課程名稱：微生物學授課教師姓名及職稱：豐慧根教授配1、學習微生物涂片、染色的操作技術；2、掌握細菌單染色和革蘭氏染色的方法；4、掌握革蘭氏染色反應原理、操作步驟和意義。2、無菌操作技術2、無菌操作技術實驗課講授授課方法：啟發式教學，討論式教學；課前準備：做預實驗，準備示教材料，寫教案1．你認為哪些環節會影響革蘭氏染色結果的正確性？其中最關鍵的環2．當你對一株未知菌進行革蘭氏染色時，怎樣能確證你的染色技術操字2、掌握細菌單染色和革蘭氏染色的方法；4、掌握革蘭氏染色反應原理、操作步驟和意義。二、實驗內容和原理細菌的涂片和染色是微生物學實驗中的一項基本技術。細菌個體微小，且較透明，必須借助染色法使菌體著色，與背景形成鮮明的對比，以便在顯微鏡下進行觀察。此法操作簡便，適用于菌體一般形狀和細菌排列的觀察。用于生物染色的染料主要有堿性染料、酸性染料和中性染料三大類。堿性染料的離子帶正電荷，能和帶負電荷的物質結合。因細菌蛋白質等電點較低，當它生長于中性、堿性或弱酸性的溶液中時常帶負電荷，所以通常采用堿性染料（如美藍、結晶紫、堿性復紅或孔雀綠等）使其著色。酸性染料的離子帶負電荷，能與帶正電荷的物質結合。當細菌分解糖類產酸使培養基pH下降時，細菌所帶正電荷增加，因此易被伊紅、酸性復紅或剛果紅等酸性染料著色。中性染料是前兩者的結合物又稱復合染料，如伊紅美藍、伊紅天青根據實驗目的不同，可分為簡單染色法、鑒別染色法和特殊染色法等，本實驗主要做前面兩種。強調實驗課的要求和簡單復習理論知識過渡到本實驗目的結合理論知識講解實驗原理這是最基本的染色法，由于細菌在中性環境下一般帶負電荷，所以通常采用一種堿性染料如美藍、堿性復紅、結晶紫進行染色。簡單染色法是只用一種染料使細菌著色以顯示其形態，簡單染色不能辨別細菌細胞的構造。（二）革蘭氏染色法原理蘭氏染色法是細菌學上最常用的鑒別染色法，因為通過此法染色，革蘭氏染色過程所用四種不同溶液和作用：1、堿性染料：這在簡單染色中已討論過，此處用結晶紫。2、媒染劑：其作用是增強染料與細菌的親和力，更好地加強染料與細胞的結合。常用的媒染劑是碘液。3、脫色劑：幫助染料從被染色的細胞中脫色。利用細菌對染料脫色的難易程度不同，而將細菌加以區分。革蘭氏陽性細菌不易被脫色劑脫色，而革蘭氏陰性細菌則易被脫色。常用的脫色劑是丙4、復染液：也是一種堿性染料，目的是使脫色的細菌重新染上另一種顏色，以便與未脫色菌進行比較。這里用的是蕃紅花紅溶近年來由于對細菌細胞壁的結構有了較深入的了解，對革蘭氏染色的機制提出不同的看法。一般認為革蘭氏陽性細菌的肽聚糖層較厚，經乙醇處理后使之發生脫水作用而使孔徑縮小，結晶紫與碘的復合物保留在細胞內而不被脫色；而革蘭氏陰性細菌的肽聚糖層很薄，脂肪含量高，經乙醇處理后部份細胞壁可能被溶解并改變其組織狀態，細胞壁孔徑大，不能阻止溶劑透入，因而將結晶紫與碘的復合物洗去而被脫色。雖然如此，革蘭氏染色的差異并不能完全認為是化學的差別，也有物理結構不同的結果，因為酵母菌細胞壁的成份完全和細菌不同，但具有革蘭氏染色陽性反應。三、實驗器材），精、蕃紅染液、復紅、乙醚酒精溶液、香柏油、無菌水3、器材：廢液缸、洗瓶、載玻片、接種杯、酒精燈、擦鏡紙、（1）涂片：取干凈載玻片一塊，在載玻片的左、右各加一滴無菌水，按無菌操作法從菌種斜面挑取少量菌體與水滴充分混勻，簡單介紹本次實驗所用器材調無菌操作腸桿菌。注意取菌不要太多，圖片要均勻。（2）干燥：讓涂片自然晾干。（3）固定：手執玻片一端，讓菌膜朝上，通過火焰2-3次固定。在火上固定時，用手摸涂片反面，以不燙手為宜。不能將載片在火上烤，否則細菌形態毀壞。（染色前必須固定細菌。其目的有二：一是殺死細菌并使菌體粘附于玻片上；二是增加其對染料的親和力。常用的有加熱和化學固定兩種方法。固定時盡量維持細胞原有的形態。）（4）染色：將固定過的涂片放在廢液缸上的擱架上，加草酸（5）水洗：傾去染色液，斜置載片，用自來水的細水流由載片上端流下，不得直接沖在涂菌處，直洗至從載片上流下的水中無（6）干燥：將洗過的涂片放在空氣中晾干或用吸水紙吸干。（7）鏡檢：先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當的視野后，將高倍鏡轉出，在涂片上加香柏油一滴，將油鏡頭浸入油滴中仔細調焦觀察細菌的形態。（1）涂片：涂片方法與簡單染色涂片相同。（2）晾干：與簡單染色法相同。（3）固定：與簡單染色法相同。蓋滿細菌涂面）的結晶紫染色液染色1分鐘。（5）水洗：傾去染色液，用水小心地沖洗。（9）復染：滴加蕃紅復染2min。（10）水洗：用水洗去涂片上的蕃紅染色液。（11）晾干：將染好的涂片放空氣中晾干或者用吸水紙吸干。（12）鏡檢：鏡檢時先用低倍，再用高倍，最后用油鏡觀察，并判斷菌體的革蘭氏染色反應性。邊講解邊演示,并強調實驗注意事項通過提出問題加強學生對實驗原理的理解①將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈：a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去；b.用擦鏡紙沾少許乙醚酒精溶液將鏡頭擦2-3次；c.再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦2-3次。注意擦鏡頭時向一個方向擦②看后的染色玻片用廢紙將香柏油擦干凈。五、注意事項1.載玻片要潔凈無油跡，否則菌液涂不開。涂片時，滴水不要過多，挑菌量宜少，涂片要均勻，菌膜宜薄。強調實驗后處理的重2.革蘭氏染色成敗的關鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽通過正反兩方面再次性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也強調實驗注意事項會被染成革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴格規定。3.染色過程中勿使染色液干涸。用水沖洗后，應吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。齡太老，由于菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉呈陰性反應。六、實驗作業(一)繪圖(二)問題和思考1．你認為哪些環節會影響革蘭氏染色結果的正確性？其中最2．