超氧化物歧化酶sod的生產超氧化物歧化酶sod的生產第1頁

超氧化物歧化酶sod的生產第2頁一.SOD概況二.SOD利用三.SOD生產四.SOD活力測定超氧化物歧化酶sod的生產第3頁一.SOD概況1.SOD概念超氧物歧化酶（SuperoxideDismutase簡稱SOD）是一個新型酶制劑。它在生物界分布極廣，幾乎從動物到植物，甚至從人到單細胞生物，都有它存在。SOD被視為生命科技中最具神奇魔力酶、人體內垃圾清道夫。SOD是氧自由基自然天敵，是機體內氧自由基頭號殺手，是生命健康之本。全球118位科學家發表聯合申明：自由基是百病之源，SOD是健康之本。體內SOD活性越高，壽命就越長。

超氧化物歧化酶sod的生產第4頁2、SOD分類超氧化物歧化酶sod的生產第5頁3、作用原理⑴基礎原理

SOD屬于金屬蛋白酶，按照結合金屬離子種類不一樣，該酶有以下三種：含銅與鋅超氧化物歧化酶（Cu-ZnSOD）、含錳超氧化物歧化酶（Mn-SOD）和含鐵超氧化物歧化酶（Fe-SOD）。三種SOD都催化超氧化物陰離子自由基，將之歧化為過氧化氫與氧氣。超氧化物歧化酶sod的生產第6頁超氧化物歧化酶sod的生產第7頁⑵人體內自由基在細胞因為自由基非常活潑，化學反應性極強，參加一系列連鎖反應，能引發細胞生物膜上脂質過氧化，破壞了膜結構和功效。它能引發蛋白質變性和交聯，使體內許多酶及激素失去生物活性，機體免疫能力、神經反射能力、運動能力等系統活力降低，同時還能破壞核酸結構和造成整個機體代謝失常等，最終使機體發生病變。超氧化物歧化酶sod的生產第8頁4.SOD理化性質

3.1SOD對氰化物和H2O2敏感性

3.2SOD吸收光譜特征3.3SOD穩定性及影響原因超氧化物歧化酶sod的生產第9頁5.SOD作用它催化超氧陰離子轉化為H2O2和O2反應，即催化超氧陰離子自由基O2-·發生歧化反應，從而去除O2-·，2O2-·+2H+→H2O2+O2，在生命體自我保護系統中起著極為主要作用，在免疫系統中也有主要功，因而它能防御氧毒性，增強機體抗輻射損傷能力，防衰老。超氧化物歧化酶sod的生產第10頁超氧化物歧化酶sod的生產第11頁6、測定超氧化物歧化酶（SOD）催化底物是O2，普通多以一定時間內產物生成量或底物消耗量作為酶活性單位。因為O2本身很不穩定，且不易制備，測定SOD方法除少數采取直接法外，普通多為間接法。常見有：⑴鄰苯三酚自氧化法⑵細胞色素C還原法（McCord法）⑶化學發光法⑷免疫學方法

⑸電泳法超氧化物歧化酶sod的生產第12頁3.1SOD對氰化物和H2O2敏感性長時間用過氧化氫處理可使CuZn-SOD和Fe-SOD失活，而Mn-SOD不受影響超氧化物歧化酶sod的生產第13頁3.2SOD吸收光譜特征CuZn-SOD含有獨特紫外吸收光譜。因為色氨酸和酪氨酸含量較低，它在280nm處并沒有最大吸收峰。CuZn-SOD可見光最大吸收波長都在680nm左右，這反應了酶分子中Cu2+光學特征。超氧化物歧化酶sod的生產第14頁3.3SOD穩定性及影響原因PH、熱、蛋白酶影響：SOD在pH5.3～9.6間催化性能良好，在pH4.5～pH11間能穩定存在。pH3.6時，CuZn-SOD中95%Zn要脫落，在pH12.2時，SOD構象會發生不可逆轉變而使酶失活。

SOD對熱穩定性與溶液中離子強度相關。當離子強度很低時,即使加熱到95℃,其活性損失也極少其它原因：SOD活性受飲料色澤、成份、酸堿度、乙醇含量等各種原因影響，只有在無色、近中性、無乙醇飲料中SOD活性較穩定。另外還發覺有機溶劑和Cl對SOD活性具抑制作用超氧化物歧化酶sod的生產第15頁二SOD利用1.藥品SOD是一個新型抗炎癥藥，依據SOD作用機制和毒性試驗，它對治療因O2-·引發各種疾病都有一定療效。為此，SOD可作為抗衰老、抗炎癥、本身免疫疾病患者廣泛應用醫藥品。另外，SOD對治療貝切特氏癥、心肌梗塞等血虛性心臟病、膠原病、新生兒呼吸困難綜合癥、防御放射性傷害等也可望有效。

超氧化物歧化酶sod的生產第16頁二SOD利用2.添加劑國外不少高級化裝品都添加SOD，我國也有數家工廠或企業在開發和生產SOD化裝品，如大寶SOD密，康妮SOD、SOD康舒達霜劑等。SOD作為化裝品添加劑主要有3個優點：（1）有顯著防曬效果（2）可防皮膚衰老，阻止紫褐質（老年斑）形成（3）有顯著抗炎效果，對防治皮膚病有一定效果。國外把SOD作為食品添加劑例子是加在口香糖和飲料中。我國貴州農學院已開發出刺梨SOD飲料。SOD及修飾過SOD還可作為外用藥膏、眼藥及牙膏等添加劑

