化學(xué)與生物工程學(xué)院生物工程系 生物化學(xué)實驗報告課程名稱：生物化學(xué)實驗項目：氨基酸的分離鑒定—紙層析法實驗室名：生物化學(xué)實驗室實驗時間：2012-11-15任課老師：楊艷專業(yè)班級：生物工程1142學(xué)生姓名：髙曄學(xué)號：201121030219組別：第五組實驗內(nèi)容【實驗?zāi)康摹客ㄟ^氨基酸的分離，學(xué)習(xí)紙層析法的基本原理，掌握氨基酸紙層析的操作方法。【實驗原理】紙層析法（paperchromatography）通常用于蛋白質(zhì)的氨基酸成分的定性和定量。1944年A．J．P．馬丁第一次用紙層析分析氨基酸，得到很好的分離效果。到現(xiàn)在為止，紙層析法已經(jīng)成為定性或定量測定多肽，核酸堿基，糖，有機(jī)酸，維生素，抗生素等物質(zhì)的一種最簡單易行的分離分析工具。層析用于分析簡單的混合物時可做單向?qū)游觥τ趶?fù)雜的混合物，可做雙向?qū)游觥Ｆ湓硎且詾V紙為惰性支持物的分配層析，層析溶劑由有機(jī)溶劑和水組成。濾紙纖維上的羥基具有親水性，吸附一層水作為固定相，有機(jī)溶劑為流動相。當(dāng)有機(jī)相流經(jīng)固定相時，由于分配系數(shù)不同，結(jié)果物質(zhì)在兩相間不斷分配而得到分離。其一般操作是將樣品溶解在適當(dāng)溶劑中，點樣在濾紙的一端；再選用適當(dāng)?shù)娜軇┫到y(tǒng)，從點樣的一端通過毛細(xì)現(xiàn)象向另一端展開，展開完畢，取出濾紙晾干或烘干，再以適當(dāng)?shù)娘@色劑或紫外燈、熒光燈下觀察其圖譜。樣品經(jīng)展開后某一物質(zhì)在紙層析譜上的位置常用比移值（rateoffolw,Rf）來表示。Rf=原點至層析斑點中心的距離/原點至溶劑前沿的距離=X/Y

在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù)。Rf值的大小與被測物的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān)。本實驗利用單向紙層析法分離氨基酸。【實驗器材】1器材層析缸、毛細(xì)管、小燒杯、量筒、培養(yǎng)皿、分液漏斗、層析濾紙(新華一號)、噴霧器（或白瓷盤），烘箱（或吹風(fēng)機(jī)）、鉛筆、直尺

2試劑

1)、擴(kuò)展劑

40mL將20mL水飽和的正丁醇和5mL醋酸以體積比4：1在分液漏斗中進(jìn)行混合。然后與15mL蒸餾水混合，充分振蕩，靜置后分層，放出下層水層。取漏斗內(nèi)的擴(kuò)展劑約5mL置于小燒杯中做平衡溶劑，其余的倒人培養(yǎng)皿中備用。

2)、氨基酸溶液0．5％的賴氨酸、脯氨酸、亮氨酸溶液及它們的混合液(各組份濃度均為0．5％)各配置5mL。

3)、顯色劑

50～100mL0．1％水合茚三酮正丁醇溶液。指導(dǎo)教師批閱意見：成績評定： 指導(dǎo)教師簽字：年月