第十六章螺旋體、支原體、衣原體、立克次體主講人：×××螺旋體支原體衣原體立克次體目錄教學要求掌握螺旋體、支原體、衣原體、立克次體的概念、特點及生物學特性。熟悉螺旋體、支原體、衣原體、立克次體的主要檢驗方法。123了解常見螺旋體、支原體、衣原體、立克次體的臨床意義。PART01螺旋體螺旋體螺旋體（spirochete）是一類細長、柔軟、彎曲、運動活潑、革蘭染色陰性的原核細胞型微生物。引起人類致病的主要有鉤端螺旋體屬、密螺旋體屬、疏螺旋體屬。

一、鉤端螺旋體（一）生物學性狀

1.形態與染色

大小為（6.0～12.0）μm×（0.1～0.2）μm，螺旋排列細密而規則，常呈S或C型常用Fontana鍍銀染色’。螺旋體（一）生物學性狀2.培養特性需氧或微需氧；Korthof培養基；最適溫度28℃～30℃；pH值為7.2～7.4；液體培養基：半透明云霧狀；固體培養基：透明、不規則的扁平菌落。3.抗原構造與分類

主要有屬特異性抗原、群特異性抗原和型特異性抗原。4.抵抗力

弱，對熱、常用消毒劑、青霉素等敏感，對酸、堿敏感，在中性的濕土或水中可存活數月。（一）生物學性狀鉤端螺旋體病為人獸共患性疾病，鼠類和豬為主要儲存宿主。臨床表現：發熱、頭痛、乏力、全身肌肉酸痛、眼結膜充血、淺表淋巴結腫大、腓腸肌壓痛等典型癥狀。（二）臨床意義（三）微生物學檢驗標本采集

患者發病1周內采取血液；1周以后取尿液；有腦膜刺激癥狀者取腦脊液。（三）微生物學檢驗直接鏡檢暗視野顯微鏡直接觀察；Fontana鍍銀染。分離培養標本接種至Korthof培養基，培養2周～4周，30天未生長者，可報告結果為陰性。123血清學檢查取雙份血清，檢測抗體的效價的變化。動物試驗4二、梅毒螺旋體（一）生物學性狀形態與染色：大小為（6.0～15.0）μm×（0.1～0.2）μm，暗視野顯微鏡觀察下呈移行、屈伸、滾動等方式運動。Fontana鍍銀染色成棕褐色培養特性：不能在無生命的培養基中生長繁殖。123抵抗力：抵抗力很弱，對熱、冷、干燥及一般消毒劑敏感。50℃5min、4℃3d、干燥環境中1～2h即可死亡。故血液4℃存放3d以上可避免傳染梅毒的危險。（二）臨床意義人是唯一的傳染源。主要通過性接觸傳播引起獲得性梅毒；也可經胎盤垂直傳播，引起胎兒先天性梅毒。獲得性梅毒具有反復、潛伏和再發的特點。臨床過程可分為三期：下疳期、梅毒疹期、慢性肉芽腫樣期。12（二）臨床意義主要出現生殖器無痛性硬下疳，潰瘍滲出液中有大量病原體，感染性強，可自愈；下疳期梅毒疹期慢性肉芽腫樣期全身皮膚、黏膜出現梅毒疹，疹內和淋巴結中存在大量螺旋體，傳染性強；病變波及全身組織和器官，引起缺血壞死，侵入中樞神經系統和心血管，可危及生命。（二）臨床意義（二）臨床意義先天梅毒可致胎兒全身感染，造成流產或死胎、馬鞍鼻、間質性角膜炎、先天梅毒心肌炎、耳聾等。（三）微生物學檢驗1.標本采集

可采取硬下疳滲出液、梅毒疹滲出液或局部淋巴結穿刺液等標本做直接檢查；血清學試驗可采集血液，分離血清送檢。

2.檢驗方法與鑒定（1）直接鏡檢：暗視野顯微鏡檢查運動情況；標本進行鍍銀染色，鏡下可見棕褐色密螺旋體；（三）微生物學檢驗

2.檢驗方法與鑒定（2）血清學檢查：測定特異性抗體。有非特異性和特異性兩類試驗。非特異性為非密螺旋體抗原試驗（以牛心肌的心脂質作為抗原，測定患者血清中反應素）常用于初篩，常用的方法VDRL、RPR、TRUST等。特異性為密螺旋體抗原試驗(以密螺旋體抗原檢測患者血清中特異性抗體)用于梅毒確認，常用的方法有FTA-ABS、MHA-TP、TPPA、ELISA等。（三）微生物學檢驗梅毒螺旋體的血清學試驗：非螺旋體抗原試驗、密螺旋體抗原試驗Ⅰ期梅毒陽性率70％；Ⅱ期可達100％，Ⅲ期較低，先天梅毒陽性率80～100％。三、其他常見螺旋體（一）伯氏疏螺旋體

