GB/T21605—XXXX化學(xué)品急性吸入毒性試驗方法本文件規(guī)定了化學(xué)品急性吸入毒性試驗方法的規(guī)范性引用文件、術(shù)語和定義、試驗原則、試驗方法、試驗數(shù)據(jù)和報告。本文件適用于評價可吸入受試物，如氣體、揮發(fā)性物質(zhì)、氣溶膠或顆粒狀物可否經(jīng)呼吸道吸收及其急性毒性。2規(guī)范性引用文件本文件沒有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語和定義下列定義和術(shù)語適用于本文件。3.1急性吸入毒性acuteinhalationtoxicity實驗動物在短時間內(nèi)（指24h或24h之內(nèi)）一次連續(xù)吸入較高濃度的受試物（氣體、蒸汽、氣溶膠或顆粒狀物）出現(xiàn)的健康損害效應(yīng)。3.2吸入劑量inhaleddose動物單位體重所吸入受試物的量。3.3半數(shù)致死濃度midianlethalconcentration（LC50）在規(guī)定的時間內(nèi)，經(jīng)呼吸道一次連續(xù)吸入受試物后，引起實驗動物總體中半數(shù)死亡的毒物的統(tǒng)計學(xué)濃度，以單位體積空氣中受試物的質(zhì)量（mg/m3）來表示。3.4質(zhì)量中值空氣動力學(xué)直徑massmedianaerodynamicdiameter（MMAD）由空氣動力學(xué)直徑大小不一的顆粒組成的氣溶膠樣品中，小于和等于某一空氣動力學(xué)直徑的顆粒占?xì)馊苣z樣品總質(zhì)量或總重量50%時，則該氣溶膠顆粒空氣動力學(xué)直徑即為此氣溶膠樣品的質(zhì)量中值空氣動力學(xué)直徑。3.545GB/T21605—XXXX幾何標(biāo)準(zhǔn)差geometricstandarddeviation（GSD）用以描述氣溶膠顆粒粒徑范圍的無量綱數(shù)。幾何標(biāo)準(zhǔn)差越小，含相似大小的顆粒比例越高，亦即氣溶膠顆粒的均一性越好，離散度越低。通常，將幾何標(biāo)準(zhǔn)差小于或等于2的氣溶膠樣品稱為單相分散氣溶膠。3.6可吸入顆粒直徑inhalablediameter能夠通過動物的口和/或鼻吸入并沉淀在呼吸道任意部位的顆粒的空氣動力學(xué)直徑。通常將空氣動力學(xué)直徑在10μm以下的氣溶膠顆粒物稱為可吸入顆粒物。3.7劑量-反應(yīng)關(guān)系dose-responserelationship劑量與特定效應(yīng)的發(fā)生率間的關(guān)系。3.8最小致死濃度minimallethalconcentration（LC01）指一組試驗動物中，僅引起個別動物死亡的最小劑量。3.9絕對致死濃度absolutelethalconcentration（LC100）引起一組試驗動物全部死亡的最低劑量。4試驗?zāi)康脑u價可吸入受試物，如氣體、揮發(fā)性物質(zhì)、氣溶膠或顆粒物可否經(jīng)呼吸道吸收及其急性毒性，用于受試物危險性評估，并可按GHS對受試物進行毒性分類，同時還可為該物質(zhì)急性毒性強度及亞急性毒性、蓄積毒性和特殊毒性試驗選擇劑量提供依據(jù)。5試驗原則5.1在考慮根據(jù)本文件進行試驗之前，應(yīng)收集受試物相關(guān)的所有可用信息，包括已有的研究數(shù)據(jù)，如已有相關(guān)研究數(shù)據(jù)，可以不再開展新的試驗，以盡量減少動物的使用。