當你對一株未知菌進行革蘭氏染色時，怎樣能確證你的染布置本次實驗報告和思考題課程名稱：微生物學授課教師姓名及職稱：豐慧根配配字課程名稱：微生物學授課教師姓名及職稱：豐慧根教學手段和先先點評上次實驗作業結合理論知識講解實驗原理2、掌握芽孢、莢膜染色的基本原理及方法;二、實驗內容和原理芽孢、莢膜染色法都是利用細菌各部位（分）的構造不同，它們對染料的親和力也不同。因此，可以采用各種特殊染色方法，使細菌細胞的不同構造能在顯微鏡下顯示出來，便于觀察和區別。），生長到一定時間（對數期后期），在細胞內形成一個圓形、橢圓形或圓柱形芽孢有的長在中央或近中央，圓形或橢圓形，芽孢的大小，位置，在分類鑒定上有一定的意義，它僅僅是芽孢細菌生活史的一個環節，它還是檢驗培養基滅菌徹底不徹底的依據。芽孢壁厚、透性低，著色和脫色均較困難，當用弱堿性染料（孔雀綠）在加熱的情況下進行染色時，使染料不僅進入菌體也可進入芽孢內，進入菌體的染料經水洗后被脫色，當用對比度大的復染色劑（蕃紅液）染色后，芽孢仍保留初染劑的顏色，是芽孢和菌體更易區分。菌體呈紅色而芽孢呈綠色。（二）莢膜染色法莢膜是包圍在細菌細胞外的一層粘液狀或膠狀物質，其成分為多糖、糖蛋白或多肽。由于莢膜與染料的親和力弱、不易著色；而且可以溶于水，易在用水沖洗時被除去。莢膜雖不是細胞的主要結構，但它是細胞外碳源和能源性貯藏物質，并能保護細胞免受干燥的影響，同時能增加某些病原菌的致病能力，使之抵御宿主吞噬細胞的吞噬。由于莢膜與染料的親和力弱、不易著色；而且可以溶于水，易在用水沖洗時被除去。通常用負染色法染色，使細菌和背景著色，背景與菌體之間形成一透明區即莢膜，便于觀察，由于莢膜很薄，容易變形，在制片是一般不三、實驗器材1、菌種：蠟樣芽孢桿菌約2d營養瓊脂斜面培養物；褐球固氮菌生理鹽水等3、器材：試管夾、酒精燈、接種針、載玻片、顯微鏡、香柏油、乙醚酒（1）制片：按常規涂片、干燥、固定；（2）染色：用試管夾夾住玻片的一端，在涂片上滴加孔雀綠3－4滴，（3）水洗：待玻片冷卻、用細水流沖洗至流出的水為無色；簡單介紹本次實驗所用器材再次介紹制片操作將高倍鏡轉出，在涂片上加香柏油一滴，將油鏡頭浸入油滴中仔細調焦觀察。）：（1）制備菌和墨水混合液：加一滴墨水于潔凈的載玻片上，然后挑取少量褐球固氮菌與之充分混合均勻；（2）加蓋玻片：將一潔凈蓋波片蓋在混合液上，然后在蓋波片上放一張濾紙，輕輕按壓以吸去多余的混合液；（3）鏡檢：用低倍鏡和高倍鏡觀察。五、注意事項并強調實驗注再次強調實驗注意事項2、染色加熱過程要及時補充染液，切勿讓涂片干涸。3、莢膜染色涂片不要用加熱固定，以免莢膜皺縮變形。4、涂片不要用力過猛，不要滴加水，以防破壞其莢膜原形。六、實驗作業(一)繪圖1．繪出表示芽孢桿菌的形態特征，注意芽孢的形狀、著生位置及芽孢囊2．繪圖說明你所觀察到的細菌的菌體和莢膜的形態。(二)問題和思考1．若涂片中觀察到的只是大量游離芽孢，很少看到芽孢囊及營養細胞，布置本次實驗報告和思考題課程名稱：微生物學授課教師姓名及職稱：郭偉云講師配字先點評上次實驗作業結合理論知識和圖片講解實驗原理二、實驗內容和原理放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體帶一類革蘭氏陽性細菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養基表面或深入培養基內生長帶叫基內菌絲（簡稱“基絲”），基絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲（簡稱“氣絲”），并進一步分化產生孢子絲及孢子。放線菌的孢子絲形狀和孢子排列情況是放線菌分類的重要依據，為了不打亂孢子的排列情況，常用印片染色法和膠帶紙粘菌染色法進行制片觀察。為了觀察放線菌的形態特征，人們設計了各種培養和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長條件下的形態特征，本實驗介紹其中將放線菌接種在瓊脂平板上，扦上滅菌蓋玻片后培養，使放線菌絲沿著培養基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻上，觀察時，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可以觀察到放線菌自然生長狀態下的特征，而且便于不同生長期的形態。玻璃紙是一種透明的半透膜，將滅菌的玻璃紙覆蓋在瓊脂平板表面，然后將放線菌接種于玻璃紙上，經培養，放線菌在玻璃紙上生長形成菌苔。觀察時，揭下玻璃紙，固定在載玻片上直接鏡檢。這種方法既能保持放線菌的自然生長，也便于觀察不同生長期的形態特征。將要觀察帶放線菌帶菌落或菌苔，先印在載玻片上，經染色后觀察。這種方法主要用于觀察孢子絲帶形態、孢子帶排列及其形狀等。該方法簡便、但形態特我們本次實驗主要采用印片法來觀察放線菌的基本形態。三、實驗器材3.器材：載玻片，玻璃紙，小刀，接種環，吸水紙，擦鏡紙，酒精燈，香柏油，乙醚-乙醇混合液，顯微鏡。（1）印片：用解剖刀取放線菌培養體一塊，將菌面朝上放在一載玻片上，孢子絲或孢子）粘附（“印”）在后一塊載玻片的中央，有印跡的一面朝上，通過（3）鏡檢：干后先用低倍鏡后用高倍鏡，最后用油鏡觀察孢子絲、孢子的形態及孢子排列情況。五、注意事項1、鏟菌苔時注意不要將瓊脂鏟得太厚，以免影響壓片；2、玻片不要太熱，以免瓊脂融化，干擾放線菌的附著；3、制片過程中切不可涂片，以免破壞菌絲形態；4、印片完畢后注意將印有放線菌的一面朝上進行固定，印片不要用力過大壓壞瓊脂培養基，也不要挪動，以免改變放線菌的自然形態；六、實驗作業(一)繪圖繪出說明你所觀察到的放線菌的主要形態特征。(二)問題和思考1．試比較三種培養和觀察放線菌方法的優缺點。簡單介紹本次實驗所用器材邊講解邊演示調實驗注意事項再次強調實驗注意事項布置本次實驗報告和思考題課程名稱：微生物學授課教師姓名及職稱：郭偉云講師配字2、學習掌握區分酵母菌死、活細胞的染色方法；3、掌握酵母菌的一般形態特征及其與細菌的區別。二、實驗內容和原理菌體比細菌大。繁殖方式也較復雜，無性繁殖主要是出芽生殖，僅裂殖酵母屬是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通過接合產生子囊孢子。本實驗通過用美藍染色浸片來觀察生活的酵母形態和出芽生殖方式。美藍是一種無毒性染料，它的氧化型是藍色的，而還原型是無色的，用它來對酵母的活細胞進行染色。