超氧化物歧化酶sod的生產第17頁二SOD利用3.生化試劑國外已經有數家企業如Sigma企業等出售SOD試劑，我國也有廠家批量生產SOD試劑，如中科院上海生化所東風試劑廠、南京建成生物工程研究所等。另外，SOD有可能作為一些疾病探針，如郭彥等人認為腦瘤組織線粒體Mn-SOD降低是轉化細胞可靠生化指標之一，并可作為評定腦瘤分化程度參考。

總而言之，伴隨大家對SOD更廣泛深入研究，不一樣類型SOD、SOD修飾物及人工有機合成SOD模擬酶將在醫療、保健、食品、農業增產等方面發揮出更大作用。

超氧化物歧化酶sod的生產第18頁三.SOD生產

1.SOD酶提取稱取5克大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎細胞后，加入pH7.8,0.05mol/L磷酸緩沖液（pH7.8）15ml，繼續研磨20min,使SOD酶充分溶解到緩沖液中，然后6000r/min冰凍離心15min，放棄沉淀，取上清液。

2.去除雜蛋白上清液中加入0.25倍體積氯仿——乙醇混合液攪拌15min,6000r/min離心15min，放棄沉淀，得到上清液即是粗酶液

3.SOD酶沉淀分離粗酶液在攪拌下遲緩加入固體硫酸銨至飽和濃度60%，連續攪拌15min，6000r/min離心15min，得到SOD酶沉淀超氧化物歧化酶sod的生產第19頁三.SOD生產4.將沉淀溶入pH7.8，0.05mol/L磷酸緩沖液5mL中，然后6000r/min離心15min，放棄沉淀，取上清液，用凝膠sephacylS-200進行純化，然后超濾濃縮。5.用紫外分光光度計測定濃液蛋白含量6.將濃縮冷凍干燥后即得成品。超氧化物歧化酶sod的生產第20頁四、超氧化物歧化酶（SOD）測定原理連苯三酚在堿性條件下，能快速自氧化，釋放出O2-,生成帶色中間產物。在自氧化過程初始階段，黃色中間產物積累在滯后30-45s后就與時間展現性關系。中間產物在325nm處有強烈光吸收，在有SOD存在時能催化生成O2和H2O2，從而阻止了中間產物積累，經過計算就能夠求出SOD活力。超氧化物歧化酶sod的生產第21頁儀器紫外分光光度計、pH計,離心機超氧化物歧化酶sod的生產第22頁試劑⑴0.05mol/L連苯三酚溶液：稱取3.15g連苯三酚用0.01mol/L鹽酸溶液溶解并定容至500ml⑵pH=8.3Tris-HCl緩沖溶液①0.1mol/L三羥甲基氨基甲烷（Tris）溶液:NH2C(CH2OH)3121.14取12.114g,溶解，定容至100ml②0.1mol/L鹽酸:取8.6(9)ml濃鹽酸，稀釋至1000ml③50毫升0.1mol/L三羥甲基氨基甲烷（Tris）溶液19.9_毫升0.1mol/L鹽酸混勻并稀釋至100毫升。(保留溫度:常溫密封避光保留)超氧化物歧化酶sod的生產第23頁測定步驟酶液制備稱取6g樣品，加于現在冰箱中放置緩沖液60ml(樣品10倍，視情況定)，在冰浴中研磨成勻漿，四層紗布過濾，濾液經4000r/min離心20min,取上清液用于酶活測定。超氧化物歧化酶sod的生產第24頁連苯三酚自氧化速率測定取4.5ml緩沖液，在25℃水浴中保溫15min,加入10連苯三酚液，快速搖勻空白：取4.5ml緩沖液，在25℃水浴中保溫15min,加入10緩沖液，快速搖勻倒入光徑1cm比色杯中，在325nm波長下于恒溫池中每隔30s測A值一次計算線形范圍內，每1minA增值，此即連苯三酚自氧化速率，要求自氧化速率控制在0.07OD/min超氧化物歧化酶sod的生產第25頁酶活測定測定方法與測連苯三酚自氧化速率相同，取1.5ml緩沖液，在25℃水浴中保溫15min,加入3ml酶液，加入10連苯三酚液，快速搖勻空白：取1.5ml緩沖液，在25℃水浴中保溫15min,加入3ml酶液，加入10緩沖液，快速搖勻計算加酶后連苯三酚自氧化速率超氧化物歧化酶sod的生產第26頁結果計算樣品酶活單位表示，SOD酶活單位（U）/g鮮重樣品酶活單位=式中——酶樣品在325nm處每分鐘光密度改變值

V——反應液體積

n——酶液稀釋倍數（若酶液足夠多，可不稀釋即n為1）超氧化物歧化酶sod的生產第27頁五.SOD使用及生產時注意事項1.SOD安全性大量試驗和臨床應用表明，不論何種給藥方式