受試物的有用信息包括受試物的特性（如純度化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)；任何體外或體內(nèi)毒性試驗結(jié)果；預(yù)期用途和人體暴露的可能性；能得到的結(jié)構(gòu)類似物的構(gòu)效關(guān)系數(shù)據(jù)和毒理學(xué)數(shù)據(jù)等。5.2應(yīng)盡可能避免在預(yù)計會導(dǎo)致嚴(yán)重疼痛和/或痛苦的濃度下測試腐蝕性和/或刺激性的受試物。受試物是否具有腐蝕性/刺激性，應(yīng)由專家綜合所有數(shù)據(jù)進行評估，并分析是否可以免除進一步的試驗。需收集的數(shù)據(jù)包括來自人和動物的數(shù)據(jù)（例如，在非腐蝕性/刺激性濃度下進行的重復(fù)劑量研究中獲得的數(shù)據(jù)）、已有的體外數(shù)據(jù)、pH值、類似物質(zhì)的信息或任何其他相關(guān)數(shù)據(jù)。如有特定的監(jiān)管需求，可以使用本文件對具有腐蝕性和/或刺激性的受試物進行測試，受試物的濃度不能引起嚴(yán)重的刺激/腐蝕性，但應(yīng)足以將濃度-反應(yīng)曲線擴展到達(dá)到監(jiān)管和科學(xué)目標(biāo)的水平。需逐步選擇受試物的濃度，并提供濃度6GB/T21605—XXXX選擇的理由。5.3本文件旨在獲取足夠的受試物的急性毒性信息，以便對其進行分類，并為一個或兩個性別提供致死性數(shù)據(jù)（例如LC50、LC01和斜率以滿足定量風(fēng)險評估的需要。本文件提供兩種試驗方法。第一種方法是傳統(tǒng)的LC50法，將幾組動物暴露于一個限定濃度（限度試驗）或按梯度設(shè)置的一系列濃度，通常持續(xù)4h。為了滿足特定的監(jiān)管目的，可能會應(yīng)用其他持續(xù)時間的暴露，但應(yīng)提供合理的理由。第二種方法是濃度-時間法（CXt將動物暴露在一個限定濃度或一系列不同濃度，而且每個濃度的暴露時間也不同。染毒結(jié)束將動物移至空氣清潔的室內(nèi)。需觀察染毒期間及終止染毒后試驗動物中毒體征與嚴(yán)重程度。死亡動物應(yīng)及時進行大體解剖，觀察期結(jié)束處死存活動物并作大體解剖和病理學(xué)檢查。瀕死動物或明顯處于痛苦中或表現(xiàn)出嚴(yán)重且持續(xù)痛苦跡象的動物應(yīng)實行安樂死，并等同于在試驗中死亡的動物。6試驗方法6.1動物種屬選擇應(yīng)使用剛成年健康的動物和實驗室常用品系。首選大鼠，如需選用其他品系需說明理由。6.2動物準(zhǔn)備雌性動物應(yīng)該是未妊娠和未生產(chǎn)的。在暴露開始時，動物周齡一般8-12周，體重差異不得超過平均體重的±20%。動物應(yīng)是隨機選擇的，并具有唯一性的標(biāo)識。動物應(yīng)至少在開始試驗前5d置于籠中以適應(yīng)實驗室條件。動物也應(yīng)該在試驗開始前適應(yīng)實驗設(shè)備一段時間以減少進入新環(huán)境引起的不適。每個濃度組需要雌雄性各5只動物。6.3飼養(yǎng)條件動物房的室溫控制在23±3℃。相對濕度30%-70%。試驗前和染毒后每個濃度組動物按性別和濃度分籠飼養(yǎng)，每籠動物數(shù)以不干擾動物個體活動及觀察反應(yīng)為宜，并盡量減少因搶食和打架造成的損失。當(dāng)動物通過僅鼻部暴露染毒時，可能需要適應(yīng)染毒裝置一段時間。鼻部暴露裝置不應(yīng)對動物造成不適當(dāng)?shù)膲毫Γ珞w溫變化或呼吸頻率的改變等。如有數(shù)據(jù)表明不引起以上改變，則不需要適應(yīng)。當(dāng)動物通過全身暴露方式染毒時，在染毒期間，為避免動物從同伴的毛發(fā)吸入受試物氣溶膠，動物應(yīng)單籠飼養(yǎng)。