由于細胞中新陳代謝的作用，使細胞內具有較強的還原能力，能使美藍從藍色的氧化型變為無色的還原型，所以酵母的活細胞無色，而對于死細胞或代謝緩慢的老細胞，則因它們無此還原能力或還原能力極弱，而被美藍染成藍色或淡藍色。因此，用美藍水浸片不僅可觀察酵母的形態，還可以區分死、活細胞。三、實驗器材3、器材：廢液缸、載玻片、蓋玻片、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡等。（1）在載玻片中央加一滴0.1％呂氏堿性美藍染色液，用接種環挑取少量酵母菌苔放入上述液滴里，混合均勻；（2）用鑷子取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下（3）將制片放置約3min，先低倍鏡后高倍鏡觀察酵母形態和出芽情況，并先點評上次實驗作業結合理論知識和圖片講解實驗原理簡單介紹本次實驗所用器材邊講解邊演示調實驗注意事項根據顏色區別死活細胞。五、注意事項再次強調實驗注意事項布置本次實驗再次強調實驗注意事項布置本次實驗報告和思考題2、蓋玻片不宜平著放下，以免產生氣泡影響觀察。六、實驗作業(一)繪圖繪圖說明你所觀察到的酵母菌的細胞結構及出芽生殖方式。(二)問題和思考1、呂氏堿性美藍染液濃度和作用時間的不同，對酵母菌死細胞數量有何影2、在顯微鏡下，酵母菌有哪些突出的特征區別于一般細菌？配字2、掌握配制培養基的一般方法和步驟；4、掌握高壓蒸汽滅菌技術，了解幾種常用滅菌方法。培養基是按照微生物生長繁殖或積累代謝產物所需的各種營養物質，用人工方法配制而成的一種基質。它包括碳源、氮源、能源、生長因子、無機鹽和水六培養和鑒定不同的微生物，必須根據其需要，配制合適的培養基。合成培養基、半合成培養基、固體培養基、半固體培養基和液體培養基。滅菌是指應用物理或化學的方法，殺滅物體表面和內部一切微生物營養體、芽孢和孢子。滅菌方法很多，可分為加熱、過濾、照射和化學藥品法等。這種滅菌法是利用熱空氣使物體升溫，而導致物體上所帶的微生物由于干熱脫水而死亡。常用于空玻璃器皿、金屬用具等的滅菌，對于帶膠皮的物品、液體及固體培養基等不能使用此法滅菌。2、高壓蒸汽滅菌法此種滅菌方法的原理是在一密閉容器中，煮沸時形成的蒸汽不能擴散到容器外面去，而堆積在密閉的容器內，使蒸汽壓力升高；隨著水的煮沸，溫度也就相應增高。利用過熱的蒸汽來使細菌及其耐熱芽孢蛋白質凝固變性，以致失去生命力，從而達到徹底滅菌的效果。121.30C保持15—30分鐘進行滅菌，就可殺死一切微生物細胞及其芽孢或孢子。進行高壓蒸汽滅菌的儀器叫高壓蒸汽滅菌鍋。滅菌對象是培養基、玻璃器皿和各種不因高溫處理而變質的物品材料。但對一些不耐高溫、高壓的溶液或培養基不先點評上次實驗作業結合理論知識講解實驗原理簡單介紹本次實驗所用器材2．牛肉膏、蛋白胨、NaCl、10％NaOH溶液、10％鹽酸溶液。蛋白胨一起放入200ml的燒杯中，然后加入100ml水，置電爐上加熱攪拌至其完全溶解。用玻璃棒把稱量紙挑出沖凈（用洗瓶洗，沖洗液流入燒杯）。（3）稱取20g瓊脂，放入煮沸的溶解液中，繼續加熱至瓊脂完全溶解，加熱過程中要不斷攪拌以防瓊脂沉淀糊底或溢出杯外。（4）待瓊脂完全融化后，再補足自來水，趁熱用玻璃棒蘸少許液體點在pH試紙上測定酸堿度并用NaOH或HCl溶液調整pH值至7.2～7.4。（7）將上述分裝在各種容器中的培養基，塞好棉塞，捆扎好。（9）擺斜面滅菌后，需做斜面的試管，應待培養基冷卻至50～60℃（溫度不能過高，以防斜面上冷凝水太多）后，擺成斜面。斜面的斜度要適當，斜面的長度不超過試管長度的二分之一。擺放時注意不要使培養基沾污棉塞，冷凝過程中不要移動試管，待斜面完全凝固后，再收起使用或貯藏。并強調實驗注2、蛋白胨極易吸濕，稱取時動作要迅速；3、配制固體培養基時，先將其他藥品加熱溶解到快沸時，再將稱好的瓊脂加入，繼續加熱至瓊脂完全熔化，此過程要不斷攪拌，以免瓊脂糊底，并控制火4、分裝量根據試管大小和實際需要而定，固體培養基裝量約為管高的1/5，液體培養基的裝量約為管高的1/4，三角瓶的裝量不超過瓶體的1/2；5、分裝過程中注意不要將培養基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起配字1、了解微生物分離和純化的原理2、掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化接種培養的基本操作技術，掌握微生物的無菌操作技術。在自然界中，不同種類的微生物絕大多數都是混雜生活在一起的，為了生產和科學研究的需要，當我們希望獲得某一種微生物時，就必須從混雜的微生物類群中分離出它，以得到只含有這一種微生物的純培養物，這種獲得純培養物的方法稱為微生物的分離與純化。為了獲得純種的微生物，一般根據該微生物營養或培養特點，或對某種抑制劑的耐受性不同，或對某種環境條件要求不同，從而制作或設置一些選擇性培養基，或選擇性培養條件，再用稀釋涂布平板法或稀釋混合平板法或劃線法分離，純化該微生物，直至得到該純種菌株。土壤是微生物生活的大本營，在這里生活的微生物數量和種類都極其豐富，因此，土壤是我們開發利用微生物資源的重要來源，可以從其中分離純化到許多1．樣品土樣2．培養基牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基、豆芽汁3．其它盛9ml無菌水的試管、盛90ml無菌水并帶有玻璃珠的三角瓶、無菌玻璃涂棒、無菌吸管、接種環、無菌培養皿。1．細菌的分離無菌吸管吸取10-1土壤懸液lml，加入編號10-2的無菌試管混合均勻，即成10-2的土壤稀釋液。再用另一支吸管吸取10-2試管中的土壤稀釋先點評上次實驗作業結合理論知識講解實驗原理簡單介紹本次實驗所用器材邊講解邊演示,并強調實驗注意事項皿中分別倒入15ml已融化并且冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基，加蓋后輕輕搖動培養皿，使培養基均勻分布，平置于桌面上，待凝固后即成平板，（3）培養與移植待平板完全冷凝后，將平板倒置37℃恒溫箱中培養24~48小時，檢查分離結果。將培養后長出的單個菌落分別挑取接種到牛肉膏蛋白胨培養基的斜面上，然后置于37℃恒溫箱中培養，待菌苔長出后，檢查菌苔是否單純，也可用顯微鏡涂片染色檢查是否是單一的微生物，若有其它雜菌混雜，就可再一次進行分離、純化，直至獲得純培養。2．放線菌的分離由于放線菌在培養基上蔓延生長不如真菌快，其繁殖速度又比細菌慢，故分離這類微生物時要特別注意防止細菌和霉菌的蔓延，以免妨除去部分細菌，可先將土壤進行風干。