…………○…………內…………○…………裝…………○…………內…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁，總=sectionpages22頁第=page11頁，總=sectionpages11頁2025年人民版選擇性必修3生物下冊階段測試試卷含答案考試試卷考試范圍：全部知識點；考試時間：120分鐘學校：______姓名：______班級：______考號：______總分欄題號一二三四五六總分得分評卷人得分一、選擇題(共6題，共12分)1、一種雙鏈DNA分子被三種不同的限制酶切割；切割產物通過電泳分離，用大小已知的DNA片段的電泳結果作為分子量標記（右圖左邊一列）。關于該雙鏈DNA,下列說法錯誤的是（）

A.呈環狀結構B.分子質量大小為10kbC.有一個NotI和兩個EcoRI切點D.其NotI切點與EcoRI切點的最短距離為2kb2、天然的玫瑰沒有藍色花，這是由于缺少控制藍色色素合成的基因B，而開藍色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B?，F用基因工程技術培育藍玫瑰，下列操作正確的是（）A.提取矮牽牛藍色花的mRNA，從而獲得互補DNA，再擴增基因BB.利用DNA連接酶從開藍色花矮牽牛的基因文庫中可以獲取基因BC.利用DNA聚合酶將基因B與質粒連接后導入玫瑰細胞D.將基因B直接導入大腸桿菌，然后感染并轉入玫瑰細胞3、下列有關胚胎干細胞（簡稱ES細胞）的敘述，錯誤的是（）A.ES細胞體積大，核仁明顯B.ES細胞可以從原始性腺中分離獲取C.ES細胞具有發育的全能性D.ES細胞可用于研究細胞凋亡的機理4、下圖為利用重疊延伸PCR的方法在蛋白A基因中部引入定點突變（A/T堿基對變為G/C）的過程。該過程需設計四種引物；其中引物A；D與蛋白A基因的兩端完全配對，引物B、C雖與蛋白A基因中部配對，但在欲引入突變的位置替換為突變后的堿基。通過多次獨立的PCR達到目的。

下列說法不正確的是（）A.PCR1所用引物應為引物A和BB.PCR2至PCR4依次以PCR1至PCR3的產物為模板C.PCR3無需額外加入引物D.PCR4的作用是大量擴增突變基因5、重組新冠病毒疫苗的制備原理是將新冠病毒S蛋白受體結合區(RBD)基因通過基因工程技術重組到中國倉鼠卵巢(CHO)細胞內，在體外大量表達出RBD二聚體，提取后制備成疫苗。下列敘述正確的是（）A.CHO細胞作為新冠病毒的宿主細胞，提供病毒所需的營養物質B.新冠病毒的RBD基因可以直接重組到CHO細胞的DNA分子上C.體外培養重組CHO細胞時需添加適量的干擾素防止雜菌污染D.要檢測RBD基因在CHO細胞中成功表達，可用抗原一抗體雜交方法6、如圖為基因表達載體的模式圖，下列敘述錯誤的是（）

A.構建基因表達載體需要用到限制酶和DNA連接酶B.終止子位于基因的下游，使翻譯在所需要的地方停止下來C.構建成功后可使目的基因在受體細胞中穩定存在，并遺傳給下一代D.抗生素抗性基因作為標記基因評卷人得分二、多選題(共8題，共16分)7、2012年6月29日，中國首例設計嬰兒誕生。這個嬰兒的父母均為地中海貧血基因的攜帶者。此前，二人曾育有一女，患有重度地中海貧血，為了再生一個健康的孩子，用他的臍帶血幫助姐姐進行造血干細胞移植，設計了這個嬰兒。下列有關說法正確的是（）A.“設計試管嬰兒”利用體外受精、胚胎移植、植入前胚胎遺傳學診斷技術等B.“設計試管嬰兒”與“試管嬰兒”均為有性生殖C.“設計試管嬰兒”與“試管嬰兒”都要進行胚胎選擇，二者選擇的目的相同D.設計嬰兒性別是“設計試管嬰兒”的第一步8、下列有關利用酵母菌發酵制作葡萄酒的敘述，錯誤的是（）A.葡萄糖在酵母菌細胞的線粒體內分解成丙酮酸B.制作葡萄酒時，酵母菌先在有氧條件下大量繁殖C.制作過程中，酵母菌始終處于堿性環境D.酵母菌的發酵產物不會影響自身的代謝活動9、下圖為胚胎干細胞獲取及培養簡圖；據圖示信息判斷，下列相關敘述錯誤的是（）

A.通過③過程可定向培育人造組織器官，用于器官移植B.研究細胞分化和細胞凋亡的機理可選擇圖中②或③途徑C.胚胎干細胞培養過程中5%CO2的主要作用是促進細胞呼吸D.②過程只能在飼養層細胞上進行，該細胞可作為干細胞的營養細胞10、下列關于發酵工程的應用，敘述正確的是（）A.檸檬酸是一種廣泛應用的食品酸度調節劑，可以通過黑曲霉發酵制得B.可以將乙型肝炎病毒的抗原基因轉入酵母菌通過發酵工程制備乙型肝炎疫苗C.利用發酵工程生產的白僵菌特異性強，只能用來防治一種農林害蟲D.一種真菌通過發酵工程產生的井岡霉素可以用來防治水稻枯紋病11、將單克隆抗體與前體藥物的專一性活化酶藕聯（簡稱抗體導向酶偶聯）是特異性治療腫瘤并減少對正常細胞傷害的最新研究方向。堿性磷酸酶是抗腫瘤藥物多柔比星前體的專一性活化酶，醫學研究中利用抗體導向酶偶聯機理將堿性磷酸酶與單克隆抗體制成“生物導彈”，通過活化多柔比星使其對DNA造成損傷，進而抑制以DNA為模板進行的生理活動，達到治療腫瘤的目的。下列說法正確的是（）A.為獲得單克隆抗體應首先給小白鼠注射腫瘤細胞表面抗原，得到能產生特定抗體的B淋巴細胞B.制備單克隆抗體的過程中至少要經過兩次原理和目的均不同的篩選過程C.生物導彈綜合利用了堿性磷酸酶的定向制導作用和單克隆抗體的特異性殺傷能力D.多柔比星只作用于有增殖能力的細胞12、下面為制備單克隆抗體過程示意圖，下列相關敘述錯誤的是（）

