仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價1仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價WPS,aclicktounlimitedpossibilities仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價2一、概述二、雜質檢查方法的建立三、雜質檢查方法學驗證的要求四、雜質檢查方法和方法驗證常見問題分析主要內容仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價31、雜質檢查方法和方法驗證對仿制藥的重要意義（1）安全性的重要保證－－關注毒性雜質（2）評價仿制藥是否一致的關鍵指標之一－－仿制藥與被仿制藥的質量一致－－雜質的種類和數量不高于被仿制藥（3）雜質研究的基礎－－雜質檢查方法不合適或方法學驗證不完善，雜質檢查不可靠，無法準確評價藥品質量一、概述仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價4仿制藥與被仿制藥一致性要求藥學方面一致（含量、結構、雜質、其他檢查項等）雜質的數量和種類低于被仿制藥，否則需要分析雜質的安全性并提供有關數據，必要時應進行相關的安全性試驗建立雜質適宜的雜質檢查方法用于判斷一致性用語工藝優化、去除雜質、考察穩定性、控制藥物質量一、概述仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價52、目前國內仿制藥研究中雜質檢查面臨的困難－－雜質來源不清：被仿制藥和仿制藥雜質的種類和數量不清，包括雜質產生和引入的過程、降解途徑－－雜質甲醇方法缺乏針對性：不知控制何種雜質以及為何控制，缺乏安全性數據的支持－－雜質對照品制備困難（受限于工藝困難）：方法驗證不充分－－雜質檢查結果難于評價：以及基礎薄弱，需要提高雜質研究水平，包括雜質檢查方法和驗證水平，以體改仿制藥研制水平一、概述仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價6例鹽酸曲美他嗪片－－進口標準采用梯度洗脫，對3種已知雜質、單個未知雜質及總雜質分別進行控制－－國內仿制采用等度洗脫，僅對未知雜質（單個雜質和/或總雜質進行控制）－－國內同品種標準對有關物質的規定：總雜質不得過1.0％一、概述仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價73、主要的技術指導原則和技術要求《化學藥物雜質研究的技術指導原則》《已有國家標準化學藥品研究技術指導原則》過渡期品種集中審評（化學藥品）技術要求FDDA、ICH的相關指導原則－GuidancesforIndustryANDAs:ImpuritiesinDrugsSubstancesChemistry、Manufacturing、ControlesInformation－ANDAs:ImpuritiesinDrugsProductsQ3A(R)Q3B(R)一、概述仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價84、雜質的范圍有機雜質－－包括工藝中引入的雜質和降解產物，化學結構與活性成分的分子式類似或具淵源關系，通常稱有關物質無機雜質－－產生的無機物殘留溶劑－－生產過程中使用的有機溶劑

來源－－工藝雜質、降解產物、從反應物及試劑中混入的雜質（外源性雜質）等結構雜質－－幾何異構體、光學異構體、聚合物、其它甾體、其它氨基酸一、概述仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價9目的1、建立雜質檢查方法是質控的要求－－包括具體的分析操作方法，以及計算方法、限度要求2、用語分析雜質譜－－考察與被仿制藥一致性，進而優化制備工藝及穩定性考察二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價101、雜質檢查方法建立的前提－（1）被仿制藥雜質譜如何：參考公開信息：質量標準、說明書、有關文獻和專利－（2）自身雜質如何？理論綜合分析（合成路線、反應條件、處方工藝、輔料等）、直接測試用于未知雜質或未定性雜質的“標記”方法－LC-MS/GC-MS或CE-MS法－HPLC峰保留時間對比法－其它方法二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價112、仿制藥雜質檢查方法建立的一般考慮點（1）參考被仿制藥的方法：A、被仿制藥雜質檢查方法和限度如何？