中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準進出口食品中稻瘟靈殘留量檢測方法Determinationofisoprothiolaneresiduesinfoodstuffs2008-11-18發布國家質量監督檢驗檢疫總局本標準的附錄A和附錄B均為資料性附錄。本標準由國家認證認可監督管理委員會提出并歸口。本標準起草單位；中華人民共和國黑龍江出入境檢驗檢疫局，中華人民共和國內蒙古出入境檢驗檢疫局。本標準系首次發布的出入境檢驗檢疫行業標準。進出口食品中稻瘟靈殘留量檢測方法24儀器和設備4.1氣相色譜儀：配ECD檢測器。4.2氣相色譜-質譜聯用儀：配負化學電離源。4.3電子天平；感量0.01mg.0.01g。4.4固相萃取裝置。4.5微波爐：650W。4.6粉碎機。4.7組織搗碎機。4.8離心機：4000r/min。4.9旋渦混合器。4.10旋轉蒸發器。4.11氮吹儀。4.12均質器：12000r/min。4.13具塞玻璃離心管：15mL、50mL。4.14無水硫酸鈉柱；8.0cm×1.5cm(內徑)玻璃柱，內裝5cm高無水硫酸鈉。5試樣制備與保存5.1試樣制備取有代表性樣品約500g(不可用水洗滌),將其可食部分切碎后，用組織搗碎機將樣品加工成漿狀，裝入潔凈容器作為試樣，密封并標明標記。取有代表性樣品約500g(不可用水洗),將其可食部分切成約2cm的段，裝入潔凈容器作為試樣，密封并標明標記。取有代表性樣品約500g.用粉碎機粉碎，混勻，裝入潔凈容器作為試樣，密封并標明標記。取有代表性樣品約500g,將其可食部分切碎后，用組織搗碎機將充分搗碎均勻，裝入潔凈容器作為試樣，密封并標明標記。取有代表性樣品約500g。對于無結品的群品將其攪拌均勻；對于有結品析出的樣品，在密閉情況下，將樣品置于不超過60℃的水浴中溫熱，待樣品全部融化后攪拌均勻，迅速冷卻至室溫。在融化時應注意防止水分揮發。裝入潔凈容器作為試樣，密封并標明標記。5.2試樣保存玉米、大米、茶葉、松籽仁、弊花籽仁、蜂資和牛奶等試樣于4℃以下保存；柑橘、蘋果、菠菜、大蔥、牛肝、雞腎和魚等試樣于—18℃以下保存。在制樣的操作過程中，應防止樣品污染或發生殘留物含量的變化。6測定步驟稱取試樣約5g(精確到0.01g)于50mL,離心管中，加入5g無水硫酸鈉(3.8)和20mL,乙腈(3.3),用均質器以10000r/min均質2min,4000r/min離心5min。將上清液轉移至100mL濃縮瓶中。再用20mL乙腈重復提取一次，合并提取藏于同一100mL濃縮瓶中，55℃旋轉濃縮至近干，再用氮氣流吹干。加入6mL.正已烷(3,2)溶解殘渣待凈化。稱取試樣約5g(精確到0.01g)于50ml.離心管中，加入10g無水硫酸鈉和20ml.正己烷-丙酮(3.9)溶液，用均質器以12000r/min均質2min,4000r/min離心5min。將上清液通過無水硫酸鈉柱脫水于100ml.濃縮瓶中。再用20mL正已燒-丙酮(3.9)溶液重復提取一次，合并提取波于同一100mL,濃縮瓶中.45℃旋轉濃縮至近干，再用氮氣流吹干。加入5mL正已烷溶解殘渣待凈化。稱取試樣約2g(精確到0.01g)于50mL離心管中，加入4mL飽和氯化鈉溶液(3.14),在旋潤混合器上充分混合0.5min,放置0.5h,加入20mL乙腈，用均質器以10000r/min均質2min,4000r/min離心5min。將上清液轉移至100ml.濃縮瓶中。再用20mL.乙腈重復提取一次，合并提取液于同一100mL.濃縮瓶中，55℃旋轉濃縮約5mL。將濃縮提取液轉移至250ml.分液漏斗中，加入100mL硫酸鈉溶液(3.15)和40mL正己烷，振搖2min,靜置分層，將上清液通過無水硫酸鈉柱脫水于200ml.濃縮瓶中。再用40ml.正己烷重復提取一次，合并提取液于同一200ml.濃縮瓶中，45℃旋轉濃縮至近干，再用氮氣流吹干。加入5ml.