動物細胞培養克隆猴中中和華華克隆皮膚動物細胞培養在治療大面積燒傷時，通常采用的辦法是取燒傷病人的健康皮膚進行自體移植。克隆皮膚但對這樣的病人來說，自體健康皮膚非常有限，使用他人皮膚來源又不足，而且產生免疫排斥反應。那么，怎樣才能獲得大量的自體健康皮膚？能不能用自體皮膚的單個細胞培養出可供移植的皮膚？科學家通過動物細胞培養構建了人造皮膚從社會中來動物細胞培養動物細胞核移植動物細胞融合生產單克隆抗體動物細胞工程是最基礎的技術思考討論

燒傷病人圖片異體皮膚移植圖片如何解決異體器官移植的免疫排斥反應？1、概念：從動物體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后在適當的培養條件下，讓這些細胞生長和增殖的技術。2、目的：獲得細胞或細胞產物；不能獲得完整動物個體。3、原理：細胞增殖（有絲分裂）4、實例：克隆皮膚皮膚燒傷那么，獲得這些細胞或細胞產物的具體過程又是怎樣的？動物細胞培養胚胎或幼齡動物器官組織取出組織剪碎胰蛋白酶處理單個細胞細胞懸液加培養液培養瓶內培養轉入（細胞貼壁長成單層細胞,有接觸抑制現象）細胞貼壁接觸抑制原代培養傳代培養（原代培養）(分離組織)(分散組織)一、動物細胞培養的過程動物胚胎或幼齡動物的組織、器官單個細胞細胞懸浮液10代細胞少部分突破細胞壽限“癌變”，無限傳代動物細胞培養不能最終培養成動物體50代細胞原代培養傳代培養細胞貼壁剝離、分瓶細胞分化程度低，增殖能力強去掉組織間蛋白加培養液胰蛋白酶剪碎出現接觸抑制一、動物細胞培養的過程一、動物細胞培養的過程（1）培養前為什么分散成單個細胞？思考討論①成塊組織中細胞與細胞靠在一起，彼此限制了生長與增殖②利于與培養液充分接觸，保證O2與營養供應和代謝物及時排出。胃蛋白酶不可以，pH不適宜。一、動物細胞培養的過程（2）將組織分散成單個細胞時為什么要用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）

處理？胃蛋白酶可以嗎？思考討論胰蛋白酶可以將動物組織細胞間的蛋白質成分酶解，使細胞分散開，獲得單個細胞。纖維蛋白、膠原蛋白等細胞膜含有蛋白質，長時間處理會損傷細胞要控制好時間一、動物細胞培養的過程（3）在用胰蛋白酶處理組織時應注意什么？思考討論資料：動物細胞生長特性細胞貼壁一、動物細胞培養的過程培養過程中出現了幾個特點：要求：（培養瓶（皿）內表面光滑、無毒、易于貼附）細胞的接觸抑制懸液中分散的細胞貼附在瓶壁生長的現象；當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖的現象一、動物細胞培養的過程（1）細胞貼壁（2）接觸抑制原代培養傳代培養細胞株細胞系如何界定原代培養和傳代培養？細胞株和細胞系？遺傳物質改變遺傳物質有的改變洗滌、稀釋、分瓶培養多數細胞固定在表面生長和分裂隨細胞增多，細胞就會停止分裂增殖一、動物細胞培養的過程細胞懸浮液10代細胞50代細胞無限傳代培養過程中出現了幾個特點：思考將動物組織處理后的初次培養（10代內）。當原代培養的細胞貼滿瓶壁時，重新用胰蛋白酶處理，使細胞從瓶壁脫落，加培養液制成細胞懸液，分裝到2個或2個以上的培養瓶中繼續培養（10代后）。保持細胞正常二倍體核型部分細胞核型改變遺傳物質改變突破細胞壽限危機1危機2培養危機：原代培養傳代培養（遺傳物質沒改變）（遺傳物質有的改變）一、動物細胞培養的過程（3）原代培養（4）傳代培養分瓶培養10代細胞50代細胞無限增殖培養過程中出現了幾個特點：細胞株和細胞系原代細胞一般傳至10代左右細胞生長停滯，大部分細胞衰老死亡，少數細胞存活到40~50代，這種傳代細胞為細胞株。細胞株傳代至50代后又出現細胞生長停滯狀態，只有部分細胞由于遺傳物質的改變，使其在培養條件下可以無限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。細胞系的遺傳物質改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養。一、動物細胞培養的過程細胞株細胞系區別：一、動物細胞培養的過程欲使動物細胞體外培養順利進行，應營造怎樣的環境？思考討論葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、促生長因子、微量元素（合成培養基）+動物血清等①培養液和所有培養用具滅菌處理，無菌操作。②添加一定量的抗生素？③定期更換培養液，防止代謝物積累傷害細胞。

溫度36.5+0.5度，pH7.2～7.4，也需考慮滲透壓因素。

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）二、動物細胞培養的條件營養：1無菌、無毒的環境：2溫度、PH和滲透壓：3氣體環境：4

O2和CO2的作用分別是什么？為什么對動物細胞進行培養時通常要添加血清？補充資料：1、血清中含有蛋白質、氨基酸、葡萄糖、激素等，2、氨基酸有多種，是細胞合成蛋白質的基本成分，其中有些氨基酸動物

細胞本身不能合成（稱為必需氨基酸），必須由培養液提供。3、血清激素有胰島素、生長激素等及多種生長因子；血清還含有多種未

知的促細胞生長因子、

促貼附因子及其他活性物質，能促進細胞的

生長、增殖和貼附。4、因此，細胞培養時，要保證細胞能夠順利生長和增殖，一般需添加

10%～20%的血清。血清中含有多種未知的促細胞生長因子等營養物質，這是細胞生長和增殖所必需的。二、動物細胞培養的條件二、動物細胞培養的條件動物細胞培養與植物組織培養有什么相同和不同之處？思考討論動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細胞懸浮液胰蛋白酶10代細胞50代細胞無限傳代單個細胞加培養液植物組織培養和動物細胞培養的比較離體的植物器官、組織或細胞愈傷組織根、芽植物體脫分化再分化接種至培養基動物細胞培養植物組織培養二、動物細胞培養的條件比較項目植物組織培養動物細胞培養原理培養基性質培養基特有成分培養結果培養目的獲得細胞及代謝產物細胞的全能性細胞株、細胞系植物體快速繁殖、培育無病毒植株等葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素液體培養基固體培養基細胞增殖二、動物細胞培養的條件植物組織培養和動物細胞培養的比較3、干細胞類型：1、胚胎干細胞：存在于早期胚胎中，具有分化成為成年動物體內任何一種類型的細胞，并進一步形成機體的所有組織和器官甚至個體的潛能。2、干細胞分布：早期胚胎、骨髓和臍帶血等多種組織和器官中胚胎干細胞（ES細胞）成體干細胞全能干細胞多能干細胞專能干細胞三、干細胞培養及其應用4、胚胎干細胞應用：體外誘導小鼠成纖維細胞誘導