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實驗三、顯微鏡計數、死活細胞

的鑒別一、實驗目的

1、學習使用血球記數板測定微生物數量的方法。2、學習區分酵母菌死活細胞的實驗方法。實驗1：微生物數量的測定

平板計數法；比濁法（分光光度計）；

顯微直接計數法。實驗材料（1）酵母菌懸液載玻片蓋玻片血球計數板計數器顯微鏡酵母菌顯微直接計數

方法：總菌計數法——血球計數板或霍瑟（PeroffHausser）細菌計數板。不要從高處往下滴！取清潔無油的血球計數板，在計數室上面加蓋血蓋片。取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計數室內不得有氣泡。用10×鏡觀察并將計數室移至視野中央。在40×鏡下計數：計數5個中格的平均值，然后求得每個中格的平均值。乘上25就得出計數區總菌數，最后再換算到每mL菌液中的含菌數。每個記數室體積為0.1立方毫米。注意事項：計上不計下，計左不計右。出芽計一半計數步驟：注意事項：①

從蓋玻片與計數室縫隙間滴進樣品液；②

加樣后靜置3-5min，酵母菌均勻到一個水平上；※濁度：a、每格5—10個菌體為宜；

b、兩個計數室計得的值來計算樣品的含菌量。計算：通常數五個中方格的總菌數（A），然后求得每個中方格的平均值，再乘上25（25個中方格），就得出大方格中的總菌數，然后再換算成1ml菌液中的總菌數，乘上稀釋倍數（B），即原液中的總菌數。總菌數（個/ml）=A/5×25×10000×B。

實驗報告1、結果記錄在P92的表格：各中格中菌數AB二室平均值菌數/ml12345第一室第二室實驗2：酵母菌死活鑒定死活鑒定：美藍是一種無毒性的染料，它的氧化型呈藍色，還原型呈無色。用美藍對酵母的活細胞進行染色時，由于細胞的新陳代謝作用，細胞內具有較強的還原能力，能使美藍由藍色的氧化型變為無色的還原型。因此，具有還原能力的酵母活細胞是無色的，而死細胞或代謝作用微弱的衰老細胞則成藍色或淡藍色。器材（2）1、染液：呂氏堿性美藍染液2、菌種：釀酒酵母液3、儀器和其他用具：顯微鏡、載玻片、蓋玻片等操作步驟2

美藍浸片的觀察：（斜面）1）在載玻片中央加一滴0.1%呂氏堿性美藍染色液，然后按無菌操作用接種環挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均勻。染液不宜過多或過少，否則在蓋上蓋玻片時菌液會溢出或出現大量氣泡而影響觀察。2）用鑷子取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下使其蓋在菌液上。蓋玻片不宜平放著放下，以免產生氣泡影響觀察。3）將制片放置約3min后鏡檢，先用低倍鏡然后用高倍鏡觀察酵母的形態和出芽情況，并據顏色來區別死活細胞。4）染色約0.5h后再次進行觀察，注意死活細胞數量是否增加。美藍浸片的觀察：（斜面）在載玻片中央加一滴0.1%呂氏堿性美藍染色液，然后按無菌操作用接種環挑取少量酵母菌菌液放在染液中，混合均勻。思考題根據你的

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