A.①表示B淋巴細胞和骨髓瘤細胞均是從小鼠的脾臟中提取的B.④中的篩選是通過抗原—抗體反應進行的C.④中的篩選是為了獲得能產生多種抗體的雜交瘤細胞D.⑤可以無限增殖13、利用枯草芽孢桿菌的發酵可以生產亮氨酸脫氫酶。在啟動子和亮氨酸脫氫酶基因之間插入信號肽（SPN）基因并將重組質粒導人枯草芽孢桿菌構建工程菌，可提高亮氨酸脫氫酶的生產水平。重組質粒的構建如圖所示，KmR為卡那霉素抗性基因，ApR為氨芐青霉素抗性基因，圖中各限制酶切割產生的黏性末端不同。下列敘述正確的是（）

A.重組質粒pMA5-SPN-leudh除圖中標注外還應具有終止子、復制原點等結構B.構建重組質粒用NdeI和BamHI兩種酶有助于正確插入目的基因C.圖中KmR和ApR存在于質粒中的作用是便于重組DNA分子的篩選D.圖中各限制酶切開的是氫鍵和磷酸二酯鍵，切下的DNA片段拼接需依靠DNA連接酶14、下列敘述中錯誤的是（）A.改變NaCl溶液的濃度只能使DNA溶解而不能使其析出B.細胞代謝產物的工廠化生產體現了細胞的全能性C.在pH和溫度相同時加酶洗衣粉的洗滌效果好于普通洗衣粉D.透明帶反應是防止多精入卵的第一道屏障評卷人得分三、填空題(共7題，共14分)15、哺乳動物核移植可以分為______核移植（比較容易）和______核移植（比較難）。16、在課題1中，我們學習了稀釋涂布平板法。這一方法常用來統計樣品中_________________的數目。當樣品的稀釋度足夠高時，____________________。17、微生物________________的方法很多，最常用的是_____________和__________________。18、第三步：將目的基因導入______19、PCR技術的DNA體外復制環境有DNA解旋酶、耐熱DNA聚合酶、DNA母鏈、4種脫氧核苷酸和__________，它能使DNA聚合酶能夠從引物的________端開始連接脫氧核苷酸。（人教P58列表），而引物是一段______________片段，用于PCR的引物長度通常為____個核苷酸。20、通常將DNAD的羥基（—OH）成為_______________端，而磷酸基團的末端成為___________端。由于_______________，因此DNA需要引物，因此DNA的合成方向總是從_________________延伸。21、植物繁殖的新途徑。

微型繁殖：可以高效快速地實現種苗的大量繁殖。

作物脫毒：采用______組織培養來除去病毒（因為植物分生區附近的病毒______）

人工種子：以植物組織培養得到的______、不定芽、頂芽和腋芽等為材料，經_____包裝得到的種子。優點：完全保持優良品種的遺傳特性，______；方便儲藏和運輸。

人工種子的結構包括：______、_____和______。評卷人得分四、判斷題(共4題，共28分)22、從牛卵巢中采集的卵母細胞可直接用于體細胞核移植。（選擇性必修3P53）()A.正確B.錯誤23、利用基因工程技術建立移植器官工廠是目前基因工程取得實際應用成果非常多的領域。()A.正確B.錯誤24、要對蛋白質的結構進行設計改造，最終必須通過改造氨基酸序列來完成。（選擇性必修3P94）()A.正確B.錯誤25、中國政府積極支持制定《禁止生殖性克隆人國際公約》，堅決反對克隆人，不允許進行任何生殖性克隆人實驗。（選擇性必修3P108）()A.正確B.錯誤評卷人得分五、實驗題(共3題，共30分)26、I：“CTAB法”和“SDS法”是提取DNA的常用方法，CTAB提取液含有CTAB、EDTA等成分，SDS提取液含SDS、EDTA等成分。CTAB能破壞膜結構，使蛋白質變性，提高DNA在提取液中的溶解度；SDS能破壞膜結構，使蛋白質變性，EDTA能螯合Mg2+、Mn2+；抑制DNA酶的活性。某科研小組為了尋找提取臘梅DNA的優良方法，比較了兩種提取DNA的方法，主要操作如下：

實驗測定結果如下（表中OD260反映溶液中核酸的濃度；OD280反映溶液中蛋白質的濃度。理論上，純DNA溶液的OD260/OD280為1.8，純RNA溶液的OD260/OD280為2.0）。

。CTABSDSOD260OD280OD260/OD28OD260OD280OD260/OD280.0030.0181.8330.0060.0051.200請回答下列問題。

（1）與常溫下研磨相比，液氮中研磨的優點是_______；CTAB法和SDS法提取液中都加入EDTA的目的是_______。

（2）氯仿一異戊醇密度均大于水且不溶于水，DNA不溶于氯仿一異戊醇，蛋白質等雜質可溶于氯仿一異戊醇，實驗過程中加入氯仿一異戊醇離心后，應?、賍_____加異丙醇（異丙醇與水互溶）并離心進行純化，利用異丙醇溶液純化DNA的原理是________。