動物食用常規(guī)和經(jīng)認(rèn)證的飼料，自由飲水（暴露期間除外）。應(yīng)該提供人工照明，12h明/12h暗。6.4受試物6.4.1受試物的形態(tài)可以是氣體、蒸汽、氣溶膠或它們的混合物，主要取決于受試物的物理化學(xué)性質(zhì)、選定的濃度，以及在處理和使用受試物時最可能存在的物理形態(tài)。吸濕性和化學(xué)反應(yīng)性受試物應(yīng)在干燥空氣條件下進行試驗。應(yīng)注意避免造成爆炸的濃度。6.4.2在染毒時受試物須在空氣中保持一定濃度，必要時應(yīng)加入適當(dāng)?shù)馁x形劑（首選水）。賦形劑本身無毒性，不與受試物反應(yīng)并不影響受試物的吸收。依據(jù)受試物的理化性質(zhì)調(diào)試染毒裝置，包括確定受試物的氣化和配氣方法，載氣種類，氣流速度，排氣方式等。6.4.3顆粒物質(zhì)可能需要經(jīng)過機械處理以達(dá)到所需的粒徑分布，但是要注意不要分解或改變受試物。如果認(rèn)為機械處理改變了受試物的組成，應(yīng)該通過分析方法驗證受試物的組成。應(yīng)該采取足夠的預(yù)防措施避免受試物受到污染。沒有必要測試那些特意配制成不可吸入的非易碎顆粒材料。6.4.4研究中盡可能地使用一組受試物，而且其樣本應(yīng)該在能保持其純度、同質(zhì)性、穩(wěn)定性的條件下保存。在研究開始之前，應(yīng)對受試物進行表征分析，包括其純度，如果技術(shù)上可行，還應(yīng)包括已識別的污7GB/T21605—XXXX染物和雜質(zhì)的特性和數(shù)量。可以通過以下數(shù)據(jù)來證明，但不限于：質(zhì)譜或氣相色譜分析中的保留時間、相對峰面積和分子量或其他值。6.5對照動物一般不設(shè)陰性對照組。當(dāng)使用除水以外的賦形劑時，如果沒有其吸入毒性試驗的歷史數(shù)據(jù)，需加入一個賦形劑對照組。如果在已有毒性試驗中顯示賦形劑無毒，可以斷定這個賦形劑在測試濃度下是無毒的，因而可不設(shè)賦形劑對照組。6.6暴露條件監(jiān)測6.6.1暴露裝置動物應(yīng)在吸入染毒設(shè)備中進行試驗。根據(jù)受試物的物理特性和試驗?zāi)康倪x擇染毒裝置。首選的暴露方式是僅鼻部暴露，特別是在研究液體、固體氣溶膠或可凝結(jié)成為氣溶膠的蒸汽時。如有特殊目的必須采用全身暴露方式染毒，需在試驗報告中說明。采用全身暴露時，要保證染毒柜中氣流的穩(wěn)定性，試驗動物的總體積不應(yīng)超過染毒柜容積的5%。6.6.2室內(nèi)氣流染毒柜中氣流要連續(xù)監(jiān)測，至少每小時記錄一次。O2濃度不低于19%，CO2濃度不高于1%。如無法達(dá)到該標(biāo)準(zhǔn)，需說明理由，并監(jiān)測O2和CO2的濃度。6.6.3室內(nèi)溫度和相對濕度室內(nèi)溫度應(yīng)保持在22±3。C。無論是僅鼻道暴露還是全身暴露，動物呼吸區(qū)域的相對濕度應(yīng)至少監(jiān)測三次并記錄。暴露時間超過4h或小于4h時，應(yīng)每小時記錄一次。理想情況下，相對濕度應(yīng)保持在30%至70%的范圍內(nèi)，無法實現(xiàn)時需說明理由。6.6.4受試物：計算濃度應(yīng)計算并記錄吸入室中受試物的計算濃度。計算濃度是受試物的質(zhì)量除以通過暴露系統(tǒng)的空氣總體積。計算濃度不用于描述動物的暴露情況，但是計算濃度與實際濃度的比較可以指示試驗系統(tǒng)的生成效率，因此可以用來發(fā)現(xiàn)生成過程中存在的問題。6.6.5受試物：實際濃度6.6.5.1實際濃度是指吸入室動物呼吸區(qū)域受試物的濃度。