第三章

消毒滅菌與病原微生物實驗室生物安全第一節(jié)消毒滅菌的常用術語滅菌:殺死物體上所有微生物的方法。消毒：殺死物體上或環(huán)境中的病原微生物的方法，并不一定能殺死含芽胞的細菌或非病原微生物。消毒劑----用于消毒的藥品。防腐：防止或抑制體外細菌生長繁殖的方法。清潔：通過除去塵埃和一切污穢以減少微生物數(shù)量的過程。

無菌：無活菌存在。

無菌操作：防止細菌進入人體或其他物品的操作技術。第二節(jié)消毒滅菌的方法（一）熱力滅菌法

高溫對細菌有明顯的致死作用---

蛋白質變性；核酸斷裂。

有干熱滅菌和濕熱滅菌兩大類，在同一溫度下，后者比前者的效力大。

*濕熱中菌體蛋白較易凝固。*濕熱的穿透力比干熱大。*濕熱的蒸汽有潛熱存在。物理消毒滅菌法干熱滅菌干熱的殺菌作用是通過脫水、干燥和大分子變性。

1.焚燒法：直接點燃或在焚燒爐內焚燒。是一種徹底的滅菌方法。適用于廢棄物品或動物尸體。

2.燒灼法：直接用火焰滅菌。適用于接種環(huán)，試管口等的滅菌。

3.干烤法：將物品置干烤箱內，加熱至160~170℃，2h。

適用于高溫下不變質、不損壞、不蒸發(fā)的物品。

4.紅外線：利用電磁波的熱效應滅菌。1~10

m波長的熱效應最強。適用于醫(yī)療器械的滅菌。濕熱滅菌

1.巴氏消毒法：用較低溫度殺滅液體中的病原微生物或特定的微生物，而仍保持物品中所需的不耐熱成分不被破壞的消毒方法。

61.1~62.8℃，30min;71.7℃,15~30s

用于牛乳制品、酒類等的消毒。

2.煮沸法:

100℃水浴，30min。食具、刀剪等消毒。

3.流動蒸氣消毒法：

100℃汽浴，30min。

4.間歇蒸汽滅菌法：100℃汽浴，30min/次。

5.高壓蒸汽滅菌法：121.3℃汽浴（103.4kPa)，15~20min。

培養(yǎng)基、生理鹽水、手術敷料等耐高溫、耐濕物品的滅菌。（二）輻射殺菌法

紫外線殺菌波長200~300nm的紫外線有殺菌作用，其中以265~266nm最強。

殺菌機制：形成TT,干擾DNA的復制與轉錄。

殺菌作用特點：穿透力弱，表面消毒。

適用范圍：手術室、傳染病房、細菌實驗室的空氣消毒,或不耐熱物品的表面消毒。電離輻射：高速電子、Ｘ射線、γ射線等。

殺菌機制：產生游離基，破壞DNA。

應用范圍：一次性醫(yī)用塑料制品；食品。微波：波長為1mm到1m左右的電磁波，可穿透玻璃、塑料薄膜與陶瓷等物質，不能穿透金屬表面。

檢驗室用品、非金屬器械、無菌病室的食品用具、藥杯及其它用品的消毒。（三）濾過除菌法

用物理阻留的方法將液體或空氣中的細菌除去，以達到無菌的目的。抽氣（四）干燥與低溫抑菌法

干燥可使菌體內的水分逸出，使細菌生命活動停止。

低溫可使細菌的新陳代謝減慢，影響細菌的生長。

冷凍真空干燥法一、化學消毒劑的殺菌機制

促進菌體蛋白質變性或凝固。

如酚類、醇類、重金屬鹽類、酸堿類、醛類等。

干擾細菌的酶系統(tǒng)和代謝。

如氧化劑、重金屬鹽類。

損傷菌細胞膜，降低菌細胞的表面張力并增加其通透性，胞外液體內滲，致使細胞破裂。

如酚類表面活性劑、脂溶劑等。化學消毒滅菌法二、消毒劑的主要種類

酚類—石炭酸、來蘇、洗必泰等

醇類---乙醇（70~75%）、異丙醇。

重金屬鹽類---硝酸銀、汞

氧化劑---過氧化氫、高錳酸鉀、過氧乙酸、碘酒、漂白粉、次氯酸等。

表面活性劑---新潔爾滅、、杜滅芬

烷化劑---甲醛、還氧乙烷、戊二醛等。

染料---龍膽紫

酸堿類---醋酸第三節(jié)