（3）兩種方法中，________法提取的DNA較多，其可能原因是_______。

II：某研究組對玉米開展了組織培養及相關研究；A；B、C、D表示以親本植物為材料進行的四種人工繁殖過程，請據圖回答下列問題：

（1）植物組織培養過程中，外植體需要進行消毒處理。利用圖中的部分葉片進行植物組織培養時，需將其先用________消毒30s后；用無菌水清洗2-3次，再用次氯酸鈉處理30min后，立即用無菌水清洗2-3次。

（2）2，4-D常用于玉米愈傷組織的誘導，對形態的發生有一定的抑制作用。為促進愈傷組織再分化，在配制分化培養基時需____（填“升高”“保持”或“降低）2，4-D的濃度。當玉米愈傷組織在只含有細胞分裂素的培養基上培養時，出現具有分生能力的綠色芽點，但要繼續出芽，通常在培養基中添加____________；以促進苗形成。

（3）研究中用顯微鏡可以觀察到的現象是_______（填下列序號）。

①綠色芽點細胞排列松散②剛融合的雜交細胞發生質壁分離。

③胚狀體細胞中有葉綠體④分化的愈傷組織的各細胞的形態大小一致27、某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機化合物A。研究人員用化合物A；磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養基；成功篩選到能高效降解化合物A的細菌（目的菌）。實驗的主要步驟如圖所示。請分析回答下列問題。

（1）培養基中加入化合物A的目的是__________，這種培養基屬于__________培養基。

（2）“目的菌”生長所需的氮源和碳源是來自培養基中的__________。實驗需要振蕩培養，由此推測“目的菌”呼吸作用的類型是__________。

（3）在上述實驗操作過程中，獲得純凈“目的菌”的關鍵是__________。

（4）轉為固體培養基時，常采用平板劃線的方法進行接種，此過程中所用的接種工具是__________，操作時采用__________滅菌的方法。

（5）實驗結束后，使用過的培養基應該進行滅菌處理后才能倒掉，這樣做的目的是____________________。

（6）某同學計劃統計污水池中“目的菌”的總數，他選用104、105、106倍稀釋液進行平板劃線，每種稀釋液都設置了3個培養皿。從設計實驗的角度看，還應設置的一組對照實驗是__________，此對照實驗的目的是____________________。28、下圖是某同學設計的傳統發酵裝置示意圖。比較傳統發酵技術與現代發酵工程；回答下列問題：

(1)傳統發酵釀酒與現代工業發酵釀酒的原理是______。請設計簡單的實驗驗證發酵過程中產生了酒精（不考慮發酵液中葡萄糖的影響），寫出實驗思路并預期實驗結果與結論______。

(2)傳統發酵技術一般以天然存在的______發酵，品質不一，現代工業發酵一般為單一菌種發酵，品質較高。自制的果酒并非商品意義上的產品，在實際生產中還需要經過______裝瓶等過程才能獲得成品酒。

(3)若要測定發酵罐中酵母菌的種群密度，取10mL發酵液稀釋1000倍，利用25×16的血細胞計數板，觀察并統計到中方格中的酵母菌平均數為9個，則每毫升發酵液中酵母菌數量約是______個。

(4)利用上圖中裝置釀酒與釀醋時，操作上的最主要的區別是______。評卷人得分六、綜合題(共3題，共9分)29、三氯生是一種廣譜抑菌物質；可用于基因工程中篩選含目的基因的受體菌。某科研團隊通過先篩選出一種對三氯生抗性較強的重組質粒(如圖1)，再將可以受溫度調控的基因插入該質粒上，構建了溫度調控表達質粒。請回答下列問題：

(1)利用從細菌中提取的DNA通過PCR技術獲取fabV-A基因(或fabV-B基因)時，至少需經過________次擴增可獲得8個雙鏈等長的目的基因。實驗操作時，微量離心管中需加入的物質有：模板、引物、原料、________________。下圖2為PCR產物的電泳結果，操作較理想的泳道有________條。

(2)圖1中，步驟Ⅰ需要的工具酶是________________；步驟Ⅱ常用的方法是用Ca2＋處理使細菌成為________________；為達到步驟Ⅲ預期的篩選目的，所用物質X最可能為________。

(3)為獲得一種增強大腸桿菌對三氯生的抵抗作用效果較好的重組質粒，將含有不同質粒的大腸桿菌分別接種到相應培養基中。培養一段時間后，結果如圖3，則適宜選作構建溫度調控表達質粒的是________。

(4)科研工作者對上述選出的質粒進行改造，獲得了圖4所示質粒。其中S1和S2是啟動子，P1和P2是終止子。H基因在高溫下會抑制S1，L基因在低溫下會抑制S2。

①如果將lacZ基因和GFP(綠色熒光蛋白)基因插入圖4質粒中，且使得低溫下只表達GFP基因，高溫下只表達lacZ基因，則lacZ基因插在________之間，而GFP基因的插入位置及注意點是________________。

②若以大腸桿菌為受體細胞，篩選上述①中插入GFP基因成功的受體細胞的依據是：大腸桿菌能在含________的培養基中生長，且__________________。30、中科院動物研究所通過基因工程技術向豬的基因組內插入一個解偶聯蛋白基因（UCP）；經過基因改造的豬瘦肉率高；脂肪少、抗寒能力強。下圖是基因改造過程中涉及的相關限制酶及酶切位點。請據圖回答下列問題：

