常規石蠟包埋組織切片（常規切片）的制備㈠組織塊依序進行：①水洗，②脫水，③透明，④浸蠟，⑤包埋和⑥切片。㈡組織切片制備及其蘇木精-伊紅染色過程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蠟等為易燃、有毒物，必須專人管理，2m以內不得有明火，局部環境應有良好的通風和消防設施。㈢常規切片的手工操作（步驟次序和各步驟的持續時間）1.水洗：用流水沖洗已經固定的組織塊30min。2.脫水（常溫下）（1）乙醇－甲醛（AF）液固定60～120min(2)80%乙醇60～120min(3)95%乙醇Ⅰ60～120min(4)95%乙醇Ⅱ60～120min（5）無水乙醇Ⅰ60～120min（6）無水乙醇Ⅱ60～120min（7）無水乙醇Ⅲ60min[注意事項]①未經充分固定的組織不得進入脫水程序。②用于脫水的試劑容積應為組織塊總體積的5～10倍以上。③自低濃度乙醇向高濃度乙醇逐級移進脫水。④脫水試劑應及時過濾、更換（500ml乙醇可用于500個組織塊脫水；加入硫酸銅的無水乙醇變藍時，提示需要更換）。⑤較大組織塊的脫水時間長于較小者，應將兩者分開進行脫水。⑥組織置于無水乙醇內的時間不宜過長（以免硬化）。⑦丙酮脫水性能強，會使組織塊過縮、硬脆，不宜用以替代無水乙醇。3.透明（1）二甲苯Ⅰ20min（2）二甲苯Ⅱ20min（3）二甲苯Ⅲ20min[注意事項]①二甲苯的容積應為組織塊總體積的5～10倍以上。②組織塊在二甲苯中透明的時間不宜過長（以防組織硬、脆），并依不同種類組織及其大小而異；組織呈現棕黃或暗紅色透明即可。③二甲苯應及時過濾、更換。④組織經二甲苯深度處理后不顯透明時，常提示該組織的固定或脫水不充分，應查找原因并妥善處理。4.浸蠟（1）石蠟Ⅰ(45~50℃)60min（2）石蠟Ⅱ(56~58℃)60min（3）石蠟Ⅲ(56~58℃)60min[注意事項]①熔化石蠟必須有專人負責，必須在熔蠟箱內或水浴中（70℃）進行，不得用明火加溫。②熔蠟的容積應為組織塊總體積的5～10倍以上。③組織塊經二甲苯適度透明后方可轉入浸蠟過程，應盡可能減少將透明后組織塊表面的二甲苯帶入熔蠟中。④浸蠟時間適宜，過短時浸蠟不充分（組織過軟），過長時組織硬脆。⑤熔蠟應及時過濾、更換。5.包埋（1）先將熔化的石蠟傾入包埋模具中，再用加熱的彎曲鈍頭鑷子輕輕夾取已經過浸蠟的組織塊，使組織塊的最大面或被特別指定處的組織面向下埋入熔蠟中；應將組織塊平正地置放于包埋模具底面的中央處；包埋于同一蠟塊內的多塊細小組織應彼此靠近并位于同一平面上；腔壁、皮膚和黏膜組織必須垂直包埋（立埋）。（2）將與組織塊相關的病理號小條置入包埋模具內熔蠟的一側。（3）待包埋模具內的熔蠟表面凝固后，即將模具移入冷水中加速凝固。（4）從包埋模具中取出凝固的包埋蠟塊（簡稱蠟塊），用刀片去除組織塊周圍的過多石蠟（組織塊周圍保留1～2mm石蠟為宜）。將包埋蠟塊修整成規則的正方形或長方形。（5）將病歷號小條牢固地烙貼在蠟塊一側（編號應清晰可見）。（6）把修整好的蠟塊粘貼在支持器上，以備切片。（7）使用包埋機的方法按有關廠商的說明書操作。（8）注意事項①應將組織塊嚴格分塊包埋。包埋時一定要首先認真核對組織塊的病理號（包括亞號）、塊數和取材醫師對包埋面的要求，準確地包入相應的病理號小條。發生包埋差錯時，必須立即與取材醫師和病理科當班負責人取得聯系，及時處置。②必須嚴防各種異物污染，勿將無關組織（包括縫線、紙屑或其他異物（尤其是硬質異物）埋入蠟塊內。③包埋過程要操作迅速，以免組織塊尚未埋妥前熔蠟凝固。