實際濃度可以通過特定方法（例如直接采樣、吸附或化學(xué)反應(yīng)方法，以及后續(xù)表征分析）或非特定方法（如重量分析法）獲得。重量分析僅限于單一成分粉末氣溶膠或低揮發(fā)性液體氣溶膠，并且應(yīng)有適當(dāng)?shù)念A(yù)試驗數(shù)據(jù)支持。如有分析數(shù)據(jù)證明空氣中物質(zhì)的組成與起始物質(zhì)相似，多組分粉末氣溶膠的濃度也可以通過重量分析來確定。如無可用信息，在研究過程中可能需要定期對受試物（理想情況下是其空氣中的狀態(tài)）進行再分析。對于可能蒸發(fā)或升華的氣溶膠物質(zhì)，應(yīng)通過所選方法證明已收集所有相。研究報告中應(yīng)提供目標(biāo)濃度、計算濃度和實際濃度，但僅實際濃度用于統(tǒng)計分析以計算致死劑量。6.6.5.2應(yīng)盡可能地使受試物的實際濃度維持恒定，并根據(jù)分析方法連續(xù)和/或間歇監(jiān)測。當(dāng)使用間歇采樣時，暴露時間為4h時，至少采集兩次室內(nèi)氣體樣本。如果由于空氣流速有限或濃度低而無法實現(xiàn)，可以在整個暴露期間收集一個樣本。如果樣本間波動明顯，下一步試驗的濃度應(yīng)每次暴露采集4個樣本。單個室濃度樣本不應(yīng)超過平均濃度的±10%（氣體和蒸汽）或±20%（液體或固體氣8GB/T21605—XXXX溶膠）。應(yīng)計算并記錄吸入室受試物濃度達(dá)到平衡的時間（t95）。暴露持續(xù)時間應(yīng)涵蓋受試物生成的時間。6.6.5.3對于氣體/蒸汽和氣溶膠組成非常復(fù)雜的混合物，每個相在吸入室中可能表現(xiàn)不同，因此至少應(yīng)選擇每個相（氣體/蒸汽和氣溶膠）的一個指示物質(zhì)（分析物通常是受試物配方中的主要活性物質(zhì)。當(dāng)受試物是混合物（例如，一種配方）時，應(yīng)報告總配方的分析濃度，而不僅僅是活性成分或組分（分析物）的濃度。6.6.6粒徑分布6.6.6.1應(yīng)對所有氣溶膠以及可能凝結(jié)成氣溶膠的蒸汽進行粒徑分析。在4h的暴露期間，應(yīng)至少使用級聯(lián)撞擊器或如空氣動力學(xué)粒徑分析儀等替代儀器，兩次確定氣溶膠的粒徑分布。如果能夠證明級聯(lián)撞擊器或替代儀器獲得的結(jié)果具有等效性，那么在整個研究中可以使用替代儀器。應(yīng)與主要儀器并行使用第二臺設(shè)備，如重量分析濾器、沖擊式吸收管、氣體泡沫吸收管等，以確認(rèn)主要儀器的收集效率。通過粒徑分析獲得的質(zhì)量濃度應(yīng)與通過濾器分析獲得的質(zhì)量濃度一致。6.6.6.2為了使呼吸道的所有相通區(qū)域均有受試物，推薦使用MMAD在1-4μm，GSD在1.5-3.0的氣溶膠。如無法實現(xiàn)，應(yīng)經(jīng)專家評估判斷。例如，金屬煙霧的粒徑可能小于此標(biāo)準(zhǔn)，而帶電粒子、纖維和吸濕性材料（在呼吸道濕潤環(huán)境中粒徑會增加）的粒徑可能超過此標(biāo)準(zhǔn)。6.7試驗程序有兩種試驗方法：傳統(tǒng)的LC50法和濃度-時間法（CXt）。兩種方法都可能包括預(yù)試驗、主試驗和/或限度試驗（傳統(tǒng)方法）或在限定濃度下進行試驗（CXt）。如果已知一個性別更易感，可以選擇只使用易感性別進行研究。如果暴露的嚙齒動物種類不是大鼠，并且采用的是僅鼻道暴露方式，最大暴露持續(xù)時間可能需要調(diào)整以減少特定物種的痛苦。6.7.1傳統(tǒng)的LC50法在傳統(tǒng)法中，暴露時間通常為4h。動物暴露在一個限定濃度（限度試驗）或在至少3組不同的濃度下（主試驗）。