(1)實施基因工程的核心步驟是_____。

(2)為避免出現質粒和目的基因自身環化，可用圖中_____兩種限制酶同時切割質粒和UCP1基因。為了獲取重組質粒，除了使用限制酶外，還需使用_____。

(3)重組質粒上的_____是RNA聚合酶識別和結合的部位；以驅動解偶聯蛋白基因（UCPI）轉錄。

(4)圖中的抗生素抗性基因的作用是作為_____基因；以便于篩選。

(5)檢測轉基因生物的DNA是否插入了解偶聯蛋白基因（UCPI），常用的檢測方法是_____。31、DDX5基因在細胞周期調控、腫瘤發生等方面發揮重要作用。研究人員運用CRISPR-Cas9基因編輯技術對口蹄疫病毒易感的PK-15細胞株中的DDX5基因進行敲除，為后續研究DDX5基因在病毒感染中的作用提供基礎。請據圖回答下列問題。

(1)圖1中，Ori是_______（酶）首先結合的核苷酸序列。構建CRISPR-Cas9表達載體時使用的工具酶主要有______。結合對圖2中CRISPR-Cas9技術原理的理解，圖1表達載體中需要插入兩種sgRNA基因，原因是_____。

(2)研究中先將CRISPR-Cas9表達載體導入大腸桿菌DH5a，再將菌液利用________法接種到加有________的細菌培養基上，待菌落長成后，直接挑取菌落加入到PCR反應系統中進行基因鑒定。PCR過程中不需要先提取細菌DNA的原因是______。

(3)研究中采用培養轉化的大腸桿菌對CRISPR-Cas9表達載體進行擴增。與PCR相比，利用大腸桿菌進行目的基因擴增的優點有________、____________。

(4)取轉化的PK15細胞懸液進行有限稀釋，再接種到6孔培莽板上，一段時間后對各孔內的細胞株進行DDX5蛋白檢測，結果如圖（其中B-actin是真核細胞骨架蛋白）。對細胞懸液有限稀釋法的目的是________，細胞培養時CO2培養箱中充入的氣體應是_______。根據檢測結果，敲除DDX5基因的細

胞株編號有___________。

參考答案一、選擇題(共6題，共12分)1、D【分析】【分析】

通過與分子量標記比較可知單用EcoRI處理后產生了4kb和6kb兩條帶；而利用EcoRI和NotI雙酶切時產生了6kb、3kb、1kb三條帶，即4kb的片段進一步被NotI酶切為3kb和1kb的片段，因此DNA含有一個NotI酶切位點，因為用NotI處理只產生了一個10kb的條帶，所以該分子必須是環狀的，長度一定是10kb。據此答題。

【詳解】

AB、單用EcoRI處理和利用EcoRI和NotI雙酶切時產生的結果不同，說明DNA含有NotI酶切位點，因為用NotI處理只產生了一個10kb的條帶，所以該分子必須是環狀的，且長度一定是10kb；A正確；B正確；

C、因為用NotI處理只產生了一個10kb的條帶，說明該環狀DNA上含有一個NotI切割位點，單用EcoRI處理后產生了4kb和6kb兩條帶；說明該環狀DNA上含有2個EcoRI切割位點，C正確：

D、用EcoRI處理后產生的4kb的片段，進一步被NotI酶切為3kb和1kb的片段，可以得知NotI切點與EcoRI切點的最短距離為1kb，最大距離為3kb；D錯誤。

故選D。

【點睛】2、A【分析】【分析】

基因工程技術的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取；利用PCR技術擴增和人工合成；（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟；基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等；（3）將目的基因導入受體細胞：根據受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因導入植物細胞的方法有農桿菌轉化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因導入微生物細胞的方法是感受態細胞法；（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質--抗原-抗體雜交技術。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

A；提取矮牽牛藍色花的mRNA；逆轉錄得到cDNA，然后擴增，可獲得大量的基因B，A正確；

B；基因文庫中保存的是各基因片段；從基因文庫中獲取基因B時，不需要使用DNA連接酶，B錯誤；

C；目的基因與質粒連接用的是DNA連接酶；而DNA聚合酶是在DNA復制中用到的酶，C錯誤；

D；將目的基因導入植物細胞時；常采用農桿菌轉化法，即將基因B先導入農桿菌，然后感染并轉入玫瑰細胞，D錯誤。

故選A。

【點睛】3、A【分析】【分析】

胚胎干細胞是早期胚胎（原腸胚期之前）或原始性腺中分離出來的一類細胞；它具有體外培養無限增殖；自我更新和多向分化的特性。

【詳解】

A；胚胎干細胞在形態上有體積小、細胞核大、核仁明顯的特點；A錯誤；

B；胚胎干細胞可以從早期胚胎或原始性腺中分離獲??；B正確；

C；胚胎干細胞具有發育的全能性；C正確；

D；胚胎干細胞是在體外條件下研究細胞分化的理想材料；是研究細胞凋亡的機理的理想材料，D正確；

故選A。4、B【分析】【分析】

聚合酶鏈式反應（PCR）是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術；它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點是能將微量的DNA大幅增加。

【詳解】

A、引物與模板的3，端結合；由圖PCR1的產物可知，PCR1所用引物應為引物A和B，A正確；

B；由圖可知；PCR1和2均以原始DNA為模板，PCR3以PCR1和2的產物為模板，PCR4以PCR3產物為模板，B錯誤；

C；由圖可知；兩條鏈互為模板和引物，故PCR3無需額外加入引物，C正確；

D；PCR4的作用是大量擴增突變基因；得到大量的新的蛋白A基因，D正確。

故選B。5、D【分析】【分析】

動物細胞培養需要的條件：（1）充足的營養供給--微量元素、無機鹽、糖類、氨基酸、促生長因子、血清等。（2）適宜的溫度：36.5℃±0.5℃；適宜的pH：7.2～7.4。（3）無菌、無毒的環境：培養液應進行無菌處理。通常還要在培養液中添加一定量的抗生素，以防培養過程中的污染。此外，應定期更換培養液，防止代謝產物積累對細胞自身造成危害。（4）氣體環境：95%空氣+5%CO2。O2是細胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養液的pH。