④包埋用的熔蠟應純凈，熔點適宜。浸蠟Ⅰ用軟蠟（熔點為45~50℃），浸蠟Ⅱ、Ⅲ和包埋用蠟均用硬蠟（熔點為56~58℃）。⑤包埋用熔蠟使用前應先靜置沉淀、過濾。⑥熔蠟時不得使用明火，以防燃燒。包埋用熔蠟的溫度應<65℃；包埋用的鑷子不可加溫過高，以免燙傷組織。6.切片（1）切片刀或一次性切片刀片必須鋒利。使用切片刀時，必須精心磨損（在低倍顯微鏡下確認刀刃無缺口）；使用一次性切片刀片時，應及時更新。（2）載玻片必須潔凈、光亮。（3）將切片刀或刀片安裝在持刀座上（以15°為宜）。（4）將蠟塊固定于支持器上，并調整蠟塊和刀刃至適當位置（刀刃與蠟塊表面呈5°夾角）。（5）細心移動刀座或蠟塊支持器，使蠟塊與刀刃接觸，旋緊刀座和蠟塊支持器。（6）修塊（粗切）：用右手勻速旋轉切片機輪，修切蠟塊表面至包埋其中的組織塊完整地全部切到。每塊粗切片的厚度為15～20μm。[注意：對于醫囑再次深切片（特別是在原切片中發現了有意義病變而進行的深切片），應盡量少修塊，以盡量好地獲得有關病變的連續性]（7）調節切片厚度調節器（一般為4~6μm），進行切片，切出的蠟片應連續成帶，完整無缺，厚度適宜（3～5μm）、均勻，無刀痕、瘢痕、皺褶、開裂、缺損、松解等。（8）以專用小鑷子輕輕夾取完整、無刀痕、厚薄均勻的蠟片，放入伸展器的溫水中（45℃左右），使切片全面展開。[注意：必須水溫適宜、潔凈（尤其是水面）；每切完一個蠟塊后，必須認真清理水面，不得遺留其他病例的組織碎片，以免污染]（9）將蠟片附貼于涂有蛋白甘油或經3-氨丙基-三乙氧基硅烷（3-aminopropyltriethoxysilane，APES）處理過的載玻片上（蘇木精-伊紅染色時酌情使用，可省略，必要時）。蠟片應置放在載玻片右（或左）2/3處的中央，留出載玻片左（或右）1/3的位置用于貼附標簽。蠟片與載玻片之間無氣泡。（10）必須立即在置放了蠟片的載玻片一端（待貼標簽的一端），用優質記號筆或刻號筆準確、清楚標記其相應的病歷號（包括亞號）。[注意：必須確保載玻片上的病理號與相關組織石蠟包埋塊的病理號完全一致，不得錯寫或漏寫病理號]（11）將置放了蠟片的載玻片呈45℃角斜置片刻；待載玻片上的水分流下后，將其置于烤箱中烘烤（60～62℃，30～60min），然后即可進行染色。（12）注意事項①組織塊固定、脫水、透明和浸蠟的質量直接影響切片制備。切片過程中遇到的困難首先應注意從切片前的上述各環節中尋找原因。②切片機的質量是制備優質切片的重要前提。要使用質量好的切片機，規范地切片，精心維護切片機。③經由內窺鏡、穿刺等獲取的細小組織，應間斷性連續切片多面（一般至少制備6張蠟片，必要時制備更多張）。需作特殊染色、免疫組化染色等的病例，可預制蠟片備用。④切片人員應細心操作，防范被切片刀具割傷。㈣常規切片的自動組織處理機操作（步驟次序和各步驟的持續時間，總計需要14小時）1.乙醇－甲醛（AF）固定液2×60min2.95%乙醇Ⅰ2×60min3.95%乙醇Ⅱ2×60min4.無水乙醇Ⅰ60min5.無水乙醇Ⅱ60min6.二甲苯Ⅰ30min7.二甲苯Ⅱ30min8.石蠟Ⅰ30min9.石蠟Ⅱ60min10.石蠟Ⅲ90min11.包埋（1）手工常規包埋：參見上述的“㈠手工操作”項。（2）用組織包埋機時，按有關廠商說明書的規定操作。12.切片：參見上述的“㈠手工操作”項。14.注意事項（1）必須按有關說明書的規定，使用和維護自動組織處理機、包埋機、磨刀機、封蓋玻片機等儀器等。（2）要嚴防因停電、機械故障等造成的組織塊損壞。一旦發生此類事故，必須及時向科主任報告，盡