除已知受試物信息外，在開展主試驗前，需要進行預(yù)試驗。6.7.1.1預(yù)試驗預(yù)試驗可用來估計受試物的毒性效應(yīng)，確定易感性的性別差異，并為限度試驗或主試驗的濃度選擇提供幫助。在選擇預(yù)試驗的濃度水平時，應(yīng)該充分利用所有可獲得的信息，比如構(gòu)效關(guān)系數(shù)據(jù)和類似化學(xué)物的信息。試驗中，每個濃度水平的每種性別的試驗動物不超過3只。通常使用一個濃度水平。但如果需要，也可以測試更多濃度。已經(jīng)進行過的其他研究可以用來替代預(yù)試驗。6.7.1.2限度試驗當(dāng)受試物已知或預(yù)期基本無毒時，可采用限度試驗。受試物的毒性作用信息，可以來源于已測試過的類似化合物或混合物或產(chǎn)品的特性和具有毒理意義的組成成分。在限度試驗中，雌雄各3只動物暴露在限定濃度中。按照GHS的分類系統(tǒng)，氣體、蒸汽、氣溶膠的限定濃度分別為20000ml/m3(μl/L）、20如果在限定濃度發(fā)現(xiàn)動物死亡或瀕死，則限度試驗的結(jié)果可作為其他濃度試驗（如主試驗）的預(yù)試驗。如果受試物的理化性質(zhì)決定其不可能達(dá)到限定濃度，則需測試其最大可及濃度。如果最大可及濃度的死亡率小于50%，則不需進行進一步試驗。9GB/T21605—XXXX6.7.1.3主試驗進行主試驗時，一般每個濃度組有10只動物，雌雄各半（或5只易感性別的動物且至少有3個濃度水平。必須有足夠多的濃度水平足以繪制出濃度死亡曲線，并在可能情況下求出LC50值。各暴露組之間的時間間隔取決于中毒體征的出現(xiàn)、持續(xù)時間與嚴(yán)重程度。是否需要對下一濃度水平進行試驗，取決于先前的試驗動物是否能夠成活。6.7.2濃度-時間法（CXt）濃度-時間法（CXt）是傳統(tǒng)的LC50法的一種替代方法。這種方法使試驗動物暴露在不同濃度的受試物水平，而且暴露時間也不同。所有的試驗都采用僅鼻部吸入的方法。具體方法見附錄1。與傳統(tǒng)法相比，濃度-時間法得到的LC01與LC100的值更加穩(wěn)定。當(dāng)在4個濃度水平和5種暴露持續(xù)時間的主試驗采用濃度-時間法時，每個濃度-時間間隔只需使用2只動物（雌雄各半或易受影響的單一性別）。在某些情況下，在每濃度-時間間隔，也可以選擇兩種性別的動物各2只。這能減少參數(shù)估計的誤差和變異性，增加成功率，提高置信區(qū)間的覆蓋范圍。當(dāng)用來參數(shù)估計的數(shù)據(jù)擬合不好時，可能需要第5個濃度水平。6.7.2.1預(yù)試驗預(yù)試驗一般用各性別、各濃度3只動物，它可以為主試驗選擇一個合適的初始濃度和最大化減少動物使用。暴露時間通常為4h。如果能從其他試驗中得到死亡數(shù)據(jù)，那么可以不進行預(yù)試驗。在選擇研究中的初始目標(biāo)濃度時，應(yīng)該考慮在其他試驗中觀察到的各性別和各濃度的死亡率。6.7.2.2主試驗初始濃度（第一步暴露）可能是限定濃度，也可能是根據(jù)預(yù)試驗選擇的濃度。每組雌雄各1只動物暴露于此濃度下，持續(xù)時間不同（如15、30、60、120、240min總共用到10只動物（附錄1）。限定濃度可根據(jù)監(jiān)管要求選擇，按照GHS，氣體、蒸汽、氣溶膠的限定濃度分別為20000ml/m3(μl/L）、20mg/L和5mg/L（或為最大可及濃度）。如果在第一步暴露中發(fā)現(xiàn)死亡，則引起死亡的最小暴露濃度將為下一步試驗的濃度建立提供指導(dǎo)。每一個后續(xù)的試驗都將取決于先前的試驗結(jié)果。對于很多受試物，在初始濃度得到的結(jié)果與在其他3個濃度組得到的結(jié)果，如果暴露時間間隔適當(dāng)，就能足以繪制濃度-時間-死亡曲線。