【詳解】

A；CHO細胞不是新冠病毒的宿主細胞；中國倉鼠卵巢（CHO）細胞是基因工程的受體細胞，A錯誤；

B；新冠病毒為RNA病毒；不能直接與CHO中的DNA重組，B錯誤；

C；體外培養重組CHO細胞時需添加適量的抗生素；其目的是防止雜菌污染，C錯誤；

D；可用抗原-抗體雜交技術檢測目的基因是否成功表達出蛋白質；D正確。

故選D。6、B【分析】【分析】

基因表達載體的構建〈即目的基因與運載體結合）是實施基因工程的第二步；也是基因工程的核心。其構建目的是使目的基因能在受體細胞中穩定存在，并且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發揮作用。

【詳解】

A；首先用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運載體；再用DNA連接酶連接目的基因和運載體形成重組DNA分子，A正確；

B；終止子位于基因的下游；作用是使轉錄在相應的地方停止，不是使翻譯在所需要的地方停止下來，B錯誤；

C；基因表達載體的構建目的是使目的基因能在受體細胞中穩定存在；并且可以遺傳給下一代，C正確；

D；抗生素抗性基因作為標記基因；標記基因便于目的基因的鑒定和篩選，可檢測受體細胞中是否導入了目的基因，D正確。

故選B。二、多選題(共8題，共16分)7、A:B【分析】【分析】

1；試管嬰兒技術是指通過人工操作使卵子和精子在體外條件下成熟和受精；并通過培養發育為早期胚胎后，再經移植后產生后代的技術。

2；設計試管嬰兒技術是通過體外受精獲得許多胚胎；然后從中選擇符合要求的胚胎，再經移植后產生后代的技術。

【詳解】

A；“設計試管嬰兒”利用體外受精、胚胎移植、植入前胚胎遺傳學診斷技術等；A正確；

B；“設計試管嬰兒”與“試管嬰兒”均利用了體外受精技術；均為有性生殖，B正確；

C；“設計試管嬰兒”與“試管嬰兒”都要進行胚胎選擇；但二者選擇的目的不同，C錯誤；

D；體外受精獲得許多胚胎是“設計試管嬰兒”的第一步；D錯誤。

故選AB。

【點睛】8、A:C:D【分析】【分析】

酵母菌是單細胞的真核生物；屬于真菌，代謝類型是兼性厭氧型。在氧氣充足時，酵母菌進行有氧呼吸，將葡萄糖分解為二氧化碳和水；在無氧條件下，進行無氧呼吸產生酒精和二氧化碳。

【詳解】

A；利用酵母菌發酵的方式制作葡萄酒時；酵母菌進行無氧呼吸，葡萄糖在酵母菌細胞質基質內被分解成丙酮酸，A錯誤；

B；酵母菌繁殖需要空氣；在完全隔絕空氣的情況下，酵母菌繁殖幾代就停止了，要維持酵母菌長時間發酵，必須供給一定的氧氣，故制作葡萄酒時酵母菌先在有氧條件下大量增殖，B正確；

C、酵母菌發酵的后期，由于產生的CO2和其他代謝產物的積累；發酵液呈酸性，C錯誤；

D；酵母菌發酵產生的酒精會對酵母菌的生長產生抑制作用；D錯誤。

故選ACD。9、B:C:D【分析】【分析】

1；胚胎干細胞具有胚胎細胞的特性；在形態上表現為體積小，細胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發育的全能性，可分化為成年動物體內任何一種組織細胞。另外，在體外培養的條件下，可以增殖而不發生分化，可進行冷凍保存，也可進行遺傳改造。

2；識圖分析可知；圖中①為早期胚胎的囊胚階段，②為胚胎干細胞在體外培養的條件下，可以增殖而不發生分化，如在飼養層細胞上培養，③表示在胚胎干細胞體外誘導，分裂、分化形成各種組織和器官，培育出各種人造組織器官的過程。

【詳解】

A.圖中③過程為干細胞的誘導分化；通過該過程可定向培育人造組織器官，用于器官移植，解決供體器官不足和移植后免疫排斥的問題，A正確；

B.圖中途徑②沒有發生細胞分化；所以研究細胞分化和細胞凋亡的機理可選擇圖中③途徑，B錯誤；

C.細胞培養過程中，5%CO2的主要作用是調節培養液的pH；C錯誤；

D.②過程胚胎干細胞只分裂而不分化的培養；可在飼養層細胞上進行，飼養層細胞可作為干細胞分裂；增殖的營養細胞，也可在添加抑制因子的培養液中培養，使干細胞只分裂而不分化，D錯誤。

故選BCD。10、A:B【分析】【分析】

發酵工程是指采用現代工程技術手段；利用微生物的某些特定功能，為人類生產有用的產品，或直接把微生物應用于工業生產過程的一種技術。發酵工程的內容包括菌種選育；培養基的配制、滅菌、種子擴大培養和接種、發酵過程和產品的分離提純（生物分離工程）等方面。

