雙孔鉀離子通道TREK-1和TREK-2功能性串聯(lián)二聚體載體的構(gòu)建的任務(wù)書任務(wù)書任務(wù)名稱：雙孔鉀離子通道TREK-1和TREK-2功能性串聯(lián)二聚體載體的構(gòu)建任務(wù)敘述：TREK-1和TREK-2是一類重要的雙孔鉀離子通道。它們被廣泛分布于人類體內(nèi)的各種組織和器官中，包括腦、心臟、胃腸道、肺等。這兩種通道的活動狀態(tài)直接關(guān)系到機(jī)體正常功能的維持。針對它們的研究也促進(jìn)了臨床治療相關(guān)疾病的發(fā)展。目前，對于TREK-1和TREK-2的研究主要集中在單個通道分子水平上，但是它們在大多數(shù)組織中都是以二聚體形式存在的。因此，我們計劃基于兩個分子間的相互作用力，建立TREK-1和TREK-2的功能性串聯(lián)二聚體載體。任務(wù)內(nèi)容：1.提取TREK-1和TREK-2的DNA序列，獲取它們的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)信息，并進(jìn)行相關(guān)分析和模擬。并分別設(shè)計、合成TREK-1和TREK-2C端的半體片段（HBD）。2.構(gòu)建包含兩個HBD的雙底物表達(dá)載體。設(shè)計HBD的連接方式，結(jié)合雙孔鉀離子通道分子間的互作原理，構(gòu)建出能夠串聯(lián)兩個HBD的載體。3.利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)（FRET）對構(gòu)建的載體進(jìn)行檢測，以確定其是否成功形成了功能性的串聯(lián)二聚體。任務(wù)分工：1.DNA序列處理和生物信息學(xué)分析：小組成員A；2.半體片段（HBD）的設(shè)計與合成：小組成員B；3.雙底物表達(dá)載體的構(gòu)建：小組成員C；4.載體的表達(dá)和純化及FRET實驗的進(jìn)行：小組成員D、E。任務(wù)結(jié)果：1.成功提取和分析了TREK-1和TREK-2的DNA序列，并設(shè)計合成出了HBD物質(zhì)。2.成功構(gòu)建了雙底物串聯(lián)二聚體表達(dá)載體并表達(dá)。3.構(gòu)建的載體能夠直接作用于細(xì)胞膜表面，并能實現(xiàn)TREK-1和TREK-2相互連接，并形成功能性的串聯(lián)二聚體。4.通過FRET實驗檢測，表明連接的兩個HBD功能相對獨立，同時也可以協(xié)同發(fā)揮作用。任務(wù)周期：本任務(wù)周期為4周，具體時間安排如下：第1周：進(jìn)行實驗前的討論和細(xì)節(jié)確認(rèn)；第2周：DNA序列處理和HBD設(shè)計與合成；第3周：雙底物表達(dá)載體的構(gòu)建和表達(dá)；第4周：載體的純化和FRET實驗的進(jìn)行。任務(wù)建議：建議小組成員分工合理，配合默契，并及時交流任務(wù)進(jìn)展和發(fā)現(xiàn)的問題。遵循實驗室規(guī)則和安全標(biāo)準(zhǔn)，保證實驗室的有序和安全。同時，建議在任務(wù)論文中詳細(xì)記錄實驗的細(xì)節(jié)，以便后續(xù)的研究和參考。參考文獻(xiàn)：1.HninEiThu,YongHoonJeong.Two-poredomainpotassiumchannels:potentialtherapeutictargetsincardiacarrhythmia.Cells,2020,9(7):1537.2.JoanneH.Lee,SamanthaCollier,MarkT.Willisetal.Protein-proteininteractions:decodingTREKchannels.Pflüg