DB21MethodfordetectionofEnterococcusfaecalisinfeedingmicrobialpreparations遼寧省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：遼寧省獸藥飼料畜產(chǎn)品質(zhì)量安全本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：李欣南、武鳳嬌、韓鐫竹、高鐸、1飼用微生物制劑中糞腸球菌的檢測(cè)方法食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌h進(jìn)行定期檢查微生物污染。25.8天平：0.00g～410.005.9冰箱：2℃~8℃。5.12L形玻璃或塑料涂布棒。5.13吸管或移液器：容量為0.1試管、廣口瓶、剪子等，應(yīng)為無(wú)菌器皿。樣品采集后置于2℃~8℃環(huán)境內(nèi)冷藏保存。采樣數(shù)量和方式按在超凈工作臺(tái)中稱取試樣25g（mL），加入盛有225mL釋。用滅菌吸管吸取1:10的均勻稀釋液1mL，置于滅菌的9mL0.85%滅菌生理3培養(yǎng)后，選取典型菌落數(shù)在30個(gè)～300個(gè)之間的平板計(jì)數(shù)。典型糞腸球菌菌落呈圓形，表面光滑、隆起，菌落呈黑色或淡黑色，直徑在0.5mm～2.0mm大小的將挑選純化的菌落做革蘭氏染色（3.4）鏡檢。糞腸球菌細(xì)胞應(yīng)為球形，可順鏈的方向延長(zhǎng)，直徑0.5μm～1.0μm，單個(gè)、大多數(shù)成雙或短鏈狀排列，革蘭氏染色陽(yáng)性，無(wú)芽孢，不染色懸滴或壓滴標(biāo)本挑取純化的菌落用麥?zhǔn)媳葷醿x調(diào)節(jié)菌濃至0.5MFC。使用生化鑒定試劑盒、生化鑒定管或者微生物++++----+-42×PCRMix緩沖液112程序設(shè)定如下：①預(yù)變性：95℃5min；②變性：95℃45s；③退火：48℃45s；④延伸：72℃45s；9檢測(cè)結(jié)果9.1計(jì)算每塊板上糞腸球菌菌落數(shù)計(jì)算每塊平板上的糞腸球菌菌落數(shù)a，使用A——挑取平板上用于驗(yàn)證的菌落數(shù)；a=×100＝809.2樣品中糞腸球菌菌數(shù)的計(jì)算方法及報(bào)告），N……(2)N--------樣品中糞腸球菌菌落數(shù)；V--------平板的接種體積，單位為毫升（5d---------第一個(gè)稀釋度的稀釋因子（未經(jīng)稀釋的液體樣品的按GB/T8170執(zhí)行。將計(jì)算出的結(jié)果保留至兩位有效數(shù)字，也可將樣品的糞腸球菌菌落數(shù)記錄為6培養(yǎng)基和試劑A.1糞腸球菌培養(yǎng)基A.2哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基A.3革蘭氏染色A.3.1結(jié)晶紫染色液A.3.1.1成分7A.3.1.2制法A.3.2革蘭氏碘液A.3.2.1成分碘A.3.2.2制法將碘化鉀先進(jìn)行混合，加入蒸餾水少許，充分振搖，待完全溶解后，再加蒸餾水至30A.3.3沙黃復(fù)染液A.3.3.1成分A.3.3.2制法將涂片在火焰上固定，滴