412024-02-01發(fā)布I 2 3 3 5 8 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利物疫病預(yù)防控制中心、修武縣云臺(tái)山鎮(zhèn)綜合行政執(zhí)法郭育培、劉影、宋丹、劉禮杰、趙美雪、張利平、趙勝杰、冉曉龍、曹俊偉、1豬急性腹瀉綜合征診斷技術(shù)4縮略語(yǔ)SADS：豬急性腹瀉綜合征（SwineacuteDiarrhoeaSynSADS-CoV：豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒（SwineacuteDiarrhoeaSyndromeCoronaRT-PCR：反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Reversetranscription-polymerasechainreacFQ-PCR：熒光-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（FluorescenceQuantitative-polymerasechainreacEDTA：乙二胺四乙酸（EthylenediaminPBS：磷酸鹽緩沖液（PhosphatebufferedsalDEPC：焦碳酸二乙酯（Diethypyrocarbona5.1流行病學(xué)率相對(duì)較低；成年豬感染后多數(shù)只出現(xiàn)輕度腹瀉，2發(fā)病仔豬出現(xiàn)急性腹瀉、嘔吐，脫水、體重迅速下降或死亡；成年豬感染出現(xiàn)25.3病理變化5.4結(jié)果判定易感動(dòng)物符合5.1且出現(xiàn)5.2臨床癥狀、5.3病理），6.2.2個(gè)人防護(hù)用具：防護(hù)服、防護(hù)鏡、6.2.3采樣記錄用品：采樣單、記號(hào)筆、防水無(wú)菌采集疑似SADS-CoV感染腹瀉豬急性期的新鮮糞便（1.0g～2.0g）或小腸中段（1.0cm~0.22μm微孔濾器過(guò)濾，分裝20℃保存?zhèn)溆谩Ｈ缧栝L(zhǎng)期保存，應(yīng)置于-80℃冰箱。3置于2℃~8℃冰箱中可保存一周，保存時(shí)間超過(guò)一周以上應(yīng)置于-20℃以下冷凍保存。7.2.6冰箱（2℃~8℃、－20℃、－80℃等不同溫度）。Vero細(xì)胞系。48.2.5單道微量移液器（0.1μL～0.25μL；0.5μL～采用核酸提取試劑盒或全自動(dòng)核酸提取儀提取各類樣本中的病毒核酸。如在2h內(nèi)檢測(cè)可將提取的M-MLV5×Reactionbuffer(含Mg2+)44M-MLV（200U/μL）152ExTaqDNA聚合酶(5U/μL)分子量標(biāo)準(zhǔn)加到凝膠孔中。5V/cm恒壓下電泳369.2儀器設(shè)備5’-GCATTCGCCAGCGTTTTT-3’；TaqMan探針S9.4檢測(cè)程序2ExTaqDNA聚合酶(5U/μL)9.5試驗(yàn)結(jié)果成立條件79.6結(jié)果判定9.6.3當(dāng)35＜Ct值＜38且出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線，判為疑似。對(duì)疑似樣品，模任一項(xiàng)判為核酸陽(yáng)性的，可判定為豬急性腹瀉綜合征確診病8氯化鈉（NaCl）85.00g氯化鈉（NaCl）磷酸氫二鈉（Na2HPO4?12H2O）30.0gA.3細(xì)胞培養(yǎng)液DMEM培養(yǎng)液A.4細(xì)胞維持液DMEM培養(yǎng)液A.51×TAE核酸電泳緩沖液Tris堿，24.2g；冰乙酸，5.71mL；0.5mol/LEDTA(pH8.0)，10mL；加蒸餾水至1009Vero細(xì)胞培養(yǎng)物。SADS-CoVRT-PCR產(chǎn)物電泳圖及熒光PCR擴(kuò)增曲線圖B.1SADS-CoV熒光PCR