對于處理濃度-時間法得到的試驗結(jié)果的統(tǒng)計分析方法，參見附錄1。6.8觀察6.8.1臨床觀察6.8.1.1動物在暴露期內(nèi)應(yīng)該頻繁進行臨床觀察。在暴露剛開始當(dāng)天應(yīng)該至少進行兩次臨床觀察，或者根據(jù)動物對處理的反應(yīng)進行更頻繁的觀察。觀察期限最少為14d，以后每天至少進行一次觀察。觀察期限長短不做硬性規(guī)定，可依據(jù)臨床癥狀和體征的性質(zhì)和時間以及恢復(fù)期的時間長短來決定。中毒體征出現(xiàn)和消失的時間都十分重要，特別是在有中毒體征延遲趨勢時。動物瀕死、疼痛劇烈與嚴(yán)重且持久的痛苦皆應(yīng)予以安樂死。當(dāng)動物被安樂死，或者發(fā)現(xiàn)死亡時，應(yīng)該盡可能的準(zhǔn)確記錄死亡時間。所有的觀察應(yīng)該被系統(tǒng)的記錄，每一個動物應(yīng)該保持單獨記錄。6.8.1.2觀察內(nèi)容應(yīng)該包括皮毛，眼睛和黏膜，呼吸，循環(huán)，自主和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，肢體活動和行為的改變。應(yīng)該記錄可能的局部和全身反應(yīng)的差別。要注意有無震顫、驚厥、流涎、腹瀉、昏睡、睡眠和昏迷癥狀。直腸溫度的測量可為由于處理因素和限制引起的反應(yīng)性呼吸過緩或者低溫/高溫提供證據(jù)。6.8.2體重GB/T21605—XXXX每只動物體重應(yīng)該在暴露前一天到暴露（day0)，并且至少在第1天、第3天和第7天（以及此后每周)，以及在第1天后的死亡或安樂死時進行記錄。相比之前數(shù)據(jù)，若動物體重出現(xiàn)≥20%的持續(xù)遞減，應(yīng)該進行密切監(jiān)測。在暴露結(jié)束后，應(yīng)測量存活動物的體重，并人道處死。6.8.3病理學(xué)檢查6.8.3.1所有實驗動物，包括那些在試驗中死亡的，或者出于動物福利原因被安樂死以及從試驗中移除的動物，應(yīng)該進行大體解剖。如果動物被發(fā)現(xiàn)死亡后，不能被立即進行尸體解剖，那么動物應(yīng)該被冷藏，溫度應(yīng)足夠低，使試驗動物的損失減少到最低限度。應(yīng)盡可能快地進行尸體解剖，通常在1-2d內(nèi)。記錄每個動物的大體病理變化，并特別注意呼吸道改變。6.8.3.2附加檢查可為研究提供更為深入的解釋價值，例如測量存活大鼠肺的重量，和/或提供呼吸道刺激性的顯微鏡檢查證據(jù)。對表現(xiàn)出大體病理變化，器官已知或預(yù)期會受到影響的存活24h及以上的動物，應(yīng)該檢查相應(yīng)器官。對整個呼吸道的顯微鏡檢杳可為易與水發(fā)生反應(yīng)的受試物（例如）提供有用的信息，例如酸性和吸濕性受試物。7數(shù)據(jù)與報告7.1數(shù)據(jù)應(yīng)該提供每只動物的體重和尸檢發(fā)現(xiàn)的數(shù)據(jù)。臨床觀察數(shù)據(jù)應(yīng)該以表格的形式呈現(xiàn)，統(tǒng)計出各組使用的動物的數(shù)量，出現(xiàn)特殊中毒特征的動物數(shù)量，試驗中死亡或者人道處死的動物數(shù)量，動物個體的死亡時間，毒副作用的描述和時間進程，可逆體征以及尸檢發(fā)現(xiàn)。