因為細菌營養體遇干燥環境容易死亡，而放線菌比細菌的抗干燥能力強。風干的土壤與少量CaCO3混合，于28℃培養數天，更能進一步減少細菌和增加放線菌的數量。（2）選用的土壤稀釋度要根據放酚10滴，充分混勻，可進一步減少細菌和霉菌的生長。一般放線菌生長的適宜溫度為25～28℃,培養5～7天，培養基為高氏一號培養基。具體操作過程見“細菌的分離”。3．霉菌的分離大多數霉菌為好氧微生物，必須有充足的氧氣才能很好地生長。霉菌能耐受較酸性環境，所以一般分離霉菌時取偏酸性、含有機質較豐富的接近表層的土壤，特別是森林土壤中含有較多霉菌。如果用特定的材料為培養用馬丁氏（Martin）瓊脂培養基，在培養基中加1/3000的孟加拉紅水溶液，使用3～5天，待菌落長出后，檢查結果。此法與稀釋混合平板法基本相同，無菌操作也一樣，所不同的是先將牛肉膏蛋白胨培養基，高氏一號培養基，馬丁氏培養基融化，在火焰旁注入培養皿，搖勻后制成平板，然后用土壤稀釋液中各吸取0.2ml對號放入已寫好稀釋度的平板中，用無菌玻璃涂棒在培養基表面輕輕地涂布均勻，然后分別倒置于28℃和37℃溫箱中培養后，再挑取單個菌落，直至獲得純1．將各種固體培養基融化后制成平板，并用記號筆標明培養基名稱。2．劃線在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環，挑取上述10-1的土壤稀釋液一環在平板上劃線(如圖2劃線方法很多，但無論哪種方法劃線，其目的都是通過劃線將樣品在平板上進行稀釋，使形成單個菌落。常用劃線方法有下（1）交叉劃線法用接種環以無菌操作挑取土壤懸液一環，先在平板培養基的一邊作第一次平行劃線3～4條，再轉動培養皿約70°角，并將接種環上的殘菌燒掉，待冷卻后通過第一次劃線部分作第二次平行劃線，再用同法通過第二次平行劃線部分作第三次平行劃線和通過第三次平行劃線部分作第四次平行劃線（如圖3劃線完畢后，蓋上皿蓋，倒置于溫箱培養。（2）連續劃線法用接種環挑取樣品在平板培養基上作連續劃線(如圖左為交叉劃線法右為連續劃線法1．在你所實驗的三種培養基平板上長出的菌落屬于哪個類群？簡述它們的2．稀釋分離時，為什么要將已融化的瓊脂培養基冷卻到45～50℃左右才能3．劃線分離時，為什么每次都要將接種環上多余的菌體燒掉？劃線為何不4．培養時為什么要將培養皿倒置培養？課程名稱：微生物學授課教師姓名及職稱：康靜配字先點評上次實驗作業個體生長很難測定，而且實際應用意義不大。因此，它們的生長不是依據細胞大小，而是以群體的生長作為單細胞微生物生長的指標。測定微生物生長的方法很多，但不外乎是總菌計數和活菌計數兩大類。常用計數板作微生物的鏡檢直接計數，其計得的是死菌和活菌的總和，故稱總菌計數法。而平板菌落計數法因能計測樣品中的活菌數，故稱活菌計數法。2、學習并掌握使用血球計數板進行微生物直接計數的方法顯微鏡直接計數法適合于含單細胞用細菌計數板。二者的原理和部件均相結合理論知識講解實驗原理血球計數板是一塊特制的厚載玻片，載玻片上有4條槽構成的3面各有一個方格網（圖15-1每個的刻度有兩種：一種是大方格分為16個中方格，而每個中方格又分成25個小方格；另一種是一個大方格a平面圖（中間平臺分為兩半，各刻有一個方格網）b側面圖（中間平臺與蓋玻片之間有高度為0.1的間隙）分成25個中方格，而每個中方格又分成16個小方格。但兩種計數室都有一個共在計數時，通常數五個中方格的總菌數，然后求得每個中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一個大方格中的總菌數，然后再換算成1ml菌液中的總菌數。如果設五個中方格的總菌數為A，菌液稀釋倍數為B，那么，一個大方格中簡單介紹本次2.器具顯微鏡、血球計數板、酒精燈、接種環、無菌水、吸管、蓋玻片、實驗所用器材1．稀釋將釀酒酵母菌懸液進行適當稀釋，菌液如不濃，可不必稀釋。2．鏡檢計數室在加樣前，先對計數板的計數室進行鏡檢。若有污物，則3．加樣品將清潔干燥的血球計數板蓋上蓋玻片，再用無菌的細口滴管將稀釋的釀酒酵母菌液由蓋玻片邊緣滴一小滴（不宜過多）讓菌液沿縫隙靠毛細滲透作用自行進入計數室，一般計數室均能充滿菌液。注意不可有氣泡產生。4．顯微鏡計數靜止5分鐘后，將血球計數板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡找到計數室所在位置，然后換成高倍鏡進行計數，在計數前若發現菌液太濃或太稀，需重新調節稀釋度后再計數。一般樣品稀釋度要求每小格內約有5~10個菌體為宜。每個計數室選5個中格（可選4個角和中央的中格）中的菌體進行計數。位于格線上的菌體一般只數上方和右邊線上的。如遇酵母出芽，芽體大小達到母細胞的一半時，即可作為兩個菌體計數。計數一個樣品要從兩個計數室中計得的值來計算樣品的平均含菌量。5．清洗血球計數板使用完畢后，將血球計數板在水龍頭上用水柱沖洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風機吹干。鏡檢，觀察每小格內是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重新洗滌至干凈為止。邊講解邊演示,并強調實驗注意事項將所計的5個中方格中的菌數填入下表（次）12（A）菌數（個／mlA×16（或25）×B×10000式中：A——一個中格的菌數平均值再次強調實驗注意事項再次強調實驗注意事項1、加樣時先搖勻菌液，計數室中不可有氣泡產生；2、計數時，格線上的菌體只數上方和右邊線上的；3、如遇酵母出芽，芽體大小達到母細胞的一半時，作為兩個菌體計算。配字先點評上次實先點評上次實驗作業實驗目的微生物生長繁殖要有一定的溫度條件，不同的微生物要求不同的生長溫度范圍。在生長范圍內又可分為最高，最適和最低三種生長溫度。如溫度超過最高或最低溫度時，微生物均不能生長，或處于休眠狀態，甚至死亡。結合理論知識講解實驗原理按照微生物要求的生長溫度范圍，可將其分為高溫性，中溫性和低溫性三個類型，大多數微生物是中溫性的，它們的適宜生長溫度在25～37℃之間，故實驗結合理論知識講解實驗原理圍，并掌握測定溫度對微生物生長的影響的方法。3．器具酒精燈，接種針，冰箱，恒溫箱。（1）在5支牛肉膏瓊脂斜面培養基上都接種上枯草桿菌，接種時劃曲線或（2）在另5支牛肉膏瓊脂斜面上都接種上大腸桿菌，接種時劃直線或曲線。簡單介紹本次實驗所用器材邊講解邊演示,并強調實驗注意事項1．記載實驗結果，填入下表。