35DB35/T2034—2021鴨瘟強弱毒核酸鑒別診斷技術Quarantineprotocolforvirulentandattenuatedstrainsofduckplaguevirusinfection2021-12-29發布2022-03-29實施福建省市場監督管理局發布I 4 本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草1GB/T6682分析實驗室用水規DNA：脫氧核糖核酸（DeoxyriboPCR：聚合酶鏈式反應（PolymerasTAE：三羥甲基氨基甲烷-硼酸-乙二胺四乙酸（Trihydroxymethylaminomethane-boricacid-5.2UL2基因特點鴨瘟病毒，又稱為鴨腸炎病毒或鴨皰疹病毒1型，是引起雁形目禽類發生鴨瘟非必需基因，在DNA復制過程中可將脫氧尿嘧啶核苷三磷酸錯誤插入或是胞嘧啶的脫氨基造成的尿嘧啶殘基切除，保證DNA復制的正確性和順利進行。對GenBank中登錄的鴨瘟病毒（強毒株和弱毒株）的UL22將采集的組織（肝臟、食道粘膜假膜）經剪碎處理后，與磷酸鹽緩沖液按體積比1:3的比例制成組25℃)作用20min。），6.4.5加入1/10體積的3M乙酸鈉和2倍體積冰凍預冷的無水乙醇混勻后，-20℃放置1h。3以56℃30min滅活的鴨瘟強毒、弱毒病毒），瘟弱毒陽性；當待檢樣品出現約1019bp和42O2.9gKH2PO4將上述試劑溶于800mL水中，定容至1000mL，高壓滅菌A.210%十二烷基磺酸鈉溶液取10g的SDS粉末溶解在70mL水中，加熱到70℃,攪拌待完全溶解后，定容到100mL，高壓滅菌5A.6溴化乙錠溶液置微波爐中加熱至完全融化，待冷至50℃~60℃時，加溴化乙錠（EB）溶液5μL，搖勻后倒入67TAACGTCGTTTATACTGTTCCACAAGGAAGTTGCCAGTCAACCGGCTCAACGCCACGACCTTCCAGGTATTCATTGGATCACATAAGATGAATGGCTTTCTAGACAGCGGTGATGGATGGCTATATTTCAAAACACAATGCTTGCGACAATTCGGTTCCTGAGCATGCACGCCCCACAGCATAAACACTAATCCTTCCTTATTGTCATGTAACCATTGTAATACAGATTTGACTATACCAACGTCTACATGCGATCCCGGATGCCCCTTTCGTACTGTGAGGGTGGTATTTAACAACAAAACTCCAGCTTTGGCCCGGCAGCCATGATCAACAATTTTCGTCTCTGGGTAAGAGCGCCGAACGGCCGATAATATATTACGTAGGCTAGGAGGTATCCTCCGCACGCTGAATGCGAGCCCGTGAGCCTGGCCGGGTTGATGATATGGATCTTGCCCAACTATGATGACTTTTACATCACAGTACCTCGTCCATGTAAATATTTCATTTTTTGGCGGCAGGACTTCTTCGATGTCACAGCGCCGTTCATACTCAAGTAACCCCACTTCCGATTGTAGCTCTTGGTATAATACTTCCCGCCAAGCATCGCCAATACAATAATCGCCGCTCAATTTTTCCGGACTATTAAACCACGAAGGCGCGACCTCACCGCGACCGCTGCTGTTCGACGTCTGAGGTTGTTGTGCTATACCGCCCCCACAGGCAACGAAACCCGCTGGCGCACCACAAGGCCTGCGTCGTTTCGGCGCCTGGGACGGAGACGGGAGCCTATCGTCGGCCGGGTTCACTTTTGTCATGTCTTCGGCCATATCTCGAGTCTGGATCGAATGCATAACGGATGCTGGCCTGAGGGTCTTTCATATTCGCGTTTCCGTGGCAGGTTCTGTCATTTTAACGTCGTTTATACTGTTCCACAAGGAAGTTGCCAGTCAACCGGCTCAACGCCACGACCTTCCAGGTATTCATTGGATCACATAAGATGAATGGCTTTCTAGACAGCGGTGATGGATGGCTATATTTCAAAACACAATGCTTGCGACAATTCGGTTCCTGAGCATGCACGCCCCACAGCATAAACACTAATCCTTCCTTATTGTCATGTAACCATTGTAATACAGATTTGACTATACCAACGTCTACATGCGATCCCGCTGGCGCACCACAAGGCCTGCGTCGTTTCGGCGCCTGGGACGGA