正己烷溶解殘渣待凈化。稱取試樣約5g(精確到0.01g)于50ml離心管中，加入15mL.水和5mL丙酮(3.1),在旋渦混合器上充分混合0.5min。然后加入5g氯化鈉(3.7)和20mL正己烷·在旋渦混合器上充分混合2min。4000r/min離心5min。將上清液通過無水硫酸的柱脫水于100mL濃縮瓶中。再用20mL正已烷重復提取一次，合并提取液于同一100mL濃縮瓶中，45℃旋轉濃縮至近干，再用氮氣流吹干。加入6mL30%甲醇溶液(3.12)溶解殘渣待凈化。稱取試樣約5g(精確到0.01g)于50mL離心管中，加入2g氯化鈉和20ml.正己烷-丙酮(3.9)溶液，在旋渦混合器上充分混合2min,4000r/min離心5min。將上清液通過無水硫酸鈉柱脫水于100ml.濃縮瓶中。再用20ml.正己烷重復提取一次，合并提取液于同一100ml.濃縮瓶中，45℃旋轉濃縮至近干，再用氮氣流吹干。加入6ml.正已烷溶解殘渣待凈化。稱取試樣約5g(精確到0.01g)于50ml.離心管中，置于微波爐(中火)中處理40s.加入2g氯化鈉和20mL乙腈，用均質器以10000r/min均質2min,4000r/min離心5min,將上清液轉移至預先加入100mL磷酸鹽緩沖溶液(3.16)的250mL分液漏斗中。再用20ml.乙睛重復提取一次，合并提取液于同一250mL分液漏斗中，加入40mL正己烷，振搖2min,靜置分層，將上清液通過無水硫酸鈉柱脫水于200mL濃縮瓶中。再用40mL正已烷重復提取一次，合并提取液于同一200mL濃縮瓶中，45℃旋轉濃縮至近干，再用氮氣流吹干。加入5mL正己烷溶解殘渣待凈化。將上述樣液全部轉移到中性氧化鋁固相萃取桂(3.20)中，控制流速在1ml,/min~2ml//min,棄去流出液。再自上而下將中性氧化鋁固相萃取柱與氟羅里硅土固相萃取柱(3.21)串接，加人10mL.正己烷-丙酮(3.11)溶液洗脫，控制流速在1mL/min～2mL/min.收集洗脫液。洗脫液經60℃氮吹儀吹干后，用正己烷溶解并定容5mL,供氣相色譜和氣相色譜-質諧儀測定。將上述樣液全部轉移到石墨炭黑固相萃取柱(3.19)中，控制流速在1mL/min~2mL/min,棄去流出液。再自上而下將石墨炭黑固相萃取柱與氟羅里硅土固相萃取柱申接，加入10mL.正已烷-丙酮4(3.10)溶液洗脫，控制流速在1mL/min~2mL/min,收集洗脫液。洗脫液經60℃氮吹儀吹干后，用正己烷溶解并定容5mL,供氣相色譜和氣相色譜-質譜儀測定。將上述樣液全部轉移到石墨炭黑固相萃取柱中，控制流速在1ml/min~2mL/min.棄去流出液。再自上而下將石墨炭黑固相萃取柱與氟羅里硅土固相萃取柱串接，加入10ml.正己烷-丙酮(3.10)溶液洗脫控制流速在1mL/min~2mL/min,收集洗脫液。洗脫液經60℃氮吹儀吹干，用6ml.30%甲醇溶液(3.12)溶解殘渣轉移到HLB固相萃取柱(3.22)中，控制流速在1mL/min~2mL/min.弄去流出液。加入14mL80%甲醇溶液(3.13)溶液洗脫，控制流速在1mL/min~2mL/min.收集洗脫液。洗脫液經60℃氮吹儀吹至約3mL后，準確加入2mL正己烷和5mL硫酸鈉水溶液，在旋潤混合器上充分混合2min,在3000r/min下離心3min。取上清液供氣相色譜和氣相色譜-質譜儀測定。將上述樣液全部轉移到HLB固相萃取柱上，控制流速在1mL/min~2ml/min,棄去流出液。加入14mL80%甲醇溶液(3.13)溶液洗脫，控制流速在1mL/min～2mL/min,收集洗脫液。洗脫液經60℃氮吹儀吹至約3ml.后，準確加入5ml.正已烷和5ml.硫酸鈉水溶液，在旋渦混合器上充分混合2min,3000r/min離心3min。取上清液供氣相色譜和氣相色譜-質譜儀測定。將上述樣液全部轉移到氟羅里硅土固相草取柱上，控制流速在1mL/min～2mL/min,棄去流出液。