細胞培養(yǎng)液中苯乙烯、2-氯乙醇的測定氣相色譜-質譜(GC-MS)法2024-03-15發(fā)布2024-03-15實施I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由全國生化檢測標準化技術委員會(SAC/TC387)提出并歸口。本文件起草單位：中國計量大學、煙臺開發(fā)區(qū)嘉量標準技術咨詢與研究中心、廣州潔特生物過濾股份有限公司、浙江經貿職業(yè)技術學院、中國測試技術研究院生物所、中國計量科學研究院、上海市質量監(jiān)督檢驗技術研究院、甘肅省食品檢驗研究院、杭州榮澤生物科技集團有限公司、安徽中盛溯源生物科技有限公司。1細胞培養(yǎng)液中苯乙烯、2-氯乙醇的測定氣相色譜-質譜(GC-MS)法本文件描述了氣相色譜-質譜(GC-MS)法測定細胞培養(yǎng)液中游離的苯乙烯、2-氯乙醇的方法。本文件適用于細胞培養(yǎng)液中游離的苯乙烯、2-氯乙醇的檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4原理在細胞培養(yǎng)液中加入內標物的同時加入無機鹽，促進揮發(fā)性物質從被測細胞培養(yǎng)液中揮發(fā)后進入氣相，通過自動頂空進樣器采集后進行GC-MS法聯(lián)用分析和確證苯乙烯和2-氯乙醇，用內標工作曲線法定量。5試劑和材料除非另有說明，本文件所用試劑均為色譜純。水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。5.1氯化鈉(NaCl)。5.2甲醇(CH?OH)。5.3標準品：苯乙烯、Dg-苯乙烯、2-氯乙醇、2-氟乙醇，純度≥99.5%,基本信息見附錄A。或經國家認證并授予標準物質/標準樣品證書的一定濃度的標準溶液。5.4標準儲備液：配制好后于2℃~8℃下密封保存，有效期為6個月。5.4.1苯乙烯(1mg/mL):準確稱量50.0mg苯乙烯標準品，用甲醇溶解后，定容于50mL容量瓶中，配制成終濃度為1mg/mL的對照儲備液。取2.5mL于50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混5.4.2D?-苯乙烯(1mg/mL):準確稱量50.0mgDg-苯乙烯內標標準品，用甲醇溶解后，定容于50mL容量瓶中，配制成終濃度為1mg/mL的對照儲備液。取0.5mL于50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻，配制成10μg/mL溶液作為中間儲備液。5.4.32-氯乙醇(10mg/mL):準確稱量100.0mg2-氯乙醇標準品，用甲醇溶解后，定容于10mL容量2瓶中，配制成終濃度為10mg/mL的對照儲備液。5.4.42-氟乙醇(10mg/mL):準確稱量100.0mg2-氟乙醇內標標準品，用甲醇溶解后，定容于10mL容量瓶中，配制成終濃度為10mg/mL的對照儲備液。5.5混合標準儲備液：分別用移液器準確吸取5.0mL苯乙烯(50μg/mL)、5.0mL2-氯乙醇(10mg/mL)于同一50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻，配制成濃度為苯乙烯5μg/mL、2-氯乙醇1mg/mL的混合標準儲備液。配制好后于2℃~8℃下密封保存，有效期為6個月。5.6內標工作溶液：用移液器準確吸取1.0mLD?-苯乙烯(10μg/mL)、0.5mL2-氟乙醇(10mg/mL)于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻，配制成濃度為D?-苯乙烯100ng/mL、2-氟乙醇50μg/mL的混合內標工作溶液。5.7標準工作溶液：用移液器將混合標準儲備液(5.5)準確用水稀釋50倍，制備成工作母液(苯乙烯100.0μg/L、2-氯乙醇20.0mg/L),再依次分別稀釋制備成苯乙烯25.0μg/L、10.0μg/L、5.0μg/L、2.5μg/L、1.0μg/L、0.5μg/L,2-氯0.1mg/L的各濃度混合標準工作溶液，各配制50mL,現(xiàn)配現(xiàn)用。6儀器設備6.1氣相色譜-質譜(GC-MS)儀：配電子轟擊源(EI源)。6.2自動頂空進樣器。6.3電子天平：分度值為0.001g和0.1mg。