【詳解】

A；檸檬酸是一種廣泛應用的食品酸度調節劑；可以通過黑曲霉發酵制得，A正確；

B；可以將乙型肝炎病毒的抗原基因轉入酵母菌通過發酵工程制備乙型肝炎疫苗；B正確；

C；利用發酵工程生產的白僵菌可以用來防治80多種農林害蟲；C錯誤；

D；一種放線菌通過發酵工程產生的井岡霉素可以用來防治水稻枯紋??；D錯誤。

故選AB。

【點睛】11、A:B【分析】【分析】

單克隆抗體的制備。

（1）制備產生特異性抗體的B淋巴細胞：向免疫小鼠體內注射特定的抗原；然后從小鼠脾內獲得相應的B淋巴細胞。

（2）獲得雜交瘤細胞。①將鼠的骨髓瘤細胞與脾細胞中形成的B淋巴細胞融合。②用特定的選擇培養基篩選出雜交瘤細胞；該雜種細胞既能夠增殖又能產生抗體。

（3）克隆化培養和抗體檢測。

（4）將雜交瘤細胞在體外培養或注射到小鼠腹腔內增殖。

（5）提取單克隆抗體：從細胞培養液或小鼠的腹水中提取。

【詳解】

A；單克隆抗體制備過程中；需要給小白鼠注射腫瘤細胞表面抗原，刺激小鼠產生體液免疫，才能得到能產生特定抗體的B淋巴細胞，A正確；

B；制備單克隆抗體的過程中至少要經過兩次原理和目的均不同的篩選過程；第一次篩選雜交瘤細胞，第二次篩選能產生特異性抗體的雜交瘤細胞，B正確；

C；生物導彈綜合利用了單克隆抗體的定向制導作用和堿性磷酸酶的特異性殺傷能力；C錯誤；

D；根據題干信息“通過活化多柔比星使其對DNA造成損傷；進而抑制以DNA為模板進行的生理活動”，說明多柔比星還可以抑制細胞的轉錄過程，而不增殖的細胞也具有轉錄過程，D錯誤。

故選AB。12、A:C【分析】據圖分析；①過程表示獲取B淋巴細胞和骨髓瘤細胞；②過程促進細胞融合，采用離心；電刺激、聚乙二醇、滅活病毒等試劑誘導，篩選出雜交瘤細胞；④過程通過專一抗體檢驗陽性，篩選出能夠產生特異性抗體的細胞群；⑥過程表示動物細胞培養。

【詳解】

A；B淋巴細胞是從小鼠的脾臟中提取的；骨髓瘤細胞不是，A錯誤；

B；④中篩選能產生特定抗體的雜交瘤細胞；可以通過檢測抗原、抗體反應，如果有反應說明表達了抗體，B正確；

C；④中的篩選是為了獲得能產生一種抗體的雜交瘤細胞；C錯誤；

D；⑤可以無限增殖；也能產生特異性抗體，D正確。

故選AC。13、A:B:C【分析】【分析】

限制酶能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列；并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，形成黏性末端和平末端兩種。

【詳解】

A；重組質粒pM5-SPN-leudh中除圖中標注外；還應該具有終止子，復制原點等結構，A正確；

B；NdeI和BamHI兩種酶切割形成的黏性末端不同；構建重組質粒用NdeI和BamHI兩種酶切有助于目的基因正確插入，B正確；

C；KmR和A_pR為標記基因；圖中KmR和A_pR存在于質粒中的作用是便于重組DNA分子的篩選，C正確；

D；限制酶和DNA連接酶的作用部位為磷酸二酯鍵；D錯誤。

故選ABC。14、A:B:C【分析】【分析】

1；DNA粗提取和鑒定的原理：（1）DNA的溶解性：DNA和蛋白質等其他成分在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液；但細胞中的某些蛋白質溶于酒精；DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性。（2）DNA的鑒定：在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍色。

2；植物組織培養依據的原理為植物體細胞的全能性；即已經分化的細胞仍然具有發育成完整植株的潛能；培養過程的順序是離體植物器官、組織或細胞（外植體）脫分化形成愈傷組織，再分化形成根、芽等器官進而形成新的植物體。

【詳解】

A；DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同；當NaCl溶液的濃度為0.14mol/L時，DNA溶解度最小，因此改變NaCl溶液的濃度既能使DNA溶解也能使其析出，A錯誤；

B；細胞代謝產物的工廠化生產利用的是細胞培養技術；原理是細胞增殖，未體現細胞的全能性，B錯誤；

C；相同時加酶洗衣粉洗滌效果好于普通洗衣粉酶的催化作用需適宜的pH值；pH不適宜時，加酶洗衣粉洗滌效果不一定好于普通洗衣粉，C錯誤；

D；精子與卵子相遇后；會發生頂體反應，釋放頂體酶，透明帶反應和卵黃膜封閉作用是阻止其他精子入卵的兩道屏障，其中透明帶反應是防止多精入卵的第一道屏障，D正確。

故選ABC。三、填空題(共7題，共14分)15、略

【解析】①.胚胎細胞②.體細胞16、略

【解析】①.活菌②.培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌17、略

【解析】①.接種②.平板劃線法③.稀釋涂布平板法18、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】受體細胞19、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】2種引物DNA或RNA20—3020、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】3，5，DNA聚合酶不能從頭開始合成，而只能從3，端延伸DNA子鏈的5，端向3，端21、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】莖尖極少或沒有）胚狀體人工薄膜不受季節的限制人工種皮；胚狀體和人工胚乳。

（2）四、判斷題(共4題，共28分)22、B【分析】【詳解】

從牛卵巢中采集到卵母細胞后；接著對其進行的操作是先在體外培養到減數第二次分裂中期，再通過顯微操作去除卵母細胞中的細胞核，獲得去核的卵母細胞，再經核移植獲得重組的受體細胞。

故該表述錯誤。23、B【分析】【詳解】

基因工程技術可以使建立移植器官工廠的設想成為現實；說明并未開始實際應用。

故錯誤。24、B【分析】【詳解】

要對蛋白質的結構進行設計改造，最終必須通過改造基因中的堿基序列來完成，因為基因能指導蛋白質的生物合成，故說法錯誤。25、A【分析】【詳解】

中國政府對于“克隆人”的態度是禁止生殖性克隆人，積極支持制定《禁止生殖性克隆人國際公約》，堅決反對克隆人，不允許進行任何生殖性克隆人實驗。故該說法正確。五、實驗題(共3題，共30分)26、略