加入10mL正已燒-丙酮(3.10)溶液洗脫，控制流速在1mL/min~2mL/min,收集洗脫液。洗脫液經60℃氮吹儀吹干后，用正已烷溶解并定容5mL,供氣相色譜和氣相色譜-質諾儀測定。6.3.1氣相色譜條件a)色譜柱；R1x-1701石英毛細管柱，30m×0.25mm(內徑》×0.25pm或相當者；20℃/min升至270℃,保持3min;c)進樣口溫度：260℃;d)檢測器(ECD)溫度：350℃;e)載氣：氮氣，純度大于99.999%,恒流模式，1.0ml,/min;g)進樣方式：無分流進樣，0.75min后開閥。6.3.2氣相色譜-質譜條件a)色譜柱；DB-5ms石英毛細管柱，30m×0.25mm(內徑)×0.25μm或相當者；20℃/min升至270℃,保持3min;c)進樣口溫度：260℃;d)色譜-質諧接口溫度：280℃;e)載氣：氮氣，純度大于99,999%,恒流模式，1.0mL./min;g)進樣方式：無分流進樣，0.75min后開閥；h)電離方式：負化學電離；i)電離能量；174.7eV;j)離子源溫度；150℃;k)四極桿溫度：150℃;1)反應氣；甲烷，純度大于99.99%; (1)添加濃度/(pg/kg)謬加濃虛/(pg/kg)5555555魚55S5555樣品的深加濃度及回收率的數據見表3。添加濃度/(pg/kg)謬加濃虛/(pg/kg)5555555魚55S555573.4~103.(資料性附錄)(資料性附錄)DeterminationofisoprThisstandardspecifiesthemethodofdeterminatiThisstandardisapplicabletothedetermaize,orange,apple,spinach.scallion.pinenutkernel,sunflowerseedTheisoprothiolaneresiduesinthetesacetonitrile.Aftertheextractsisevaporated,theresid(SPE)withagraphitizodcarbonblankcartridgeortridgeorHLBcartridge.TheresiduesUnlessotherwisespecifisd.allreagentsareanalyticallypure,"water"i3.3Acetonitrile:LCgr4.1Gaschromatographyequipped4.2Gaschromatography-massspectrometryequippedwithnegativechem4.5Micro-waveove4.11Nitrogen4.12Highspeedhomogenizar:124.13Centrifugetubeswithgroundstopper4.14Columnofanhydroussodiumsulfate:8.0cm×1,5cm(i.d.),anhydroussodiumsulf5.1.1Orange,appleandsTakeapproximately500gofrepresentatandcrushedintopulpwithatissuehomogeniatcomparableconcentrations.theallowedrelativedeviationofrelativeintenthetable1tolerance,thesamecompoundinsamplemustbeconfirmed.UndeTable1—MaximurmpermittedtolerancesforrelativeioniCalculatethecontentofisoprothiolaneresidueinthetestsamplebyGC.GC-MSDdataprocessc—theconcentrationofisoprothiolaneinthestandardworkingsolu