是萊姆病的病原體，主要傳播媒介為硬蜱。微生物學檢查：采用血清學試驗和分子生物學技術。蜱Ixodes體虱吸回歸熱病人血后三、其他常見螺旋體（二）回歸熱疏螺旋體

是引起人類虱傳回歸熱（流行性回歸熱）的病原體，以體虱為傳播媒介。取外周血制成厚血片，用暗視野顯微鏡或Giemsa染色后鏡檢，可見形似卷曲毛發的螺旋體。三、其他常見螺旋體（三）奮森疏螺旋體常與梭桿菌共同寄居于人類口腔牙齦協同引起潰瘍性牙齦炎、咽峽炎、潰瘍性口腔炎等。微生物學檢查可用棉拭取牙垢或口腔分泌物制成涂片，革蘭染色鏡檢可見革蘭陰性螺旋體；鍍銀染色鏡檢可見棕褐色或黑褐色螺旋體。PART02支原體支原體支原體(mycoplasma)是一類沒有細胞壁、呈高度多形性、能通過細菌濾器、可在無生命培養基中生長繁殖的最小的原核細胞型微生物。對人類致病的主要有肺炎支原體、人型支原體、生殖道支原體和解脲脲原體等。（一）生物學特性1.形態與染色

大小為0.2μm～0.3μm。無細胞壁，呈高度多形態性革蘭染色為陰性。常用Giemsa染色，呈淡紫色。（一）生物學特性培養特性營養要求較高，需加入10～20%滅活馬血清。最適pH7.6～8.0（解脲脲原體最適pH為6.0～6.5),最適生長溫度37℃。需氧或兼性厭氧。以二分裂繁殖，生長慢。固體培養基中，呈典型的“油煎蛋”樣。肉湯培養基培養時，呈極淺淡的混濁。（一）生物學特性支原體與L型細菌的區別

生物學特性支原體L型細菌存在條件廣泛分布于自然界多見實驗條件下誘導產生培養條件在培養基中穩定，需加膽固醇需高滲培養，不需要膽固醇菌落性狀油煎蛋樣菌落、較小、直徑為0.1～0.3mm油煎蛋樣菌落、稍大、直徑為0.5～1mm液體培養基中混濁度較低有一定混濁度其他遺傳上與細菌無關，天然無細胞壁可回復變為有細胞壁的細菌（一）生物學特性

3.生化反應

根據分解葡萄糖、利用精氨酸、水解尿素等，可初步鑒定支原體。支原體種類葡萄糖精氨酸尿素肺炎支原體＋－－人型支原體－＋－生殖器支原體＋－－穿透支原體＋＋－解脲脲原體－－＋各種支原體的主要生化反應（一）生物學特性4.抵抗力抵抗力比細菌弱，對熱、干燥、低滲及多種消毒劑敏感，但對醋酸鉈、結晶紫和亞碲酸鹽有較強耐受性。（二）臨床意義主要引起人類口腔、呼吸道、泌尿生殖道感染等。肺炎支原體

可引起人類原發性非典型肺炎，大多發生于夏末秋初，以兒童和青少年感染多見，主要通過呼吸道飛沫傳播。解脲脲原體、人型支原體和生殖道支原體可通過性接觸傳播，引起人類非淋球菌性和非衣原體性泌尿生殖道感染。（三）微生物學檢驗

1.標本采集采集患者的痰、咽拭子、鼻咽洗液、支氣管分泌物、穿刺液、尿道和子宮頸拭子及各種分泌物等，宜采用拭子標本。標本即采即種；或置于蔗糖磷酸緩沖液中。（三）微生物學檢驗2、支原體鑒定要點（1）肺炎支原體：二步培養法；固體培養基上，長出致密圓形的油煎蛋樣菌落①溶血試驗：8%的豚鼠紅細胞②生長抑制試驗：特異性高（三）微生物學檢驗2、支原體鑒定要點（2）解脲脲原體：接種于液體培養基中（內含尿素和酚紅指示劑，pH值為6.0±0.5）①代謝抑制試驗：②生長抑制試驗：PART03衣原體衣原體是一類嚴格細胞內寄生、有獨特發育周期、能通過細菌濾器的原核細胞型微生物。能引起人類疾病的衣原體主要有沙眼衣原體、肺炎衣原體和鸚鵡熱衣原體，其中最常見的是沙眼衣原體衣原體(chlamydia)衣原體性狀沙眼衣原體肺炎衣原體鸚鵡熱衣原體所致疾病沙眼、性傳播疾病、肺炎（幼兒為主）肺炎（少兒為主）、呼吸道感染肺炎（青少年為主）、呼吸道感染自然宿主人和小鼠人禽類和低等哺乳動物原體形態圓形、橢圓形梨形圓形、橢圓形對磺胺類藥物的敏感性敏感不敏感不敏感（一）生物學特性1.形態染色與生活周期（如下圖）（一）生物學特性胞質內形成的包涵體（一）生物學特性2.培養特性

衣原體為專性細胞內寄生；細胞培養法，是衣原體診斷的金標準。3.抵抗力抵抗力較弱，對熱和常用消毒劑敏感。（二）臨床意義沙眼衣原體可分為沙眼生物亞種、性病淋巴肉芽腫亞種和鼠亞種三種，對人致病的為前兩個亞種。沙眼生物亞種：引起沙眼、包涵體性結膜炎；泌尿生殖道感染（如宮頸炎、輸卵管炎、附睪炎等)、某些沙眼生物亞種的血清型還可引起嬰幼兒肺炎。性病淋巴肉芽腫亞種：通過性接觸傳播，可引起性病淋巴肉芽腫。