結合理論知識2．高溫和低溫對微生物生長各有何影響？為什么？講解實驗原理微生物的生長繁殖，需要一定的pH值范圍，即環境中的氫離子濃度對微生物的生長繁殖有直接的影響，大多數細菌和放線菌適于中性或微堿性環境，酵母菌和霉菌則適于在弱酸性或酸性環境中生長，當環境的pH值超過其適于生長的范圍時，微生物的生長則受到明顯的阻抑或不能生長。簡單介紹本次實驗所用器材4．器具酒精燈、lml無菌吸管、接邊講解邊演示,1.調pH值取足量分裝為8ml的牛肉膏蛋白胨培養液7支，分別按下表所列容量加入各種溶液，調成不同pH值的培養液（ml）并強調實驗注1234567 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2．按無菌操作方法，分別于各管中各接種大腸桿菌0.2ml，分別標明試管序3．另取8ml的牛肉膏蛋白胨液二支，按無菌操作的方法用無菌吸管移入無4．將上述接種好的培養物置于37℃下培養。48小時后觀察記載實驗結果。l．記載結果，填入下表：注：根據混濁程度，確定生長情況：不生長（-稍生長生長一般(++)；生長良好。2．氫離子濃度對微生物生長有何影響？課程名稱：微生物學授課教師姓名及職稱：郭偉云講師配字課程名稱：微生物學實驗授課教師姓名及職稱：郭偉云教學手段和1、學習幾種主要微生物的生理代謝試驗及2、認識微生物代謝類型的多樣性；二、實驗內容和原理微生物代謝重要特征之一，就是代謝類型的多樣性。即使同屬化能異養菌中的不同微生物，它們分解生物大分子的能力，分解利用含碳化合物、含氮化合物的途徑和產生代謝產物也各不相同等等。此外，微生物代謝類型多樣性具體表現在生化反應的多樣性，因此人們在微生物的分類鑒定工作中，常利用其生化反應作為重要依據。1、大分子物質的水解試驗不同微生物分解利用生物大分子能力各有不同。只有那些能夠產生并分泌跑外酶的微生物才能利用大分子有機物。如：油脂水解（脂肪酶）、淀粉水解（淀粉酶）、明膠液化（蛋白酶）等。大分子物質的水解過程可以通過觀察細菌菌落周圍的物質變化來證實。淀粉水解試驗原理：淀粉遇碘液會產生藍色，但細菌水解淀粉的區域，用碘測定不再產生藍色，表明細菌產生淀粉酶。2、糖類發酵試驗原理細菌具有分解某些糖類的特定酶，可根據細菌分解利用糖能力的差異，表現出是否產酸產氣作為鑒定菌種的依據。是否產酸，可在糖發酵培養基中加入指示劑溴甲酚紫（即B.C.P指示劑，其pH在5.2以下呈黃色，pH在6.8以上呈紫色經培養后根據指示劑的顏色變化來判斷。是否產氣，可從培養基中的杜氏小管中是否有氣泡觀測。三、實驗器材1、菌種：大腸桿菌（E.coli）、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、普通變形桿菌；2、培養基和試劑：固體淀粉培養基、葡萄糖發酵培養基、蔗糖發酵培養基和乳糖發酵培養基試管各3支（內裝有倒置的德漢氏小管）等。3、器材：試管架、接種環、酒精燈等。先點評上次實驗作業結合理論知識講解實驗原理簡單介紹本次實驗所用器材（1）無菌操作制固體淀粉培養基平板；（2）用記號筆在平板底部化成3部分，將大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌分別在不同部分劃線接種，在平板的反面分別寫上菌名；（4）觀察各種細菌的生長情況，將平板打開蓋子，滴入少量Lugol’s碘液于平皿中，輕輕旋轉平板，使碘液均勻鋪面整個平板；如菌苔周圍出現無色透明菌，說明淀粉已被水解，為陽性。透明圈的大糖發酵試驗（1）試管標記：在試管外壁標明發酵培養基名稱和接種細菌菌名。（2）接種：取葡萄糖發酵培養基試管3支，分別接種大腸桿菌、枯草桿菌，第三支不接做對照；取蔗糖發酵培養基試管3支，分別接種大腸桿菌、枯草桿菌，第三支不接做對照。（4）觀察各試管顏色變化及德漢氏小管中有無氣泡。與對照管比較，若糖發酵管保持原有顏色，其反應結果為陰性，表明該菌不能利用該種糖，記錄用“－”表示；如呈黃色，反應結果為陽性，表明該菌能分解該種糖產酸，記錄用“＋”表示。表示；沒有氣泡為陰性反應，記錄用“－”表示。五、注意事項2、糖發酵試驗要注意杜氏小管的置入方法；3、在接種后，輕緩搖動試管，使其均勻，防止倒置的小管進入氣泡。六、實驗作業(一)填表繪圖說明你所觀察到的酵母菌的細胞結構及出芽生殖方式。分別將淀粉水解試驗（“+”表示陽性，“-”表示陰性）和糖發酵試驗（“+”表示產酸或產氣，“-”表示不產酸不產氣）結果填入下表：菌名大腸桿菌枯草芽孢桿菌金黃色葡萄球菌邊講解邊演示調實驗注意事項再次強調實驗注意事項布置本次實驗報告和思考題淀粉水解能力糖類發酵大腸桿菌普通變形桿菌對照葡萄糖發酵乳糖發酵(二)問題和思考課程名稱：微生物學授課教師姓名及職稱：郭偉云講師配字2、了解各種保藏方法的優缺點及其適用的目標微生物；3、學習并掌握幾種常用的微生物菌種保藏方法。二、實驗內容和原理保藏微生物菌種的目的不僅要保存菌株的生命本身，而且還必須要盡可能地使菌株的遺傳性狀保持不變，同時保證其在整個保存過程中不被他種微生物污染。因此，選擇一種能夠長期有效且穩定的保藏微生物菌種的方法事由于微生物種類繁多，且保存方法的難易程度不同，所以微生物菌種的保藏方法亦有許多。但是不管有多少種菌種保藏方法，其基本原理都要求使微生物的代謝作用降至最低程度，從而使其處于不活潑的狀態，即休眠狀態。就微生物本身而言，保藏就是要利用它們處于休眠狀態的孢子或芽孢而進行；而從環境條件來說，就是要選用低溫、干燥和缺氧等三個條件。保藏方法大致可分為以下幾種：有些微生物當遇到冷凍或干燥等處理時，會很快死亡，因此在這種情況下，只能求助于傳代培養保存法。傳代培養就是要定期地進行菌種轉接、培養后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生產菌種的保存。傳代保存時，培養基的濃度不宜過高，營養成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產酸菌種，則應在培養基中添加少量碳酸鈣。一般地，大多數菌種的保藏溫度以5℃為好，像病原真菌等微生物菌種則可以使用37℃進行保存，而蕈類等大型食用菌的菌先點評上次實驗作業結合理論知識講解實驗原理介紹每種保藏方法的使用及其優缺點種則可以室溫直接保存。傳代培養保存法雖然簡便，但其缺點也很明顯，如：①菌種管棉塞經常容易發霉；②菌株的遺傳性狀容易發生變異；③反復傳代時，菌株的病原性、工作量大；⑤雜菌的污染機會較多。培養后于4—6℃冰箱內保存。