第2章細胞生物學技術2.1細胞形態結構的觀察方法2.1.1光學顯微鏡技術顯微鏡和顯微鏡的分辨能力肉眼：0.2mm;光鏡：0.2μm;電鏡：0.2nm0.61λ分辨率DN.sinα/2=λ:

光源波長;α:物鏡鏡口角;N:介質折射率第2章細胞生物學技術顯微鏡成像原理第2章細胞生物學技術普通復式光學顯微鏡（lightmicroscope）雙目顯微鏡第2章細胞生物學技術正置顯微鏡倒置顯微鏡第2章細胞生物學技術相差顯微鏡（phase-contrastmicroscope）（光程差或相位差轉變為振幅差，相差板）微分干涉顯微鏡（differential-interferencemicroscope）（厚度差轉變為明暗差；增加樣品反差，立體感強）第2章細胞生物學技術熒光顯微鏡（fluorescencemicroscope）第2章細胞生物學技術熒光顯微鏡及其照片第2章細胞生物學技術黏著斑蛋白細胞骨架第2章細胞生物學技術激光共聚焦原理激光共聚焦顯微鏡（laserscanningconfocalmicroscope）第2章細胞生物學技術激光共聚焦顯微鏡及其顯微圖像第2章細胞生物學技術黏著斑蛋白細胞骨架（應力纖維）共定位分析第2章細胞生物學技術暗視野成像原理顯微鏡的暗視野功能第2章細胞生物學技術(A)明視野顯微術；(B)相差顯微術；(C)微分干涉顯微術；(D)暗視野顯微術第2章細胞生物學技術熒光漂白恢復技術（fluorescencerecoveryafterphotobleaching,FRAP）第2章細胞生物學技術熒光共振能量轉移技術（fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET）第2章細胞生物學技術1）電鏡基本知識和結構（波長小于0.1nm）2）樣品制備（超薄切片，負染色，冰凍蝕刻，三維重構，掃描）3）電鏡種類掃描電子顯微鏡透射電子顯微鏡掃描隧道顯微鏡和原子力顯微鏡2.1.2電子顯微鏡技術第2章細胞生物學技術透射電鏡及其圖像第2章細胞生物學技術透射電鏡照片第2章細胞生物學技術免疫電鏡照片第2章細胞生物學技術掃描電鏡及其圖像第2章細胞生物學技術掃描電鏡照片第2章細胞生物學技術冰凍蝕刻技術第2章細胞生物學技術冰凍蝕刻電鏡技術照片第2章細胞生物學技術負染色電鏡技術照片第2章細胞生物學技術2.2.1高速、超速和梯度密度離心分離各種細胞器、生物大分子及其復合物2.2細胞組分的分析方法第2章細胞生物學技術差速離心密度梯度離心第2章細胞生物學技術差速離心過程第2章細胞生物學技術2.2.2細胞內核酸、蛋白質、酶、糖類、脂類的顯色DNA：福爾根（Feulgen）反應－－紫紅色多糖類：PAS反應－－黃色脂肪：蘇丹III－－紅色蛋白質：米倫（Millon）－－紅色2.2.3特異抗原的定性與定位免疫熒光免疫電鏡免疫沉淀Westernblotting第2章細胞生物學技術2.2.5特異核酸標記技術InsituhybridizationNorthernblot(RNA);Southernblot(DNA)2.2.4放射性標記生物大分子的合成和動態3H（DNA合成）35S（蛋白質合成）14C（碳水化合物合成）32P（核酸合成）定性、定位、半定量研究（標記，自顯影）32P（14天）,14C（5760年）,3H（12年）,35S（87天）,131I（8）第2章細胞生物學技術原位雜交技術第2章細胞生物學技術2.2.6定量細胞化學技術2.2.7細胞內大分子的分離與分析柱層析、分子篩、免疫吸附、免疫沉淀等方法分離蛋白質組分及復合物（交聯和變性）顯微分光光度術（紫外顯微分光光度儀、可見光顯微分光光度染色）流式細胞儀第2章細胞生物學技術蛋白質電泳分析第2章細胞生物學技術流式細胞術第2章細胞生物學技術2.3細胞培養、細胞工程與顯微操作技術2.3.1細胞培養

1）植物細胞（單倍體細胞培養，原生質體培養，體細胞培養）

2）動物細胞（原代細胞培養，永生細胞系）

3）非細胞體系（DNA復制，RNA轉錄，蛋白質合成，高爾基體的膜泡運輸，細胞核裝配等）細胞提取物，細胞核提取物第2章細胞生物學技術植物組織培養動物細胞培養細胞的克隆第2章細胞生物學技術2.3.2細胞工程1）細胞融合與雜交植物細胞先去壁；融合方式：仙臺病毒或聚乙二醇介導，電融合等同核融合細胞，異核融合細胞，染色體丟失

2）單克隆抗體技術2.3.3顯微操作技術1975年英國科學家MilsteinandKohler,1984年獲諾貝爾獎B淋巴細胞+小鼠骨髓瘤轉移細胞核、細胞器、基因等2.3.4轉基因、基因沉默、基因敲除、模式生物等第2章細胞生物學技術轉基因技術第2章細胞生物學技術顯微操作儀第2章細胞生物學技術顯微操作示意圖第2章細胞生物學技術第2章細胞生物學技術MarioCapecchi(Late1980s)(UniversityofUtah)embryonicstemcellsininnercellmassastargetcells1/104cellsundergoaprocessofhomologousrecombination.基因敲除技術第2章細胞生物學技術2.4細胞生物學研究的模式生物病毒（轉基因載體）細菌（大腸桿菌作為基因工程菌株）酵母（真核表達載體，基因功能分析）線蟲（1000個左右細胞構成）黏菌（同步化材料）蛙（卵細胞大，易操作）果蠅（遺傳背景清楚，表型易掌握）斑馬魚（胚胎發育研究的好材料）小鼠（與人更接近）第2章細胞生物學技術學生報告題目：

1，轉基因技術及其應用；2，細胞工程技術在生產實踐中的應用；3，基因敲除技術及其應用；4，模式生物線蟲及其在細胞生物學研究中的應用；5，模式生物斑馬魚及其在細胞生物學研究中的應用；

按學號分組，按組確定題目，每個組確定一名組長并委派一個報告人。每個組