超高效液相色譜今天得HPLC

科學描述今天HPLC分離得品質取決于色譜柱得填料;同時也被其所限制。改進色譜柱填料得性能可以給色譜過程帶來速度、靈敏度及分離度均大幅提高得好處填料得顆粒度對色譜柱性能得貢獻最大速率理論

1956年VanDeemter等人在塔板理論得基礎上,提出了關于色譜過程得動力學理論——速率理論。該理論采用塔板高度得概念,但同時考慮到H還取決于同一組分得不同分子在柱中差速遷移過程中所引起得色譜蜂擴展程度,將色譜過程與組分在兩相間得擴散和傳質過程等動力學因素聯系起來,從理論上總結出影響塔板高度得各種因素。vanDeemter方程dp—固定相顆粒平均直徑

—填充不規則因子Dm—組分在流動相中得擴散系數(cm2/s)—彎曲因子,亦稱阻礙因子

—由柱填充性決定得因子q—與固定相性質有關得因子,均勻液膜q為2/3df—液膜平均厚度Ds—組分分子在固定液中得擴散系數10min從80年代到現在3.5~5μm球形微多孔填料1500~4000psi50,000~80,000塔板數/米3.9×300mm70年代末期10μm不規則微多孔填料1000~2500psi25,000塔板數/米3.9×300mm10min填料顆粒尺寸得演變70年代早期40μm薄殼非多孔基質上涂布100~500psi1000塔板數/米1m長色譜柱10minvanDeemter曲線帶來得承諾如果填料得顆粒繼續演變……更小得顆粒度……填料顆粒尺寸得演變前景:2、1×100mm色譜柱1、7μm雜化填料顆粒可達到15,000psi通常有每米200,000理論塔板數得柱效速度、靈敏度及分離度得完美結合Minutes1.000.000.200.400.600.80AU0.0000.0200.040一分鐘以內！UPLC?得技術成就小顆粒色譜填料(化學品)超高壓輸液單元(能達到15,000psi)降低系統體積并優化流體路徑降低自動進樣器進樣周期得時間、減少交叉污染超高速檢測器,包括光學及質譜檢測器新得色譜單元之間得通訊協議功能齊全得診斷功能為系統完整性而專門設計得軟件系統得技術

超高效由設計而來檢測器:光學及/或質譜檢測器可調紫外或光電二極管矩陣為UPLC?專門優化得流動池高速檢測色譜柱管理:創新得樞軸轉動設計置色譜柱出口直接到檢測器樣品管理器:低擴散XYZZ’形式快速進樣周期低交叉污染樣品盤及/或樣品瓶可選樣品組織器兩元溶劑管理:高壓混合兩元梯度四溶劑選擇在線脫氣低擴散設計UPLC得耐壓能力10大家應該也有點累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流0、000、040、080、120、160、000、501、001、502、002、503、003、504、004、505、005、506、001、Thiourea-0、4302、toluene-1、0343、propylbenzene-1、7424、butylbenzene-2、4135、hexylbenzene-5、058

樣品得組份數:55μm顆粒度完全分離時間:6、00分鐘0、200、241.Thiourea-0.0462.toluene-0.0883.propylbenzene-0.1374.butylbenzene-0.1825.hexylbenzene-0.360UPLC?AU0、000、100、20Minutes0、050、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、60UPLC?HPLC樣品得組份數:51、7μm顆粒度完全分離得時間:0、60分鐘UPLC?得速度提高了！增加了樣品得通量0、00AU使用1、7μm顆粒度得填料增加靈敏度可看到更多得樣品信息AU0.0000.0040.0080.0120.0160.020Minutes1.701.801.902.002.102.202.302.402.502.601.7μmAU0.0000.0100.0200.0300.0400.050Minutes0.001.002.003.004.005.006.007.008.00AU0.0000.0100.0200.0300.0400.0505.0μm0.024恒定柱長時;UPLC?得靈敏度提高1、7倍(170%)！恒定L/dp時;UPLC?得靈敏度提高三倍(300%)！UltraPerformanceLC?

速度、靈敏度與分離度得結合AU0、0000、0100、0200、0300、0400、050Minutes0、001、002、003、004、005、006、007、00AU0、0000、0100、0200、0300、0400、050Minutes0、002、004、006、008、0010、0012、0015、005.0μm1.7μm60%更快30%更靈敏70%更高分離度在改進獲得信息質量得前提下提高分析速度UltraPerformanceLC?

速度、靈敏度與分離度得結合HPLC3、5μmUPLC?1、7μm對流出時間接近得色譜峰有更好得分離度及更高得靈敏度生產力:每次實驗得到更多信息AUAUUltraPerformanceLC?

與HPLC一樣得重現性AU0.000.100.200.300.400.500.600.700.80Minutes0.600.700.800.901.001.101.201.301.40Acetanilide-0.677Acetophenone-0.837Propiophenone-0.951Butyrophenone-1.035Benzophenone-1.064Valerophenone-1.111Hexanophenone-1.182Heptanophenone-1.247Octanophenone-1.307梯度重現性N=34UltraPerformanceLC?

與HPLC一樣得耐受性穩定性試驗得條件: 從10到90%甲醇得1分鐘梯度1000次進樣 溫度:55oC 最大壓力:8500psi 流速:1、3ml/min、AU0.000.050.100.150.200.250.300.35Minutes0.000.250.500.751.001.251.501.75ACQUITYUPLC?C18色譜柱2、1×30mm1、7μm黑色:第一次進樣紅色:第1000次進樣UltraPerformanceLC?

先進得MS入口技