2、懸液保存法：即使微生物混懸于適當溶液中進行保存的方法。常用的①蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌，將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數年。本法應注意避免水分的蒸發。②糖液保存法：適用于酵母菌，如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗處保存，可長達10年。除此之外，也可使用緩沖液或食鹽水等進是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應用相當廣泛。常用的有方法包括以下幾種，如①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌種的保藏。方法是在滅菌的土壤中加入菌液，立即在室溫下進行干燥或使菌體繁殖后再干燥，然后冷藏或在室溫下密封保存。保存用的土壤原則上以肥沃的耕土為宜，土壤需風干、粉碎、過篩和滅菌。于塞有棉塞的試管中，加水或加入充分稀釋的液體培養基（以含水量為土壤培養至菌絲能用肉眼確認的程度為止，移入干燥器中經短時間干燥或風干后密封，冷藏或室溫保存。②砂土保存法：取清潔的砂，過60目篩去掉大砂粒，并用磁鐵吸去砂中鐵屑，再用NaOH溶液、10%HCl溶液和水交替清洗數次，干燥后，置于經充分混勻后，放入真空干燥器中，完全干燥后熔封保存。也可用二份洗凈的砂（經HCl預處理）和一份貧瘠、過篩的黃土攙和后滅菌，再進行菌種保③硅膠保存法：以6～16目的無色硅膠代替砂子，干熱滅菌后，加入菌液。加菌液時，由于硅膠的吸附熱常使溫度升高，因而需設法加以冷卻。④磁珠保存法：將菌液浸入素燒磁珠（或多孔玻璃珠）后再進行干燥保存的一種方法。在螺旋口試管中裝入1/2管高的硅膠（或無水CaSO4上鋪玻璃棉，再放上10～20粒磁珠，經干熱滅菌后，接入菌懸液，最后冷藏、室溫保藏或減壓干燥后密封保藏。本法對酵母菌很有效，特別適用于根瘤菌，可保存長達兩年半時間。⑤麩皮保存法：在麩皮內加入60%的水，經滅菌后接種培養，最后干燥⑥紙片（濾紙）保存法：將滅菌紙片浸入培養液或菌懸液中，常壓或減壓干燥后，置于裝有干燥劑的容器內進行保存。這類方法包括冷凍真空干燥法和L－干燥法。冷凍真空干燥法是將要保藏的微生物樣品先經低溫預凍，然后在低溫狀態下進行減壓干燥。L-干燥法則不需要低溫預凍樣品，只是使樣品維持在10－20C范圍內進5、冷凍保存法適用于抗凍力強的微生物。這些微生物可在其菌體細胞外遭受凍結的情況下而不受損傷，而對其它大多數微生物而言，無論在細胞外凍結還是在細胞內凍結，都會對菌體造成損傷，因此當采用這種保藏方法時，應注意以下①要選擇適于冷凍干燥的菌齡細胞；②要選擇適宜的培養基，因為某些微生物對冷凍的抵抗力，常隨培養基成分的變化而顯示出巨大差異；③要選擇合適的菌液濃度，通常菌液濃度越高，生存率越高，保存期也⑤可在菌液內添加甘油等保護劑，以防止在冷凍過程中出現菌體大量死亡的現象。同樣，也可添加各種糖類、去纖維血液和脫脂牛乳等具有良好保護效果的溶劑，但對有些微生物而言，不加保護劑時更有效。⑥原則上應盡快進行冷凍處理，但當加入保護劑時，可靜置一段時間后此后必須盡快降到貯藏溫度；而對絕大多數微生物而言，則不必如此，如結構較為復雜的原蟲則可在－35℃范圍內進行緩慢降溫，而噬菌體則必需采用⑧若進行長期保存，則貯藏溫度越低越好；振蕩使之迅速融解。而就厭氧菌來說，則應選擇靜置融化的措施。當冷凍菌融化后，應盡量避免再次冷凍，否則菌體的存活率將顯著下降。三、實驗器材2、試劑：液體石蠟、河沙、紅土等；溫箱中使水蒸氣蒸發備用；（2）菌種培養：將菌種在斜面上培養成熟；（3）灌注礦物油：用無菌吸管吸取無菌的液體石蠟，加入已長好菌的斜（4）低溫（5℃左右）保藏：將試管直立，置冰箱中保存。2、砂管保藏法簡單介紹本次實驗所用器材邊講解邊演示調實驗注意事項（2）準備菌種：在合適培養基上培養獲得孢子；（3）接種：干法接種，直接將放線菌、真菌孢子接種于沙管中。濕法接種，先將斜面培養物制成菌懸液，吸取菌懸液于沙管中（每管約10滴（4）干燥保藏：將含菌沙管放在含干燥劑的干燥器中吸水干燥。低溫或五、實驗作業布置本次實驗報告和思考題武術教案課的基本步法等1、使學生初步了解武術的基本練習功法，并掌握練習的技術要領。2、通過長拳學習，了解套路動作結構、難點課的重點：手型、步型、手法、腿法難點：三路長拳中的虛步亮掌時課的內容間1、體育委員集合整隊，報告人數3、宣布本次課的內容及要求4、安排見習生（5）仆步壓腿（6）正壓腿（7）膝關節運動（8）踝、腕關節運動一、基本手型、手法、步型、步法等拳：拳握緊，拳面平、直腕掌：四指并攏伸直，拇指彎屈緊扣于虎口處勾：五指第一指節捏攏在一起，屈腕步型：弓、馬、仆、虛、歇、丁步，坐盤，插步，蓋步組織教法××××××××××××××體育委員××××××××××××××教法：宣講法速度適中2、成廣播體操隊形散開教法：教師口令指揮，學生練習。要求：準備活動充分組織：集體練習1、簡介本課程基本功練習內容演練技巧并示范課的組織教法課的內容組織教法2、手法：3、學生模仿，教師糾錯順肩、急旋前臂的動作架拳：松肩、肘微屈，前臂內旋推掌：挺胸、收腹、立腰、出掌快速有力，有寸勁亮掌：抖腕、亮掌與轉頭同時完成1、糾正易犯錯誤，繼續練習要求：仔細觀察記憶，認真練習組織：集體練習坐盤2、學生跟練4、步法：擊步、墊步等3、學生自練，教師口令提示二、三路長拳第一段1-4動4、教師糾錯，學生再練習特點：姿勢挺拔，動作舒展，快速有5、教師口令指揮，學生練習力（1）靜力性放松1、教師提示并口令指揮要求：積極放松場地布置田徑場器材及設備武術教案課的基本外擺腿腿法練習的正確方法。重點重點：基本功練習中的挺胸、立腰或塌腰難點難點：長拳中的大躍步前穿課的時間課的內容1、體育委員集合整隊，報告人數（3）俯背運動（4）膝關節運動（5）踝、腕關節運動3、專門性練習：拉韌帶一、正側壓腿、正側踢腿、里合腿、外擺腿要點：直體向前、向下壓振，逐漸加大振幅，逐步提高腿的高度要點：同正壓腿組織教法××××××××××××××體育委員××××××××××××××教法：宣講法組織：1、成兩列縱對慢跑,隊伍整齊2、成廣播體操隊形散開3、專門性練習由肋木輔助練習教法：1、教師口令指揮，學生練習2、教師講解壓韌帶要領并示范組織：集體練習分組練習1、簡介基本功練習內容2、教師講解示范，并強調動作要領學生練習，教師指導3、教師領做，學生跟練武術教案課的組織教法課的內容組織教法5場地布置要點：抬頭挺胸，身體中正。