消毒滅菌的運用（一）高危器械物品

用時需進入無菌組織的物品。所有這些物品都應該滅菌。。

（二）中危器械物品

用時不進入無菌組織但接觸黏膜的器械。采用消毒即可。（三）低危器械物品

只接觸未損傷皮膚但不進入無菌組織和不接觸黏膜的物品。

一般用后清洗、消毒即可。（四）快速周轉的醫(yī)療器械

一、醫(yī)療器械物品的消毒滅菌（二）室內空氣消毒滅菌

1.物理消毒法

①紫外線照射（1.5W/m3，1h）最常用；

②濾過除菌：空氣通過孔徑小于0.2μm的高效過濾裝置以除去細菌和帶菌塵埃。

2．化學消毒法

包括化學消毒劑噴霧和熏蒸：①過氧乙酸噴霧、熏蒸；②過氧化氫噴霧；③二氧化氯溶液噴灑；④中草藥點燃煙熏。（三）手和皮膚的消毒

用肥皂和流動水經常并正確洗手。

病原微生物污染時應用消毒劑消毒。

（四）黏膜的消毒

過氧化氫，高錳酸鉀（五）病人排泄物與分泌物的消毒滅菌

次氯酸鈣，漂白粉（六）病人污染物品的消毒

流通蒸汽，過氧乙酸，漂白粉（七）飲水的消毒

氯氣（八）環(huán)境的消毒過氧乙酸

第四節(jié)影響消毒滅菌效果的因素一、消毒劑的性質、濃度與作用時間二、微生物的種類與數(shù)量三、溫度

四、酸堿度五、有機物第五節(jié)病原微生物實驗室生物安全

生物安全（biosafety）是生物技術安全（safetyofbiotechnology）的簡稱。

狹義地指現(xiàn)代生物技術的研究、開發(fā)、應用及轉基因生物可能對生物多樣性、生態(tài)環(huán)境和人類健康產生潛在的危害。

廣義地指與生物有關的各種因素對社會、經濟、人類健康及生態(tài)環(huán)境所產生的危害或潛在風險。

病原微生物實驗室

病原微生物實驗室生物安全的核心是防擴散和防感染。

關于病原微生物實驗室生物安全，我國法令包括對病原微生物的分類管理，對實驗室的分級管理，實驗室感染的控制以及監(jiān)督和法律責任等。

一、病原微生物的分類

根據(jù)傳染性、感染后對個體或者群體的危害程度，病原微生物分為四類：

第一類是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的

微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經宣布消

滅的微生物。。

第二類是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較

容易直接或者間接在人與人、動物與人、動

物與動物間傳播的微生物。

第三類是指能夠引起人或動物疾病，但一般情況

下對人、動物或環(huán)境不構成嚴重危害，傳

播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重

疾病，并且具備有效治療和預防措施的微

生物。

第四類是指在通常情況下不會引起人或動物疾病

的微生物。

第一類、第二類統(tǒng)稱為高致病性病原微生物。

二、病原微生物實驗室的分級級別處理對象一級對人體、動植物或環(huán)境危害較低，不具有對健康成人、動植物致病的致病因子。二級對人體、動植物或環(huán)境具有中等危害或具有潛在危險的致病因子，對健康成人、動植物和環(huán)境不會造成嚴重危害，具有有效的預防和治療措施。三級對人體、動植物或環(huán)境具有高度危險性，主要通過氣溶膠使人類傳染上嚴重的甚至是致命的疾病，或對動植物和環(huán)境具有高度危害的致病因子。通常有預防治療措施。四級對人體、動植物或環(huán)境具有高度危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明或未知的危險的致病因子。沒有預防治療措施。

一、二級實驗室不得從事高致病性病原微生物實驗活動。三級、四級實驗室從事高致病性病原微生物實驗活動。

從事高致病性病原微生物相關實驗活動應當有２名以上的工作人員共同進行。在同一個實驗室的同一個獨立安全區(qū)域內，只能同時從事一種高致病性病原微生物的相關實驗活動。應有健全安全保衛(wèi)制度。

三、實驗室感染的控制以及監(jiān)督和法律責任

感染的控制包括定期檢查實驗室的生物安全防護、病原微生物菌（毒）種和樣本的保存和使用、安全操作、實驗室排放的廢水和廢氣以及其他廢物處置等實施情況。

監(jiān)督的主要內容是監(jiān)督病原微生物實驗室執(zhí)行國家有關法律、行政法規(guī)、國家標準和要求的記錄、檔案及報告的情況。

法律責任的核心是承擔造成傳染病傳播、流行或者其他嚴重后果的法律責任。第四章噬菌體噬菌體(bacteriophage/phage)

是感染細菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的病毒。分布廣，有細菌的場所就有相應的噬菌體存在。有嚴格的宿主特異性，只能在活的微生物細胞內復制。一、形態(tài)與結構：蝌蚪形、微球形、細桿形二、化學組成

DNA

核酸或RNA

蛋白質尾部尾絲尾板、尾刺頭部尾髓和尾鞘

三、抗原性

具有抗原性；刺激機體產生特異性抗體。

四、抵抗力耐低溫；較一般細菌強；

五、增殖嚴格的宿主特異性;

以復制方式增殖。毒性噬菌體（virulentphage）

能在宿主細胞內增殖，產生許多子代噬菌體，并最終裂解細菌。噬菌體溶菌過程:

吸附:噬菌體與細菌表面受體發(fā)生特異性結合的過程。

穿入：噬菌體核酸進入宿主細胞的過程。生物合成：噬菌體利用宿主細胞的原料，合成自身的核酸和蛋白質。成熟與釋放：將合成的核酸和蛋白質按一定程序裝配成完整的成熟噬菌體，