【分析】【分析】

I：核酸是生物有機體中的重要成分；在生物體中核酸常與蛋白質結合在一起，以核蛋白的形式存在。核酸分為脫氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）兩大類，在真核細胞中，前者主要存在于細胞核中，后者主要存在于細胞質及核仁里。在制備核酸時，通過研磨破壞細胞壁和細胞膜，使核蛋白被釋放出來。提取DNA有有多種方法，“CTAB法”和“SDS法”是提取DNA的常用方法，二者既有區別又有聯系。

II：題圖分析：A表示利用生殖細胞得到單倍體植株；B表示通過胚狀體進行無性繁殖；其中①為脫分化；再分化；C為植物組織培養；D表示植物體細胞雜交，其中②是誘導原生質體融合。

【詳解】

I：（1）液氮溫度低，液氮中研磨會研磨得更充分，在液氮中研磨DNA酶活性低，降低DNA的分解；EDTA能螯合Mg2+、Mn2+；抑制DNA酶的活性，減少DNA水解，提高DNA的完整性和總量。

（2）氯仿-異戊醇密度均大于水且不溶于水；DNA不溶于氯仿-異戊醇，離心后，氯仿-異戊醇位于試管的底部，DNA溶于上清液中，所以離心后應該取上清液；含DNA的上清液中加異丙醇離心后取的是沉淀物，說明DNA不溶于異丙醇，而雜質能溶于異丙醇。

（3）從表中數據可知；CTAB法提取的DNA的OD260是0.033，而SDS法提取的DNA的OD260是0.006，0.033＞0.006，所以CTAB法提取的DNA較多，根據CTAB和SDS兩種試劑作用的區別，可知CTAB提高了DNA在提取液中的溶解度，從而可提取出更多的DNA。

II：（1）植物組織培養過程中；整個過程應嚴格無菌無毒，利用圖中的部分葉片進行植物組織培養時，需將其先用體積分數為70%的酒精消毒30s后，用無菌水清洗2-3次，再用次氯酸鈉處理30min后，立即用無菌水清洗2-3次。

（2）為促進愈傷組織再分化；在配制分化培養基時需降低2，4-D的濃度。當玉米愈傷組織在只含有細胞分裂素的培養基上培養時，出現具有分生能力的綠色芽點，但要繼續出芽，通常在培養基中添加適量的生長素，以促進苗形成。

（3）①芽是植物體中具有分生能力的組織；細胞排列緊密，①錯誤；

②剛融合的植物體細胞沒有成熟的大液泡；無法構成滲透系統，不能發生質壁分離現象，②錯誤；

③胚狀體細胞出現具有分生能力的綠色芽；因此其細胞內有葉綠體，③正確；

④分化的愈傷組織的結果形成了具有根和芽的胚狀體；細胞的形態發生了變化，④錯誤。

故選③。

【點睛】

本題主要考查DNA提取原理、操作過程及實驗結果的分析以及植物組織培養技術，意在考查學生讀圖能力和分析應用能力?！窘馕觥垦心コ浞?，低溫抑制酶活性抑制DNA酶的活性，減少DNA水解，提高DNA的完整性和總量上清液DNA不溶于異丙醇，而雜質能溶于異丙醇CTABCTAB提高了DNA在提取液中的溶解度，從而能提取出更多的DNA（體積分數為70-75%）酒精降低（適量的）生長素③27、略

【分析】【分析】

微生物的培養；培養基的成分必須含有碳源；氮源、水和無機鹽。獲取純凈微生物的關鍵是防止外來雜菌入侵。實驗室中目的菌株的篩選的原理：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養、溫度、pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。

【詳解】

（1）本實驗是分離出降解的有機化合物A的菌種；所以培養基中加入化合物A的目的是篩選降解的有機化合物A的菌種，這種培養基屬于選擇培養基。

（2）分析培養基的配方可知；該培養基由化合物A；磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制而成，其他成分中為體現出提供碳源和氮源，因此化合物A為目的菌提供了碳源和氮源；在培養過程中應該振蕩培養，增加培養液中的溶氧量，故目的菌是需氧微生物，呼吸作用的類型是有氧呼吸。

（3）獲得純凈“目的菌”的關鍵是無菌技術；防止外來雜菌入侵。

（4）平板劃線操作的工具是接種環；對于接種環的滅菌方法應該是灼燒滅菌。

（5））實驗結束后；使用過的培養基應該進行滅菌處理后，才能倒掉，以殺死培養基上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。

（6）實驗設計過程應遵循對照原則；該實驗還應增設一組不接種的空白培養基作為對照，以證明培養基制備是否被雜菌污染，檢驗培養基是否滅菌合格。

【點睛】

本題考查微生物的分離和培養，要求考生識記無菌技術操作方法及接種微生物接種常用的兩種方法，能結合所學的知識準確答題?！窘馕觥亢Y選目的菌選擇化合物A有氧呼吸防止外來雜菌入侵接種環灼燒防止造成環境污染不接種的空白培養基檢驗培養基是否滅菌合格28、略

【分析】【分析】

參與果酒的制作的微生物主要是酵母菌；其新陳代謝的類型為異養兼性厭氧型，較適宜的發酵溫度為18~30℃。在無氧的環境中酵母菌把糖類分解為酒精和二氧化碳。在果酒制作過程中檢測發酵液是否含有酒精，取樣后滴加適量酸性重鉻酸鉀溶液并振蕩，若觀察到溶液顏色的變化是橙色變成灰綠色，則說明發酵液中含有酒精。

【詳解】

（1）傳統發酵釀酒與現代工業發酵釀酒都是利用了酵母菌的無氧呼吸。酵母菌屬于真核生物；其代謝類型是兼性厭氧型，在有氧條件下進行大量增殖，在無氧條件下將葡萄糖分解為酒精。

