背景介紹現(xiàn)代研究表明，淫羊藿具有抗腫瘤、抑菌、改善老年癡呆等多種顯著的生物活性，因此淫羊藿早已被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和保健食品領(lǐng)域。淫羊藿主要化學(xué)成分有黃酮類、酚酸類、木脂素類、多糖等化合物，其中黃酮類化合物為主要次生代謝產(chǎn)物，尤以8-異戊烯基黃酮苷含量最高，淫羊藿苷作為最具代表性的8-異戊烯基黃酮苷，更是成為歷版藥典中淫羊藿質(zhì)量控制的指標(biāo)成分。目前鮮有對淫羊藿苷代謝產(chǎn)物淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅰ同時(shí)進(jìn)行研究，并對比中國藥典中4個(gè)品種淫羊藿的差異，淫羊藿的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待進(jìn)一步提高。文章亮點(diǎn)1.進(jìn)一步完善淫羊藿質(zhì)量評價(jià)體系，提高淫羊藿質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；2.以6種8-異戊烯基黃酮苷作為指標(biāo)成分，通過HPLC對4個(gè)品種、共24批次淫羊藿開展多指標(biāo)定量指紋圖譜的研究，并結(jié)合聚類分析、主成分分析和正交偏最小二乘法判別分析化學(xué)計(jì)量學(xué)方法進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)；3.

建立的多指標(biāo)定量指紋圖譜分析方法穩(wěn)定、可靠，結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)可更加全面、快速對淫羊藿進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)，為今后提高淫羊藿的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)。內(nèi)容介紹1

實(shí)驗(yàn)部分1.1

主要儀器與試劑1.2

實(shí)驗(yàn)方法1.2.1

供試品溶液制備精密稱取24批淫羊藿藥材粉末各0.20g，分別置于50mL具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇溶液50mL后密塞，稱重后超聲提取1h，待冷卻至室溫后再次稱定總重并補(bǔ)足失重，搖勻后8000r/min離心處理5min，取少許上清液，經(jīng)0.22μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。1.2.2

標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備分別精密稱取10.65、10.39、10.05、9.80、10.63、10.43mg朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅰ、寶藿苷Ⅰ標(biāo)準(zhǔn)品于250mL容量瓶中，用70%甲醇溶液超聲溶解后稀釋定容至刻度，混勻后作為標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，5℃冰箱保存。1.2.3

色譜條件2

結(jié)果與討論2.1

指紋圖譜方法學(xué)考察2.2

指紋圖譜的建立及相似度評價(jià)經(jīng)多點(diǎn)校正后全譜峰匹配，得到24批淫羊藿樣品的疊加圖譜見圖1，共標(biāo)定9個(gè)共有峰。如圖2所示，經(jīng)與混合對照品溶液HPLC圖譜比對，確認(rèn)1號峰為朝藿定A、2號峰為朝藿定B、3號峰為朝藿定C、5號峰為淫羊藿苷、8號峰為淫羊藿次苷Ⅰ、9號峰為寶藿苷Ⅰ。2.3

化學(xué)計(jì)量學(xué)分析使用SPSS26.0版軟件，以24批淫羊藿指紋圖譜的9個(gè)共有峰峰面積為變量，采用組間平均連接法，以平方歐氏距離作為測量度，對24批藥材采用系統(tǒng)聚類分析法進(jìn)行模式識別分析，結(jié)果見圖3。使用SIMCA14.1統(tǒng)計(jì)軟件對S1～S24淫羊藿樣品的9個(gè)共有峰峰面積進(jìn)行正交偏最小二乘法分析，從而揭示不同品種淫羊藿之間的主要差異成分（圖4）。如圖5所示，變量重要性指標(biāo)(VariableImportanceinProjection，VIP)值大于1的成分共有5個(gè)，表明這5類成分為不同品種淫羊藿之間的主要差異性成分。2.4

多指標(biāo)定量方法學(xué)考察2.5

樣品含量測定各取0.20gS1～S24批淫羊藿樣品，按照1.2.1方法制備供試品溶液，以1.2.3的色譜條件進(jìn)樣分析，每個(gè)樣品分別檢測3次，得到各峰峰面積并計(jì)算淫羊藿苷等6種指標(biāo)成分的含量。2.6

討論2.6.1

精密度實(shí)驗(yàn)本研究以2020版中國藥典中淫羊藿的總黃酮醇苷項(xiàng)的含量檢測方法為基礎(chǔ)，分別考察了超聲提取時(shí)提取溶劑（水、50%甲醇、70%甲醇、甲醇、50%乙醇、70%乙醇、乙醇）和提取時(shí)間（30、60、90min）對實(shí)驗(yàn)的影響，確定了淫羊藿指紋圖譜的最佳分析條件，能夠較為全面地體現(xiàn)出淫羊藿中的化學(xué)成分信息。2.6.2

精密度實(shí)驗(yàn)本研究增加了淫羊藿苷的活性代謝物淫羊藿次苷I、寶霍苷I作為指標(biāo)成分，基于HPLC分析方法建立了4個(gè)藥典品種淫羊藿的多指標(biāo)定量指紋圖譜，并結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)綜合評價(jià)淫羊藿藥材，從而完善淫羊藿質(zhì)量控制和評價(jià)體系。3

結(jié)論本實(shí)驗(yàn)通過多指標(biāo)定量指紋圖譜與化學(xué)計(jì)量學(xué)結(jié)合的方式建立淫羊藿質(zhì)量評價(jià)體系，對不同產(chǎn)地的4個(gè)藥典品種淫羊藿進(jìn)行研究，探究其質(zhì)量差異的潛在規(guī)律性，