中華人民共和國農業行業標準香草蘭豆莢中香蘭素的測定Determinationofvanillininvanillapods中華人民共和國農業部發布I本標準修改采用ISO5562-2:1999《香莢蘭測試方法》(英文版)。本標準根據ISO5562-2:1999重新起草。在附錄A中列出了本標準章條編號與ISO標準5562-2:1999章條編號的對照一覽表?？紤]到我國國情，在采用ISO5562-2;1999時，本標準做了一些修改。有關技術性差異已編入正文中并在它們所涉及的條款的頁邊空白處用垂直單線標識。在附錄B中給出了這些技術性差異及其原因的一覽表以供參考。本標準的附錄A、附錄B均為資料性附錄。本標準由農業部農墾局提出。本標準起草單位：農業部熱帶農業產品質量監督檢驗測試中心。本標準主要起草人：彭黎旭、方佳、吳莉宇、賀利民、馮信平、王明月、劉洪升。1本標準規定了屬于Vanillafragrans(Salisbury)Ames和sym.VanillaplanifoliaAndrews種的香草蘭中香蘭素測定方法。本標準適用于香草蘭豆莢、切段和粉末中香蘭素的測定。本標準不適用于香草蘭豆莢抽提物中香蘭素的測定。本標準描述了分析香蘭素的三個分析方法：a)高效液相色譜法；b)紫外分光光度法；c)氣相色譜法。2規范性引用文件下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。GB/T12806實驗室玻璃儀器單標線容量瓶3高效液相色譜法(仲裁方法)試樣進行抽提和稀釋，加入內標物，用高效液相色譜法(HPLC)分離，再用紫外檢測器測定香蘭素的含量。分析純試劑、蒸餾水、去離子水或相等純度的水。3.2.1乙醇，95%(體積分數)。3.2.3磷酸溶液：c(H?PO?)=0.01mol/L。3.2.4流動相：用25份甲醇(3.2.2)與75份稀磷酸(3.2.3)混合。用膜(3.3.3)過濾、脫氣。3.2.5香蘭素(4-羥基-3-甲氧基苯甲醛)為對照標樣，純度大于99%。3.2.6內標物：乙酰水楊酸，純度大于99%。3.2.7香蘭素儲備液：稱取一定量的香蘭素(3.2.5),精確至0.001g。用流動相配制成為濃度為1g/L的標準儲備液。3.2.8工作溶液用流動相(3.2.4)稀釋儲備液(3.2.7),獲得工作溶液，使工作溶液的濃度符合3.2.8.1中的要求。香蘭素工作溶液濃度為0.1g/L,可在4℃下暗處保存不超過10天。3.2.9內標物溶液將乙酰水楊酸(3.2.6)溶解于流動相(3.2.4)中，使其濃度為0.6g/L,稱量時精確至0.001g。3.3儀器3.3.1氣密研磨器。23.3.2單標容量瓶，容量為100mL和200mL,符合GB/T12806的要求。3.3.3過濾膜，孔徑為0.45μm。3.3.4連續型索氏抽提儀，由下列部件組成(見圖1)。圖1連續型索氏抽提儀——125mL索氏抽提器。——冷凝器。——250mL磨口燒瓶?！獰嵩矗簬в谢瑒幼冏杵骰蚱渌責岱绞降碾姛崽谆蛴驮　?.3.5高效液相色譜儀：——紫外檢測器；——進樣裝置；3.3.6注射器：用于高效液相色譜。3.3.7分析天平，精確度為0.001g。3.4試樣的制備將樣品(香草蘭豆英、切段或香草蘭粉)研磨并使之充分混勻。稱20g已制備好的樣品，準確至0.001g。在抽提儀器(3.3.4)中用大約200mL乙醇(3.2.1)抽提試樣(3.5)16h,即溶劑進行25次～30次循環。每一100g豆莢用1L溶劑抽提。將抽提物轉移至一個200mL的容量瓶(3.3.2)中。用少量的乙醇清洗抽提儀器中的燒瓶數次，并將洗出液加入容量瓶中，乙醇定容并混合均勻。用流動相稀釋該溶液10倍。3NY/T713—20033.7.2.3用10mL內標物與10mL3.2.7所得到的標準溶液混合。用膜過濾上 (1)4.3.4干燥器。4用移液管移取10mL溶液B1至100mL的容量瓶中。加入60mL乙醇和2mL氫氧化鈉溶液最大的吸收發生于350nm±3nm,其吸光度應在0.2～0.8之間。從大約270nm～380nm處畫 (3)5 E|?”——香蘭素的比吸光度(4.4.1.4);5氣相色譜法5.1原理5.2.4香蘭素標準品：純度大于99%。5.3.2索氏抽提儀(3.3.4)。5.5分析步驟5.5.1提取稱取樣品約2.5g(5.4),精確至0.001g。用無水乙醇抽提試樣16h,即溶劑進行25次～30次循5.5.2.1氣相色譜參考條件色譜峰的保留時間和峰高。根據組分在色譜上的出峰時間與標準組分比較6 (6)(資料性附錄)本標準章條編號與ISO5562-2章條編號對照表A.1本標準章條編號與ISO5562-2章條編號對照一覽表1122 334 55(資料性附錄)本標準與ISO5562-2技術性差異及其原因1苯甲酸”;c)改為b);增加了c)氣相色譜法測ISO