7試驗步驟7.1樣品制備取測定樣品7mL,經7000×g離心10min,用移液器準確吸取5.0mL上清液，置于20mL頂空瓶中，再用移液器準確加入100μL混合內標工作溶液(5.6),同時加入2g氯化鈉，密封并標識，現(xiàn)配現(xiàn)用。同時以超純水為空白樣，加入相同混合內標工作溶液和氯化鈉用于空白值的測定。7.2內標工作曲線制作用移液器準確吸取5.0mL各稀釋度混合標準工作溶液(5.7),置于20mL頂空瓶中，再分別用移液器準確加入100.0μL混合內標工作溶液(5.6),同時加入2g氯化鈉，密封并標識，現(xiàn)配現(xiàn)用。7.3樣品處理供試品瓶置于自動頂空進樣器中90℃加熱孵育30min。取2mL氣體頂空進樣，注入GC-MS系7.4儀器參考條件7.4.1氣相色譜參考條件如下：a)色譜柱：聚乙二醇(PEG)極性色譜柱(60m×250μm×0.25μm),或相當者；b)柱溫：70℃,保持4min;10℃/min升溫至200℃,保持3min;c)進樣口溫度：200℃;d)載氣流速(He):1.2mL/min;3GB/T43778—2024e)分流比：10:1。7.4.2質譜參考條件如下：a)離子源：電子轟擊源(EI源),溫度230℃,四極桿溫度150℃;b)檢測方式：選擇性離子監(jiān)測(SIM);c)選擇監(jiān)測離子及質譜參數(shù)，見附錄B;7.5氣相色譜-質譜測定7.5.1定性測定根據(jù)樣品中被測物與標準工作溶液中被測物的保留時間進行定性(用于定性的離子色譜圖見附錄C)。在相同的實驗條件下，若被測物的色譜峰保留時間和標準工作溶液的一致(變化范圍在±2.5%以內),所選擇的離子均出現(xiàn)，而且所選擇離子的相對豐度和對照品離子的相對豐度偏差不超過表1規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在對應的被測物。表1定性離子的相對豐度最大允許偏差士25士30士507.5.2定量測定在儀器最佳工作條件下，將含被測物溶液(7.1)制作內標工作曲線的溶液(7.2)依次進樣分析。以被測物和內標物的定量離子對峰面積比為縱坐標，以被測物的濃度為橫坐標繪制標準工作曲線，用標準工作曲線對樣品進行定量。應使樣品溶液中各被測物的響應值在儀器測定的線性范圍內，如果含量超過標準工作曲線范圍，應用水稀釋到合適濃度后再進樣分析。7.6平行試驗按照7.3對同一樣品進行樣品處理后，進行平行測定。8結果分析被測物的含量用質量濃度表示。按公式(1)計算被測物的質量濃度(p): (1)式中：p——被測物的質量濃度，苯乙烯單位為微克每升(μg/L),2-氯乙醇單位為毫克每升(mg/L);A;——樣品中被測成分峰面積；A。——空白樣中被測成分峰面積；A、——內標物峰面積；a——內標工作曲線斜率；b——內標工作曲線截距；4n——樣品稀釋倍數(shù)。計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留兩位小數(shù)。9精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不應超過算術平均值的10%。細胞培養(yǎng)液中苯乙烯檢出限為0.2μg/L,2-氯乙醇檢出限為50μg/L。5GB/T43778—2024(資料性)標準品基本信息A.1被測物標準品的信息見表A.1。序號中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子質量1苯乙烯styreneC?H?22-氯乙醇2-chloroethanolC?H?ClO80.52A.2內標物標準品的信息見表A.2。序號中文名稱英文名稱CAS號分子式相對分子質量1D?-苯乙烯C?D?22-氟乙醇6(資料性)被測物及內標物的選擇監(jiān)測離子及質譜參數(shù)B.1被測物的選擇監(jiān)測離子及質譜參數(shù)見表B.1。表B.1被測物的選擇監(jiān)測離子及質譜參數(shù)序號中文名稱保留時間/min定量離子定性離子1定性離子2駐留時間/ms1苯乙烯22-氯乙醇49.043.080.0B.2內標物的選擇監(jiān)測離子及質譜參數(shù)見表B.2。表B.2內標物的選擇監(jiān)測離子及質譜參數(shù)序號中文名稱保留時間/min定量離子定性離子1定性離子2駐留時間/ms1D?-苯乙烯84.122-氟乙醇64.07