標準中控制了哪些雜質？B、重要參考，為方法建立提供重要的信息，全面考察C、不可簡單套用－工藝或處方的不同，二者的雜質譜可能不同，被仿制藥雜質加查方法可能不適－被仿制藥標準較低，無雜質檢查項或較為簡單－被仿制藥的雜質檢查方法無法獲得二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價122、仿制藥雜質檢查方法建立的一般考慮點（2）結合雜質的理化特點：根據雜質譜，考慮雜質結構、理化性質例如：阿司匹林→比色法→游離水楊酸（CP2005）葡萄糖注射液→UV法→5-羥甲基糠醛（CP2005）氨基酸原料藥→TLC法→其它氨基酸（CP2005）二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價132、仿制藥雜質檢查方法建立的一般考慮點（3）結合雜質的毒性特點：安全性控制的需要被仿制藥和自身雜質的毒性如何？重視藥理毒理及臨床安全性研究結果的作用對于有些分子通過以下化學反應可能產生潛在的遺傳毒性作用－烷基化－交聯－脫嘌呤可參考遺傳毒性庫遺傳毒性雜質或具有可能引起遺傳毒性的結構的雜質需要建立靈敏的試驗方法－EMEA《遺傳毒性雜質限度指導原則》：毒理學擔憂閾值（TLC)1.5mg/人/日二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價142、仿制藥雜質檢查方法建立的一般考慮點（4）考慮不同檢查方法的特點：主要是靈敏度和專屬性能否符合要求痕量雜質和遺傳毒性雜質的嚴格控制，對方法要求較高－化學法＆TLC法＆HPLC法－HPLC/MS，HPLC/熒光CE法可用于微量樣品GC適用于揮發性雜質檢查二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價152、仿制藥雜質檢查方法建立的一般考慮點（5）注意多種方法聯用：由雜質多樣性復雜性和方法局限性所決定單一方法不能滿足多個雜質的檢測時，可采用兩種以上的方法互為補充，控制雜質－化學法＆色譜法＆光譜法＆生物檢定法－同一方法采用不同測試條件如正相HPLC、反相HPLC、不同流動相的反相HPLC等－分離技術于檢測手段聯用，較為有效，如HPLC、GC、LC-MS、GC-MS、HPLC-PDA、CE等二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價162、仿制藥雜質檢查方法建立的一般考慮點（6）綜合藥學的其他研究結果：雜質檢查與藥物外觀色澤、含量等項目間存在密切聯系，如果這些項目發生明顯變化，而雜質基本不變時，應分析原因，關注雜質檢查方法的可行性。二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價173、雜質檢查常見方法介紹HPLC法－考慮被仿制藥的色譜條件－考察同類物質質量標準中的雜質檢查方法－一般選擇多種色譜條件：正相和反相－方法包括：固定相、流動相、洗脫方式、波長、測試樣品的處理、具體操作、計算方法二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價183、雜質檢查常見方法介紹（1）固定相的選擇－根據特征研究的藥物的特性選擇合適填料的柱子。常用RP-HPLC，色譜柱多選C18柱、C8柱、苯基柱、氨基柱也有使用－C18柱時，流動相有機溶劑％通常≥5％－流動相的pH值2～8－pH>8，溶解硅膠載體，宜選用耐堿填充劑，包覆聚合物、高純硅膠為載體并具有高表面覆蓋度的鍵合硅膠、非硅膠或有機-無機雜化填充劑－pH<2，鍵合相水解脫落，宜選用耐酸性填充劑：有機-無機雜化填充劑、具有大體積側鏈的二異丙基或二異丁基取代C18鍵合硅膠等二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價193、雜質檢查常見方法介紹（1）固定相的選擇－注意不同品牌柱子在耐用性方面的研究：a、當雜質峰與主峰的分離情況不十分完美b、確定輔料峰的相對保留時間（用于定位扣除輔料的干擾）c、確定特定雜質的相對保留時間d、確定有關物質出峰完畢的保留時間－－當不同品牌而引起以上各因素不固定時，應在標準中注明品牌二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價203、雜質檢查常見方法介紹（2）流動相的選擇嘗試多種流動