1、沙眼衣原體（二）臨床意義主要經飛沫和呼吸道分泌物傳播引起急性呼吸道疾病，如肺炎、支氣管炎、咽炎等。也可引起如慢性支氣管炎、哮喘等慢性感染。2、肺炎衣原體人多因與家禽或家畜接觸而感染，可表現為非典型肺炎，稱為鸚鵡熱。3、鸚鵡熱衣原體（三）微生物學檢驗根據不同疾病采取不同標本。1.標本采集沙眼或包涵體性結膜炎患者泌尿生殖道感染者眼穹窿眼結膜分泌物眼結膜刮片精液宮頸刮片泌尿生殖道拭子尿液標本（三）微生物學檢驗性病淋巴肉芽腫患者肺炎衣原體感染直腸拭子淋巴結膿液生殖道上皮細胞刮片活檢材料送檢痰液、鼻咽部拭子支氣管肺泡灌洗液耳或鼻咽部的吸取物血液標本鸚鵡熱衣原體感染咽喉洗漱液痰液和血液（三）微生物學檢驗Giemsa染色：包涵體染色：直接免疫熒光染色(DFA)法直接涂片染色鏡檢血清學檢查分子生物學檢查用PCR檢測技術、核酸雜交技術，提高檢測的敏感性和特異性。2.檢驗方法與鑒定PART04立克次體立克次體立克次體（rickettsia）是一類嚴格細胞內寄生、以節肢動物為傳播媒介、革蘭陰性的原核細胞型微生物。常見的立克次體有普氏立克次體、莫氏立克次體、恙蟲病立克次體、Q熱立克次體。（一）生物學特性

1.形態與染色大多呈桿狀或球桿狀，大小為（0.8～2.0）μm×（0.3～0.6）μm，革蘭染色陰性，Giemsa染色呈紫藍色。2.培養特性只能在活的真核細胞內生長，二分裂繁殖。培養立克次體常用的方法有動物接種、雞胚培養和細胞培養。（一）生物學特性3.抗原結構用變形桿菌OX19、OX2、OXK菌株代替相應的立克次體進行非特異性凝集反應，以檢測人體血清中有無相應抗體，此反應稱為外斐反應（Weil-Felixreaction），可用于立克次體病的輔助診斷。4.抵抗力不耐熱，對常用消毒劑敏感，對低溫、干燥抵抗力較強。（一）生物學特性立克次體變形桿菌OX19OX2OXK普氏立克次體＋＋＋＋－莫氏立克次體＋＋＋＋－恙蟲病立克次體－－＋＋＋Q熱立克次體－－－主要立克次體與變形桿菌菌株抗原交叉現象（二）臨床意義普氏立克次體流行性斑疹傷寒病原體。患者是唯一的傳染源，人體虱是主要傳播媒介，經虱﹣人﹣虱方式傳播。莫氏立克次體地方性斑疹傷寒的病原體。鼠是主要貯存宿主，經鼠蚤或鼠虱傳播。當鼠蚤叮吮人體時，把立克次體傳染給人。恙蟲病次體恙蟲病的病原體，為自然疫源性傳染病，傳染源是鼠類，恙螨既是傳播媒介，又是貯存宿主。（三）微生物學檢驗1.標本采集主要是采集患者急性期血液以供病原體的分離；也可采集病程早期和恢復期雙份血清來檢測患者體內抗體滴度的變化。（三）微生物學檢驗1直接鏡檢通常采用Gimenez染色法，立克次體為紅色，背景呈綠色。3血清學檢查取患者雙份血清做外斐反應，效價升高4倍以上可作為新近感染立克次體的指標。單份血清凝集效價超過1﹕160時才有診斷意義。2分離培養豚鼠、小白鼠和雞胚卵黃囊對多數立克次體敏感，可將標本接種于其中進行分離培養4分子生物學檢測應用PCR和核酸探針技術檢測。2.檢驗方法與鑒定目標檢測1.梅毒血清學試驗的非密螺旋體抗原試驗，所用的抗原為A.疏螺旋體抗原

B.雅司螺旋體C.梅毒螺旋體D.牛心類脂質

E.病損處組織2.通過接觸疫水致病的是A.梅毒螺旋體

B.雅司螺旋體C.鉤端螺旋體D.回歸熱螺旋體

E.奮森螺旋體3.下列屬于梅毒確證試驗的檢驗方法是A.VDRLB.RPRC.USRD.TRUSTE.MHA-TP目標檢測4.易引起兒童、青年呼吸道感染的病原體是A.沙眼衣原體B.斑疹傷寒立克次體C.伯氏疏螺旋體D.肺炎衣原體E.肺炎支原體5.分離培養解脲脲原體的氣體環境是A.85%N2、10%O2、5%CO2B.90%N2、10%O2C.