7.2試驗報告試驗報告應(yīng)該包括以下內(nèi)容：7.2.1實驗動物和飼養(yǎng)條件——描述籠框條件，包括：每個籠子動物的數(shù)量(或者數(shù)量改變)，鋪蓋材料，周圍溫度以及相關(guān)濕度，光周期，以及飲食；——使用動物的種屬、品系，以及使用大鼠外其他物種的理由；——動物的數(shù)量，年齡和性別；——隨機化的方法；——詳細(xì)的飼料和水的質(zhì)量（包括飼料類型/來源，水源)；——試驗前的狀態(tài)，包括飲食，檢疫和疾病治療。7.2.2受試物——物理性質(zhì)，純度，以及相關(guān)的理化性質(zhì)（包括異構(gòu)化);——鑒定材料，CAS編號。7.2.3賦形劑——使用除水以外的賦形劑和選擇賦形劑的理由；——以往或者同期數(shù)據(jù)顯示賦形劑不影響研究結(jié)果。7.2.4吸入室——吸入室的描述，包括規(guī)格和體積；——用于動物暴露的設(shè)備和產(chǎn)生氣流的設(shè)備的來源和描述；——測量溫度，濕度，粒徑和實際濃度的設(shè)備；GB/T21605—XXXX——空氣來源，調(diào)節(jié)空氣的系統(tǒng)，供氣/排氣的方式；——用于校正保證氣流均一性的儀器的方法；——壓力差（正和負(fù))；——每個吸入裝置的暴露端口（僅鼻部暴露時)；動物在染毒裝置中的位置(全身暴露時)；——即時的氣流均一性/穩(wěn)定性；——溫度和濕度傳感器的位置，以及吸入室的氣體抽樣；——氣流速度，暴露端口的氣流速度（僅鼻部暴露)，或吸入裝置的動物負(fù)荷（全身暴露)；——用來測量O2和CO2設(shè)備的信息；——吸入室中濃度達(dá)到平衡所需要的時間（t95)；——每小時的體積改變；——測量設(shè)備。7.2.5暴露數(shù)據(jù)——在主試驗中，選擇目標(biāo)濃度的原因；——計算濃度（送入吸入室中受試物的總量除以通過的空氣的總體積)；——從動物呼吸帶位置收集的受試物實際濃度；對于產(chǎn)生的多種的物理形態(tài)（氣體，蒸氣，氣溶膠）的混合物，每一種形態(tài)應(yīng)該被單獨分析；——所有空氣中的濃度，應(yīng)該以質(zhì)量濃度為單位（如mg/L、mg/m3等）進行報告，也可附帶以體積分?jǐn)?shù)為單位（如10-6，10-9等)；——粒徑分布、空氣動力學(xué)直徑中值（MMAD)，以及幾何標(biāo)準(zhǔn)差(σg）和它們的計算方法。還應(yīng)該報告?zhèn)€體粒徑分析。7.2.6試驗條件——準(zhǔn)備受試物的詳細(xì)資料，包括降低固體材料的顆粒大小的過程的詳細(xì)資料，或者準(zhǔn)備受試物溶液的詳細(xì)資料，如機械加工過程可能改變受試物的構(gòu)成，還應(yīng)包括確認(rèn)受試物構(gòu)成的分析結(jié)果；——用于產(chǎn)生受試氣體和使動物暴露的在試驗氣體的設(shè)備的描述(最好包括圖表)；——詳細(xì)的化學(xué)分析的方法以及方法的有效性（包括采樣設(shè)備的分離受試物的效率)；——選擇試驗濃度的理由。7.2.7結(jié)果——吸入室的溫度、濕度和氣流的表格；——吸入室的計算、實際濃度數(shù)據(jù)的表格；——粒徑數(shù)據(jù)的表格，包括分析樣本收集數(shù)據(jù)、粒徑分布、MMAD和幾何標(biāo)準(zhǔn)差的計算：——每只動物的反應(yīng)數(shù)據(jù)和濃度水平的表格（動物表現(xiàn)出的毒性效應(yīng)，包括死亡率，嚴(yán)重程度，效應(yīng)發(fā)生和持續(xù)的時間)；——在研究期間，每只動物的體重，先于安樂死的死亡的日期和時間，毒性效應(yīng)開始和持續(xù)時間過程，以及它們對于每個動物是否可逆；——提供每只動物的解剖發(fā)現(xiàn)和病理組織學(xué)報告；——死亡參數(shù)（LC50，LC01）包括其95%置信區(qū)間和斜率；——統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)，包括濃度-時間法中指數(shù)n的估計及使用的統(tǒng)計軟件名稱。