相結合雜質的性質－手性雜質－無紫外吸收雜質－一般雜質（3）洗脫方式的選擇等度洗脫梯度洗脫極性大的化合物可能被掩蓋，極性小的化合物難以被洗脫，甚至保留在柱上，可使用梯度洗脫法二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價213、雜質檢查常見方法介紹（4）波長的選擇－選擇的原則是大部分主要雜質與主成分均在此波長下有吸收：二極管陣列法－無紫外吸收或檢測波長處吸收相差較大的多種化合物，有時在單一檢測波長處不能檢出－兼顧各雜質吸收情況：特定波長檢測特定雜質－必要時，該用其它類型的檢測器二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價223、雜質檢查常見方法介紹（5）樣品的處理和配制－預處理樣品考慮乳膏提取可能導致的雜質漏檢和失真衍生化處理導致雜質丟失－樣品濃度的影響濃度高利于雜質檢出，但防超載低濃度樣品雜質的檢查難題？二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價233、雜質檢查常見方法介紹（6）雜質的定量計算方法－雜質對照品法：定量準確，已知雜質，需用雜質對照品－校正因子的主成分自身對照法：定量準確，已知雜質，無需長期提供雜質對照品－不加校正因子的主成分自身對照法：前提是假定雜質與主成分的響應因子基本相同，有一定的誤差，可用于未知雜質，已知雜質對主成分的響應因子在0.9～1.1之間－峰面積歸一化法：簡便，因雜質與主成分響應因子不同，線性范圍不同、儀器對他們的積分精度及準確度不同等因素，有一定的局限性二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價24目前定量方法中存在的主要問題－雜質對照品法：使用較少－主成分自身對照法：較少采用校正因子計算（雜質無法進行歸屬或雜質對照品無法得到，校正因子無法計算）－常見的是對未知雜質，不加校正因子的主成分自身對照或面積歸一化法（無法準確定量，無法有效檢測雜質）TLC法－設備和操作簡便，一些特定雜質的檢查－靈敏度較差、定量不夠精確，分離度欠佳，有時無法滿足需要－僅限于限度檢查（半定量），結合不同原理的檢視技術能使各雜質斑點均可顯示，彌補HPLC的不足。－需做好系統實用性試驗二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價25定量方法－限度檢查（半定量）－對照品比較法：已知雜質，對照品－自身對照法：已知雜質、未知雜質、色調一致－檢視技術：顯色、熒光、自身顏色LC-MS、GC-MS、GC-IR、CE-MS法－分離技術和鑒別技術聯用，為解析化合物的結構提供直接證據－有助于雜質譜的分析和定性二、雜質檢查方法的建立仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價26方法驗證的目的考察分析方法十分適用于雜質的檢測和定量方法驗證中面臨的困難雜質譜不清雜質對照品無法獲取驗證的具體要求三、雜質檢查方法學驗證的要求仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價271、專屬性－指在可能的共存主分存在時，對被分析無物準確測定的能力－分離度：專屬性指標、雜質譜的明確是基礎－雜質可得→最難物質分離對得分離試驗、粗品中間體分離試驗、輔料與雜質及主成分得分離試驗－雜質不可得→強制降解試驗、與另一成熟方法比對峰純度→二極管陣列、質譜；改變流動相的比例方法不夠專屬時，應多個方法予以補充三、雜質檢查方法驗證的要求仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價28降解試驗的注意點－－降解程度－－當降解產物、中間體、副產物吸收波長不同時的處理－－制劑降解破壞－－消除輔料的干擾，當無法避開輔料的干擾時應對輔料進行定于予以扣除三、雜質檢查方法驗證的要求仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價29破壞性試驗－－酸降解：一般采用0.1mol/L～1mol/L的鹽酸或硫酸－－堿降解：一般采用0.1mol/L～1mol/L的氫氧化鈉溶液－－氧化降解采用合適的過氧化氫溶液－－必要時可以加熱或提高濃度－－對高溫試驗通常溫度高于加速試驗溫度的10℃，如50℃、60℃－－對于原料藥有需要考慮水溶液或混懸液的降解－－考慮在不同pH值條件下的降解－－光照試驗可采用4500Lx三、雜質檢查方法驗證的要求仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