.S0SY2.團 體 標 準A4淋洗類化妝品溫和性評價重建表皮模型組織活力法—yl5發布 5實施浙江省健康產品化妝品行業協會 發布中 國 標 準 出 版 社 出版A4前 言本文件按照標準化工作導則 第1部分標準化文件的結構和起草規則的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由浙江省食品藥品檢驗研究院提出。本文件由浙江省健康產品化妝品行業協會歸口。本文件起草單位浙江省食品藥品檢驗研究院廣東博溪生物科技有限公司珀萊雅化妝品股份有限公司上海家化聯合股份有限公司愛茉莉太平洋上海研發有限公司。本文件主要起草人何立成桑晶李樂宋雅玲袁登峰余昊陽。ⅠA4淋洗類化妝品溫和性評價重建表皮模型組織活力法范圍本文件描述了采用重建表皮模型對淋洗類化妝品溫和性功效的評價方法。本文件適用于淋洗類化妝品溫和性功效的評價。規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中注日期的引用文件僅該日期對應的版本適用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件。2分析實驗室用水規格和試驗方法術語和定義

下列術語和定義適用于本文件淋洗類化妝品t在人體表面皮膚毛發甲口唇等使用后及時清洗的化妝品。溫和性 s經過安全評估的受試物在正常合理及可預見的使用條件下未引起皮膚異常反應的特性。重建表皮模型l分離人組織表皮細胞作為種子細胞經過體外培養制備成與人表皮組織具有相似結構及功能的三維組織模型。試驗原理將經安全性評價為無刺激性的受試樣品均勻涂抹在重建表皮模型上經過比刺激性測試更長的暴露時間或更高暴露量后根據模型細胞的存活率評價受試樣品的溫和性。試劑和材料除非另有說明本方法所用試劑均為分析純水為2規定的三級水。聚乙二醇單辛基苯基醚n。十二烷基硫酸鈉。1A4異丙醇。噻唑藍。磷酸鹽緩沖液H不含鈣鎂離子。0 n0溶液吸取M溶于L水中配制成體積分數為0 的n0溶液。1 S溶液稱取0溶于0L水中配制成質量分數為1 的S溶液。T溶液稱取噻唑藍0溶于0L中配制成質量濃度為1L的溶液臨用現配。重建表皮模型試劑盒E模型及其培養液E模型及其培養液或其他經驗證的等效模型及其培養液。接收時模型與培養基接觸界面不應有明顯氣泡或固體培養基變色情況如黑紫色。死亡組織模型將重建表皮模型置于0℃環境下冷凍h以上。0樣品液取受試物溶于L水中配制成體積分數為0的樣品液。5樣品液取受試物溶于L水中配制成體積分數為5的樣品液。尼龍膜與E模型內徑相同的尼龍膜。儀器設備天平分度值為。二氧化碳培養箱7℃1℃2的體積分數范圍為)相對濕度5。超凈工作臺或生物安全柜。外置活塞式移液器最大量程為。連續分液器5。計時器。微孔板振蕩器。酶標儀配m波長濾光片。測試方法干擾因素排查當受試樣品與T有反應時取T溶液0加入受試樣品液方法一使用0樣品液方法二使用5 樣品液分別在h和h時觀察樣品周邊溶液顏色變化情況。當溶液顏色變成藍紫色應增加死亡組織模型組。當受試樣品有顏色時取受試樣品液方法一使用0樣品液方法二使用5樣品液加入2異丙醇中受試樣品不溶于異丙醇無須增加死亡組織模型對照組受試樣品溶于異丙醇在m波長處測定吸光度0若0應增加死亡組織模型組。測試步驟方法一)重建表皮模型復蘇在超凈工作臺或生物安全柜中將合格的模型轉移至含9L培養液的無菌6孔培養板放入二氧化碳培養箱培養。更換全部培養液放入二氧化碳培養箱培養過夜。模型底部與培養液間不應出2A4現氣泡。試驗分組和加樣試驗分為陰性對照組水陽性對照組0n0溶液或1S溶液和受試樣品0樣品液組當出現1中的情況時增加死亡組織模型陰性對照組和死亡組織模型受試樣品組每組平行使用3個模型。加樣前更換全部培養液采用外置活塞式移液器吸取0樣品液L均勻涂抹在模型表面放入二氧化碳培養箱暴露。沖洗暴露結束后采用連續分液器吸取5LS將模型逐個進行沖洗每次2未沖洗干凈應增加沖洗次數直至沖洗干凈吸干殘余的。甲瓚提取將模型轉移至含LT溶液的4孔培養板中模型底部與T溶液間不應出現氣泡。放入二氧化碳培養箱中培養h后轉移至新的4孔培養板中每孔加入2L異丙醇用封口膜密封培養板間隙。室溫條件下將培養板固定在微孔板振蕩器上振搖2h提取甲瓚或在4℃條件下提取過夜。0的測定提取結束后用移液器吸頭戳破模型將模型內外提取液混合均勻并轉移至6孔培養板中每個組織模型取2個復孔孔。用異丙醇作為溶劑對照取6個復孔在m波長處讀取吸光度0計算組織的存活率。數據處理與統計分析無死亡組織模型對照組的存活率按式計算。CB存活率AB0 1CB式中:A受試樣品的0;B溶劑對照異丙醇的0平均值;C陰性對照的0。有死亡組織模型對照組的存活率按式計算。CB存活率=AB-DE0 2CB式中:A受試樣品的0;B溶劑對照異丙醇的0平均值;C陰性對照的0;D受試樣品死亡組織的0;E陰性對照死亡組織的0。3A4測試步驟方法二)重建表皮模型復蘇在超凈工作臺或生物安全柜中將合格的模型轉移至含0L培養液的無菌2孔培養板放入二氧化碳培養箱培養。更換全部培養液放入二氧化碳培養箱培養過夜。模型底部與培養液間不應出現氣泡。試驗分組和加樣試驗分為陰性對照組不添加陽性對照組0n0溶液或1S溶液和受試樣品5樣品液組當出現1中的情況時增加死亡組織模型陰性對照組和死亡組織模型受試樣品組每組平行使用2個模型。加樣前更換全部培養液采用外置活塞式移液器吸取5樣品液L均勻涂抹在模型表面蓋上尼龍膜放入二氧化碳培養箱暴露。沖洗暴露結束后采用連續分液器吸取5LS將模型逐個進行沖洗每次2未沖洗干凈應增加沖洗次數直至沖洗干凈吸干殘余的。甲瓚提取將模型轉移至含LT溶液的4孔培養板中模型底部與T溶液間不應出現氣泡。放入二氧化碳培養箱中培養h后轉移至新的4孔培養板中每孔模型內外各加入L異丙醇用封口膜密封培養板間隙。室溫條件下將培養板固定在微孔板振蕩器上振搖提取甲瓚或在4℃條件下提取過夜。0的測定提取結束后用移液器吸頭戳破模型將模型內外提取液混合均勻并轉移至6孔培養板中每個組織模型取2個復孔孔。用異丙醇作為溶劑對照取6個復孔在m波長處讀取吸光度0計算組織的存活率。數據處理及統計分析同。結果判定試驗成立條件陰性對照組的0范圍為。陽性對照組的存活率5。同一樣品復孔間8。結果評價溫和性存活率≥0。4A4不判定存活率0需結合其他試驗進一步確認。試驗報告試驗報告至少應給出以下幾個方面的內容:檢驗依據;樣品和陽性對照組的信息包括與試驗操作相關的理化性