要點：腳尖向腦后走。要點：保持上肢中正。要點：展胯，動作幅度大。4、師生再見4、學生集體練習，教師糾錯5、學生分組練習，教師糾錯2、教師啟發引導學生完成動作3、反復練習，思考動作，體會動作要領組織：集體練習3、學生練習，教師口令指揮4、教師糾錯，學生再練習組織：集體練習1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習注意事項要求：積極放松器材及設備武術教案課的基本三、單足跳、蛙跳等2、學習三路長拳新動作并復習已學的。難點課的重點：套路學習的虛步栽拳、提膝穿掌的方向路線難點：基本功練習腰的靈活性時課的內容組織教法間1、體育委員集合整隊，報告人數隊形：△△教師2、師生問好5＇3、宣布本次課的內容及要求××××××××××××××體育委員4、安排見習生××××××××××××××教法：宣講法1、繞田徑場慢跑二圈（2×400m）組織：1、成兩列縱對慢跑,隊伍整齊2、徒手操（4×8拍）2、成廣播體操隊形散開（1）頭部運動（2）四肢運動3、專門性練習由肋木輔助練習（3）俯背運動（4）膝關節運動教法：1、教師講解基本功要領并示范（5）踝、腕關節運動（6）拉韌帶2、教師口令指揮，學生練習3、專門性練習：基本功、五步拳3、學生練習五步拳，教師指導糾錯一、腰功、跳躍、平衡練習組織：集體練習收髖，并向前折體2、教師分解教學2、涮腰3、教師講解示范單個動作要點：盡量增大繞環幅度4、教師領做，學生跟練要點：兩手臂盡量伸直武術教案課的組織教法課的內容組織教法要點：踢擺時，腳高須過腰，左腿在擊響的一瞬間，屈膝收控于右腿側。要點：躍步要遠，落地要輕，兩臂上擺要點：平衡站穩，提膝過腰，腳內扣7、望月平衡要點：平穩站立，扣緊膝窩，腳底朝上三、單足跳、蛙跳等4、布置課后作業5、學生自練，教師指揮6、教師糾錯，學生再練習及糾正方法8、學生分組自練，教師巡回指導9、集體練習，教師指揮要求：講解簡明扼要，學生觀察思考組織：集體練習1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習注意事項要求：積極放松武術教案課的基本難點課的二、單足跳、蛙跳重點：轉身踢腿馬步盤肘難點：彈跳力的練習時課的內容間1、體育委員集合整隊，報告人數3、宣布本次課的內容及要求4、安排見習生（3）俯背運動（4）膝關節運動（5）踝、腕關節運動3、專門性練習：柔韌練習、基本功初級長拳第三路：第二段6-8動要點：兩臂要劃立圓，幅度要大，擺要點：左腿后撤一步成右弓步，右掌向下、向后伸直成后勾手，左掌經腰體素質，尤其是腿部力量。組織教法××××××××××××××體育委員××××××××××××××教法：宣講法組織：1、成兩列縱對慢跑,隊伍整齊2、成廣播體操隊形散開3、專門性練習由肋木輔助練習教法：1、教師口令指揮，學生練習2、教師指導糾錯習2、教師分解教學模仿練習4、教師領做，學生跟練體育教學（教案）課的組織教法課的內容組織教法場地布置8、轉身踢腿馬步盤肘盤肘要快速有力，右肩前傾。要點：掄臂動作要連貫并劃成立圓，歇步要兩腿交叉全蹲，左腿大小腿靠緊，臀部貼于左小腿外側，膝關節在要點：仆步時左腿充分伸直，腳尖內挺胸，塌腰，微左轉。二、素質訓練4、布置課后作業5、學生自練，教師指揮6、教師糾錯，學生再練習8、教師強調重難點，并介紹易犯錯誤及糾正方法9、學生分組自練，教師巡回指導11、集體糾錯，學生再練習，教師小結要求：講解簡明扼要，學生觀察思考組織：學生分組練習教法：學生練習，教師指導組織：集體練習1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習注意事項要求：積極放松器材及設備武術教案課的基本難點重點：五種步型的動作要領難點：長拳中的幾個難度動作質，促進身體的全面發展。課的時間課的內容組織教法1、體育委員集合整隊，報告人數隊形：△△教師2、師生問好3、宣布本次課的內容及要求××××××××××××××體育委員4、安排見習生××××××××××××××教法：宣講法1、繞田徑場慢跑二圈（2×400m）組織：1、成兩列縱對慢跑,隊伍整齊2、徒手操（4×8拍）2、成廣播體操隊形散開（1）頭部運動（2）四肢運動3、專門性練習由肋木輔助練習（3）俯背運動（4）膝關節運動教法：1、教師口令指揮，學生練習（5）踝、腕關節運動2、教師指導糾錯3、專門性練習：柔韌練習、彈跳力3、學生再練習沉髖。1、逐漸延長站立時間，左右交替練習使兩腳尖朝前，兩膝微向內扣。習武術教案課的組織教法課的內容組織教法5場地布置要點：挺胸、直背、塌腰、沉髖要點：挺胸、直背塌腰、前虛后實，虛實分明要點：挺胸、塌腰、兩腿并攏貼緊、要點：動作之間的銜接4、布置課后作業4、結合穿掌作左、右歇步亮掌動作組織：集體練習2、教師領做，學生同步練習3、學生自練，教師巡回指導4、集中糾錯，學生再練習要求：講解簡明扼要，學生觀察思考組織：集體練習1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習注意事項要求：積極放松器材及設備武術教案二、途中跑、彎道跑技術要領及練習課的基本難點課的重點：彎道跑的擺臂及身體重心控制，弓步劈拳左右腳上步帶弧形難點：途中跑技術中大腿鞭打積極下壓，換跳步動作的協調、連貫，震腳時腿要彎曲，全腳著地時課的內容1課的內容1、體育委員集合整隊，報告人數3、宣布本次課的內容及要求4、安排見習生2、游戲：長江黃河一組同學叫“長江”，另一組叫“黃河”3、專門性練習：柔韌練習、基本功一、途中跑、彎道跑要點：當擺動腿擺到最高點時，即以腳掌微蹺起做由前向下后方的運動，在腳前離重心投影點約1.5腳掌處著間××××××××××××××××××××××××××××教法：宣講法組織：1、成兩列縱對慢跑,隊伍整齊2、成方向相反的兩橫排3、專門性練習由肋木輔助練習教法：1、教師口令指揮，學生練習2、講解游戲名稱、方法、規則3、學生做游戲組織：集體練習→分組練習2、用腳掌富有彈性的著地放松，步幅大，并注意后蹬和前擺的正確技術武術教案課的組織教法課的內容組織教法部結分場地布置難點：上下肢協調，調節平衡和跑的要點：跑時身體要向圓心傾斜，彎道半徑越小，跑的速度越快，身體向內傾斜程度就越大，為了跑最短距離，腳著地點應盡量靠近左側分道線。難點：身體各部位的正確技術。