圖1雜交大豆RN型“三系”恢保快速鑒定流程圖2DB22/T3333—20225“三系”測交材料準備5.1新種質資源引進根據不同育種目標，有針對性的引進、收集及創制優良品種或品系。5.2新種質性狀登記整理及編號5.2.1對新種質的種子進行去雜去劣，登記種子的特征特性，包括種皮色、粒形、種臍色，并對其進行統一編號。5.2.2種植及田間性狀調查5.2.2.1在田間播種新種質，株距10cm，行距60cm～65cm。5.2.2.2出苗期至成熟期觀察下胚軸顏色、葉形、花色、抗病蟲性、抗逆性、成熟期、株型、莢形、結莢習性、茸毛色、株高整齊度，按照NY/T1299-2007規定執行。5.2.3考種成熟后，在行中間位置選連續不缺苗5株進行考種，考種項目包括株高、節數、底莢高度、分枝數、單株有效莢數、莢形、莢皮色、單株粒數、單株粒重、百粒重、粒形、粒色、種臍色、籽粒光澤等。6測交6.1測交組合配制6.1.1測交母本的選擇6.1.1.1母本1RN型易被恢復不育系，以JLSCMS82A為代表，這類不育系，可被所有恢復系恢復，且多數F1花粉敗育率在0%～10%。RN型難被恢復不育系，以JLSCMS89A為代表，這類不育系，只能被極少數恢復系恢復，絕大多數F1花粉敗育率為61.0%以上。人工雜交授粉方式的田間播種3DB22/T3333—2022按小區播種，小區大小為1.2m×1.2m，在小區內按行播種父本2穴、母本1及母本2各2穴，穴距30cm～40cm，穴保苗2株，在開花期罩上大小為1.2m×1.2m×1.5m微型網室。6.3雜交6.3.1雜交授粉6.3.1.1人工雜交授粉取待測種質當天新鮮花粉，分別對母本1、母本2進行不去雄雜交授粉，并標記授粉花蕾。6.3.1.2昆蟲傳粉開花期，在播種母本1、母本2、任一待測種質（父本）的微型網室內，投放3頭～5頭苜蓿切葉蜂或50頭～100頭蜜蜂傳粉。6.3.2種子收獲分別收獲母本不育系植株上的雜交種子和父本植株上的種子。7測交結果的鑒定7.1測交F1雜種的種植在田間播種測交F1種子，行長2.0m，單株株距10cm，行距60cm～65cm，保證至少獲得5株以上F1植株。在F1植株盛花期，從5個單株主莖上、中、下各個部位各取2個未開放花蕾，鑒定方法采用1%I2-KI染色法鑒定花粉敗育率，可被染色花粉視為正常可育花粉，未被染色花粉視為敗育花粉，按照附錄A1.3公式（A.1）計算花粉敗育率，統計花粉敗育率，用平均值表示。7.2.2新恢復系的鑒定7.2.2.1當F1植株花粉敗育率為0%～70.0%時，可確定待測種質為恢復系；7.2.2.2依據母本1和母本2測交F1植株花粉敗育率的共同表現，按照附錄B中表B.1確定其恢復力：a)由母本1測交獲得F1植株花粉敗育率為0%～10.0%，同時由母本2測交獲得F1植株花粉敗育率0%～50.0%時，確定該待測種質為強恢復系；b)由母本1測交獲得F1植株花粉敗育率為10.1%～30.0%，同時由母本2測交獲得F1植株花粉敗育率為50.1%～90.0%時，確定該待測種質為一般恢復系；c)由母本1測交獲得F1植株花粉敗育率為10.1%～50.0%，同時由母本2測交獲得F1植株花粉敗育率為90.1%～99.0%時，確定該待測種質為弱恢復系。7.2.3新保持系的鑒定當由母本1和母本2測交獲得F1植株花粉敗育率均為95.0%以上時，可確定被檢測種質為新保持系。4DB22/T3333—20227.2.4非恢復系、非保持系的鑒定由母本1測交獲得F1植株花粉敗育率為70.1%～90.0%，同時由母本2測交獲得F1植株花粉敗育率為70.1%～100%時，確定該待測種質為即非恢復系、也非保持系。8記錄與檔案應對鑒定的過程和關鍵步驟進行及時詳盡記錄，并按時歸檔。檔案保存期限不低于2年。5DB22/T3333—2022AA附錄A（規范性）雜交大豆RN型“三系”恢保關系鑒定A.1花粉育性鑒定A.1.1花粉鏡檢F1植株始花期每株取主莖上、中、下各個部位3個未開放花蕾各2朵，用70%的酒精溶液固定，然后取出花藥置于0.56%的I2-KI染色液的載玻片上，搗碎花藥擠出花粉，使花粉均勻分布，在160倍顯微鏡下進行全視野觀察后，再選3個有代表性視野計數各類花粉的數量，凡染色花粉較多的植株復檢一次。為防止人為誤差，要求同一品種材料由同一個人完成花粉鏡檢，并保持操作的一致性。A.1.2花粉類型根據在顯微鏡下觀察花粉可被染色花粉視為正常可育花粉，未被染色花粉視為敗育花粉。A.1.3花粉敗育率經I2-KI染色液染色后，大豆花粉未被染色花粉數占總花粉數的百分比。花粉敗育率計算按公式（A.1）SNTN100................................(A.1)6DB22/T3333—2022BB附錄B（規范性）雜交大豆RN型“三系”恢保關系鑒定表B.1給出了雜交大豆RN型“三系”恢、保關系分類。表B.1恢保關系分類表恢保分類保持系測交母本JLCMS8