7.2.8結(jié)果的討論與解釋——特別強調(diào)的是，所用方法滿足試驗標(biāo)準(zhǔn)，例如限定濃度或者粒徑；——應(yīng)該處理顆粒的可吸入性，尤其是在粒徑標(biāo)準(zhǔn)不能被滿足時：——根據(jù)文件，應(yīng)該為那些處于疼痛中或者顯示出嚴(yán)重和持久的不適體征的動物而進行的安樂死作GB/T21605—XXXX出解釋；——按本文件進行試驗的理由；——研究評價中應(yīng)該有確定計算濃度與實際濃度的方法的一致性，以及兩者之間的關(guān)系；——應(yīng)該考慮死亡的可能原因以及占主導(dǎo)的反應(yīng)（全身和局部)。GB/T21605—XXXX濃度-時間法（CXt）1.逐步進行的濃度-時間法是用來吸入毒性試驗傳統(tǒng)法的替代方法。濃度-時間法可優(yōu)先用于檢測動物不同暴露持續(xù)時間的特殊監(jiān)管需要和科學(xué)研究中。濃度-時間法通常先在限定濃度進行試驗（暴露Ⅰ)，有5個不同的暴露持續(xù)時間（如15，30，60，120，240min)。根據(jù)全球化學(xué)品統(tǒng)一分類和標(biāo)簽系統(tǒng)，氣體、蒸氣和氣溶膠的限定濃度分別為20000ml/m3(μl/L）、20mg/L和5mg/L。2．受試物的毒性資料缺乏或較少時，可能需要進行預(yù)試驗：各性別不超過3只動物暴露在目標(biāo)濃度下240min。3．如果在暴露Ⅰ中，限定濃度動物的死亡率小于50%，沒必要進行下一步試驗。如果有監(jiān)管或科學(xué)研究需要在比限定濃度更高的濃度建立濃度-時間-反應(yīng)關(guān)系，下一步暴露需要更高的濃度進行試驗（如2倍限定濃度)。4.如果在限定濃度發(fā)現(xiàn)毒性效應(yīng)，需要進行下一步試驗（主試驗)。主試驗可能在更低濃度調(diào)整的暴露時間進行試驗(圖1中的暴露II，Ⅲ,IV’)或在更高濃度較短的暴露時間進行試驗（圖1中的暴露Ⅳ)。5．試驗各濃度/暴露時間需雌雄動物1只或2只更易受影響性別的動物。在某些情況下，也可在各濃度/暴露時間用雌雄動物各2只或4只更易受影響性別的動物進行試驗。這樣可以減少參數(shù)估計偏倚和變異性，增加參數(shù)估計成功率和置信區(qū)間的覆蓋范圍。6．理想情況下，每次暴露試驗進行1天。這樣可以在找到合適的生存率的置信度前延遲進行下一步暴露，或調(diào)整下一步暴露的目標(biāo)濃度和持續(xù)時間。進行每步暴露試驗時，先選擇最長的暴露時間，如先240min，再120min。如果在240min的組發(fā)現(xiàn)動物在90min后出現(xiàn)死亡或嚴(yán)重的毒性效應(yīng)，則不需要進行120min的試驗（死亡率可能是100%)。在該濃度下，應(yīng)該選擇更短的暴露時間（如90、65、45、33、25min)。7．應(yīng)經(jīng)常測量每段暴露時間染毒柜中的時間加權(quán)平均濃度。只要可能，每只動物的死亡前的暴露時間（而不是整個暴露持續(xù)時間）應(yīng)該用到數(shù)據(jù)分析中去。8．應(yīng)仔細(xì)檢查前4步暴露的結(jié)果，已確認(rèn)有無數(shù)據(jù)缺陷。當(dāng)擬合不好時，可能需要第5步暴露，以填補數(shù)據(jù)缺陷。9．?dāng)?shù)據(jù)分析將使用到每步暴露的數(shù)據(jù)來得到濃度-