價30存在的主要問題（1）主藥完全降解，無法對降解產物進行檢測（2）由于選擇降解條件強度不夠，使藥物未能降解，而誤以為藥物穩定（3）不能選擇合適的測定方法測定降解產物，使主成分降解后測定的回收量偏低（4）未考慮破壞性試驗時產生的聚合物三、雜質檢查方法驗證的要求仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價312、靈敏度－試樣中能被檢測（或定量）的最低量－通常用檢測限及定量限表征，可根據直觀評價、信噪比、響應值的標準差和斜率獲得。－應滿足質控需要－信噪比的方法3、精密度－在規定的測試條件下，同一個均勻樣品經多次取樣測定所得結果之間的接近程度。－重復性、中間精密度、重現性三、雜質檢查方法驗證的要求仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價324、準確度－測定結果與真實值或參考值接近程度－已知雜質：回收率（根據精密度、專屬性、線性）推斷－未知雜質：與另一成熟方法比對、根據質量平衡原理結合含量等結果進行粗略判定，必要時研究幾種不同色譜條件甚至不同測定原理的方法進行比較選用5、線性－在設計范圍內，檢測響應值與待測物質量之間成正比例關系的程度三、雜質檢查方法驗證的要求仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價336、范圍－檢測方法能達到一定精密度、準確度和線性的高、低濃度或量的區間－范圍應在規定限度的±20％間或定量限至限度的+20％間，若含量測定和雜質檢查同用一套色譜系統，則線性范圍應為雜質限度的-20％至含量限度（上限）的+20％7、耐用性－指測定條件有小的變動時，測定結果不受影響的承受程度－HPLC：流動相的組成比例及pH值、不同廠家或批號的色譜柱、柱效、柱溫、流速等及被測溶液的穩定性、樣品提取的次數和時間等建議固定上述測定條件的參數，如柱長、填料的粒度、溫度、流速，甚至品牌三、雜質檢查方法驗證的要求仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價347、耐用性－－TLC：適當改變展開劑比例及pH值，考察耐用性。如對色譜條件苛刻時，規定最難分離物質對試驗。－－較容易忽略8、溶液的穩定性考察－－一般在常溫、常光情況下進行，對同一份樣品溶液進行長時間的測定，以雜質量的變化進行考察－－光或溫度引起應在標準中說明避光或試驗溫度9、系統適用性－－理論板數、柱拖尾因子、難分離物質對的分離、對照溶液重復進樣的偏差－－否則，應對色譜系統作必要的調整或更換色譜柱三、雜質檢查方法驗證的要求仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價35四、雜質檢查方法和方法驗證常見問題分析1、簡單套用被仿制藥的檢查方法，未建立針對性的方法例：鹽酸偽麻黃堿，分別采用人工合成與植物提取工藝，有機溶劑殘留量、有關物質均不同2、方法學驗證不充分－強制降解條件過于劇烈，無法判斷主峰與降解產物的分離情況－樣品經降解、氧化破壞后主藥被完全破壞，無法說明其降解物與主峰的分離情況－調整降解條件的劇烈程度3、檢查方法對雜質的控制不全面，尤其是對毒性雜質仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價36四、雜質檢查方法和方法驗證常見問題分析建議的質量保證策略過程控制：控制合成原料的純度終產品控制：檢查終產品殘留的結構異構體4、方法靈敏度不夠eg:有關物質檢查法的定量限未0.75ng，標準規定雜質限度不得過1.0％，折算為0.5ng，表明此方法不能有效檢測產品的雜質，需重新建立有效的雜質檢測方法仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價37四、雜質檢查方法和方法驗證常見問題分析5、方法缺乏互補性eg：（1）合成重要中間體在選定的檢測波長處物吸收，建立的有關物質檢測方法無法檢測該物質（2）建立該中間體適宜的檢測方法6、積分時間不充分，不能有效檢測雜質－－氧化破壞試驗中，主峰保留時間的3倍處，仍有降解峰出現，色譜圖記錄至2倍，不能有效檢測出有關物質7、檢測波長缺乏針對性－－220nm附近的吸收強度遠高于278nm波長處－－提供檢測波長選擇的依據仿制藥雜質檢查方法建立和方法學研究與評價38四、雜質檢查方法和方法驗證常見問題分析8、供試液制備