橙色的重鉻酸鉀溶液在酸性條件下與乙醇（即酒精）發生化學反應；變成灰綠色，該實驗目的是驗證發酵過程中產生了酒精，因此實驗自變量是是否加入發酵液，因變量為溶液顏色變化。對照組中應加入酒精作為陽性對照。實驗過程中應遵循等量原則；單一變量原則等，因此實驗思路是：取兩支試管分別標號A、B，A試管中各加入2ml發酵液，作為實驗組，B試管中各加入2ml酒精，作為對照組，兩試管中都加入適量酸性重鉻酸鉀，振蕩后觀察試管中顏色變化，AB兩試管都變為灰綠色，即可驗證發酵過程中產生了酒精。

（2）傳統發酵技術一般不進行嚴格滅菌操作；因此其發酵菌種為天然的混合菌種?，F代工業發酵釀制果酒不同于自制果酒，需要經過沉淀；過濾、滅菌、裝瓶等過程才能獲得成品酒。

（3）25×16型的血細胞計數板計算公式：酵母細胞個數/1mL=1個中方格中酵母菌數×25×10000×稀釋倍數，因此該實驗中每毫升發酵液中酵母菌數量=9×25×10000×1000=2.25×109。

（4）釀酒利用酵母菌的無氧呼吸，需要關閉充氣口，釀醋利用醋酸菌，醋酸菌是需氧型微生物，因此需向充氣孔中充入無菌空氣?！窘馕觥?1)酵母菌是兼性厭氧微生物；在無氧條件下將葡萄糖分解為酒精實驗思路：取兩支試管分別標號A；B，向A試管中各加入2ml發酵液，向B試管中各加入2ml酒精，向AB兩試管各滴加0．5ml溶有0．1g重鉻酸鉀的濃硫酸溶液（或酸性重鉻酸鉀），并輕輕震蕩，觀察試管中溶液顏色變化。

(2)混合菌種沉淀；過濾、滅菌。

(3)2.25×109

(4)釀酒時需關閉充氣口，釀醋時則需向充氣孔中充入無菌空氣六、綜合題(共3題，共9分)29、略

【分析】【分析】

1；基因工程又叫DNA重組技術；是指按照人們的意愿，進行嚴格的設計，并通過體外DNA重組和轉基因等技術，賦予生物以新的遺傳特性，從而創造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產品?；蚬こ痰幕静僮鞑襟E主要包括四步：①目的基因的獲取，②基因表達載體的構建，③將目的基因導入受體細胞，④目的基因的檢測與鑒定。

2；PCR全稱為聚合酶鏈式反應；PCR技術是一項在生物體外復制特定DNA的核酸合成技術，原理是DNA復制，前提條件是要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物，條件還包括模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩定DNA聚合酶（Taq酶）。具體過程為：

（1）變性：當溫度上升到90℃以上時；氫鍵斷裂，雙鏈DNA解旋為單鏈。

（2）復性：當溫度降低到50℃左右是；兩種引物通過堿基互補配對與兩條單鏈DNA結合。

（3）延伸：溫度上升到72℃左右；溶液中的四種脫氧核苷酸，在DNA聚合酶的作用下，根據堿基互補配對原則合成新的DNA鏈。

3；據圖1分析；圖中過程Ⅰ表示構建基因表達載體，是基因工程的核心步驟；過程Ⅱ表示將目的基因導入受體細胞；過程Ⅲ表示篩選含目的基因的受體菌的過程。

【詳解】

（1）結合PCR技術過程分析；其原理是雙鏈DNA復制，且Taq酶不能從頭開始合成DNA，只能從引物的3′端延伸DNA鏈，則第3次擴增才會出現2個雙鏈等長的目的基因，第4次擴增才會出現8個雙鏈等長的目的基因；實驗操作時，微量離心管中需加入的物質有：模板；引物、原料、緩沖液、Taq酶；結合圖2分析可知，操作比較理想的泳道有4條。

（2）根據以上分析已知；圖1中過程Ⅰ表示構建基因表達載體，該過程需要限制酶和DNA連接酶的催化；步驟Ⅱ表示將目的基因導入受體細胞，若受體細胞為細菌（微生物），可以用鈣離子處理使之成為感受態；根據題干信息分析，圖1中要先篩選出一種對三氯生抗性較強的重組質粒，因此步驟Ⅲ中所用的物質X應該是三氯生。

（3）根據題中信息及曲線圖分析可知；在培養12h之后，pEA組（含三氯生）與pE2組（無三氯生）菌液濃度相差不大，而明顯比pE2組（含三氯生）菌液濃度高，說明pEA組（含三氯生）對三氯生的抵抗作用效果最好，因此要“獲得一種增強大腸桿菌對三氯生的抵抗作用效果較好的重組質粒”，所以適宜選作構建溫度調控表達質粒的是pEA。

（4）①根據題意和圖4分析，已知S1和S2是啟動子，P1和P2是終止子，且H基因在高溫下會抑制S1，L基因在低溫下會抑制S2，現要低溫下只表達GFP基因，高溫下只表達lacZ基因，則lacZ基因應該插在啟動子S2和終止子P2之間，GFP基因應該插在啟動子S1和終止子P1之間；且不能破壞H基因和L基因。

②上述①中插入GFP基因成功的受體細胞（大腸桿菌）；則該大腸桿菌在含三氯生的培養基中可以生長，且低溫下GFP基因可以表達，即有綠色熒光，而高溫下GFP基因表達被抑制，即無綠色熒光。

【點睛】

本題考查基因工程有關知識，要求考生能夠掌握基因工程的操作步驟，識記基因工程的操作工具，理解PCR技術的