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DB34DB34/T2813—2017梨炭疽病菌檢疫鑒定方法DetectionandidentificationofColletotrichumgloeosporioidesPenz.2017-03-30發布2017-04-30實施安徽省質量技術監督局發布I1GB/T6682分析實驗室用水規分類地位:真菌界(Fungi黑盤孢目(Melanconiales),黑盤孢科(Melanconiace菌屬(Colletotrichum其有性階段為圍小叢殼(G根據梨炭疽病菌在寄主上的為害癥狀(參見附錄A),培養基上生長的菌落、菌絲、分生孢子和分5.2.1除另有規定外,所有試劑均為分析純或生化試劑,實驗用水20mmol/LEDTA-Na2蛋白酶5.2.4PCR試劑:10×PCRbuff),2在25℃~30℃,12h黑暗/12h光照(12h光暗交替)條件下培養,第3d開始觀察,根據組織周殼暗褐色,燒瓶狀,直徑為85μm~300μm;子囊長棍棒形,平行排列于子囊殼內,大小為55μm~從檢測樣品中分離并鑒定為梨炭疽病菌的菌株,應妥善保存。將菌株接種PDA培養基斜面上,25℃~30℃培養5d,然后4℃冰箱保存,或將菌絲塊轉入20%滅菌甘油并混勻,-80℃長期保存。345C.1.1.3加入等體積的苯酚:氯仿:異戊醇(25:24:1)溶液,顛倒混勻,12000rpm離心C.1.1.6棄上清液,室溫倒置于吸ACCTTTGAGGGCCTACATCAG-3',預期擴增產物為329bp。PCR反應程序為94℃PCR擴增反應體系見表C.1。PCRbuffer(含25mmol/L
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