二、三路長拳第三段3-4動要點：左右腳上步稍帶弧形2、換跳步弓步沖拳要點：動作要連貫、協調，震腳腿要4、布置課后作業組織：集體練習→分組練習→集體練習教法：同前一次課要求：講解簡明扼要，學生觀察思考組織：集體練習1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習注意事項要求：積極放松器材及設備武術教案課的基本難點課的重點：弓步臂拳的擄手動作，劈拳時手臂伸直彎道跑時身體向內傾斜，擺臂幅度難點：換跳步時課的內容間1、體育委員集合整隊，報告人數3、宣布本次課的內容及要求4、安排見習生（3）俯背運動（4）膝關節運動（5）踝、腕關節運動3、專門性練習：柔韌練習、基本功一、復習三路長拳3-4動及前兩段要點：左右腳上步稍帶弧形2、換跳步弓步沖拳要點：動作連貫、協調，震腳時腿要彎屈，全腳著地，左腳離地不要高。武術教案組織教法××××××××××××××體育委員××××××××××××××教法：宣講法組織：1、成兩列縱對慢跑,隊伍整齊2、成廣播體操隊形散開3、專門性練習由肋木輔助練習教法：1、教師口令指揮，學生練習2、教師指導糾錯習2、教師巡回檢查指導課的組織教法課的內容組織教法場地布置先慢跑再中速跑然后快跑，體會隨著速度的加快，身體內傾程度不斷加大2、學習跑進彎道技術，先在直道上入彎道前2-3步加大右腿的蹬地力量和改變右臂的擺臂角度。接著跑進直道，轉直道的那幾步身體逐漸正直，隨慣性向前。4、完整技術：彎、直道的銜接4、布置課后作業組織：集體→分組1、圍成一圈，逐漸加速，體會動作技術4、彎道跑完整技術6、教師檢查指導組織：集體練習1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習注意事項要求：積極放松器材及設備武術教案課的基本難點二、中長距離的變速跑重點：長拳的規范性難點：變速跑節奏的掌握課的時間課的內容1、體育委員集合整隊，報告人數3、宣布本次課的內容及要求4、安排見習生（3）俯背運動（4）膝關節運動（5）踝、腕關節運動3、專門性練習：柔韌練習、基本功組織教法××××××××××××××體育委員××××××××××××××教法：宣講法組織：1、成兩列縱對慢跑,隊伍整齊2、成廣播體操隊形散開3、專門性練習由肋木輔助練習教法：1、教師口令指揮，學生練習2、教師指導糾錯習1、學生先復習，教師檢查2、教師集體糾錯武術教案課的組織教法課的內容組織教法30＇二、中長距離的變速跑1、簡述中長距離跑的分類并說明其鍛煉價值2、結合示范講解技術要領2、教師巡回指導，認真糾錯組織：集體練習4、體會技術特點場地布置4、布置課后作業組織：集體練習1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習注意事項要求：積極放松器材及設備武術教案班級一、復習三路長拳第二段，第三段班級一、復習三路長拳第二段，第三段課的基本2、測試學生的耐力水平及鍛煉的效果。重點重點：長拳的復習難點難點：跑的正確姿勢課的時間課的內容1、體育委員集合整隊，報告人數3、宣布本次課的內容及要求4、安排見習生（3）俯背運動（4）膝關節運動（5）踝、腕關節運動3、專門性練習：柔韌練習、基本功要點：檢查跑的能力難點：跑的正確姿勢評分標準：優、良、及格組織教法××××××××××××××體育委員××××××××××××××教法：宣講法組織：1、成兩列縱對慢跑,隊伍整齊2、成廣播體操隊形散開3、專門性練習由肋木輔助練習教法：1、教師口令指揮，學生練習2、教師指導糾錯組織：依點名順序測試武術教案課的組織教法課的內容組織教法二、復習三路長拳第二段、第三段1-4動要點：上步弓步劈拳時上步略帶弧形2、復習第二段要點：動作之間的銜接，節奏的掌握組織：集體練習→分組練習→集體練習2、學生仔細領會動作4、布置課后作業1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習注意事項要求：積極放松器材及設武術教案課的基本二、復習鉛球側向投擲技術難點課的重點：長拳換跳步技術動作難點：鉛球擺動腿與身體的協調時課的內容間1、體育委員集合整隊，報告人數3、宣布本次課的內容及要求4、安排見習生（3）俯背運動（4）膝關節運動（5）踝、腕關節運動3、專門性練習：柔韌練習、基本功一、學習三路長拳第三段5-6動上體右轉90o,重心移至兩腿中間成馬步，右拳收至腰間，左掌變拳向左組織教法××××××××××××××體育委員××××××××××××××教法：宣講法組織：1、成兩列縱對慢跑,隊伍整齊2、成廣播體操隊形散開3、專門性練習由肋木輔助練習教法：1、教師口令指揮，學生練習2、教師指導糾錯習1、教師先完整示范，再分解教學并示范，學生模仿練習3、教師領做，學生跟練4、學生自練，教師指揮并糾錯武術教案課的組織教法課的內容組織教法場地布置2、弓步下沖拳右腿蹬直成左弓步，左拳變掌向下經體前向上架于頭左上方，掌心向上右拳自腰間向左前斜下方沖出，目視右二、復習鉛球側向投擲技術（4）側向成發力前的準備姿勢（5）持球成徒手、屈膝俯身成原地弓箭步做交換跳練習4、布置課后作業6、教師強調重難點，并介紹易犯錯誤及糾正方法7、學生分組自練，教師巡回指導8、集體練習，教師口令指揮9、集體糾錯，學生再練習組織：集體練習→分組練習1、原地推球的技術要點分析組織：集體練習1、教師提示并口令指揮4、提示課外練習注意事項要求：積極放松器材及設備武術教案課的基本難點課的二、100M跑、立定跳遠重點：長拳動作間的銜接即節奏的把握難點：換跳步動作時課的內容間1、體育委員集合整隊，報告人數3、宣布本次課的內容及要求4、安排見習生（3）俯背運動（4）膝關節運動（5）踝、腕關節運動3、專門性練習：柔韌練習、基本功組織教法××××××××××××××體育委員××××××××××××××教法：宣講法組織：1、成兩列縱對慢跑,隊伍整齊2、成廣播體操隊形散開3、專門性練習由肋木輔助練習教法：1、教師口令指揮，學生練習2、教師指導糾錯習1、學生演練，教師檢查學生學習情況2、教師指出不足4、教師再講解并示范武術教案課的組織教法課的內容組織教法1、教師計時，記錄成績3、見習生輔助教師記錄4、學生測試要求：測試要公正、公平、準確4、布置課后作業14、提示課外練習注意事項要求：積極放松場地布置場地布置器材及設備武術教案課的基本二、學習三路長拳第三段7-8動1、反復練習以使學生熟練掌握三路長拳已學動作并能獨立完成動作練習。2、弄清新學動作的要領、方向、路線難點課的重點：長拳精、氣、神的把握、體會難點：側踹腿的高度不能低于腰，力點在腳跟時課的內容間1、體育委員集合整隊，報告人數3、宣布本次課的內容