摘要非洲豬瘟是全世界養豬業所面臨的共同問題，該病自上世紀二十年代開始，到目前為止仍未研究出有效的預防措施。病程短、致死率高、難治愈和康復豬仍帶毒等特征增加了其防控的難度，目前全世界對非洲豬瘟的防控手段較為局限，只能在發生疫情后立即對病豬群體進行撲殺，以控制其蔓延，這給養殖戶造成極大的經濟損失。自2018年我國發生疫情后，養殖行業尤其是生豬養殖業發展前景低迷，阻礙整體養殖行業的快速發展，人民對豬肉制品的需求得不到滿足，日常生活受到影響。本文主要從非洲豬瘟的起源發展、病原學、流行病學、診斷技術和防控措施幾方面對非洲豬瘟進行簡單概述，希望對我國的疫情防控與根除提供有效的參考。關鍵詞：非洲豬瘟；非洲豬瘟病毒；實驗室診斷；防治措施

目錄TOC\o"1-3"\h\u7320引言 引言2018年八月我國首例非洲豬瘟疫情發生，在此后短短幾月內迅速蔓延至我國的各個省市，一時間非洲豬瘟成為了熱門話題，豬肉的價格也在此次疫情中迅速上漲[1]。由于疫情發生進行大量的焚燒撲殺以及生豬跨區域運輸受限，供應鏈中斷，市場豬肉供應減少，供需失衡，豬肉價格猛增，同時，盡管我國相關部門在疫情初期就對網上的一些不實言論進行了辟謠，并解釋的非洲豬瘟不是人畜共患病，但是民眾仍心有余悸，這也導致了疫區周邊的養殖區生豬積壓在欄內，更加劇了豬肉市場的供求不平衡。2019年由于非洲豬瘟疾病廣受關注，導致非洲豬瘟疫苗的研發也越來越熱門，一些無質量保證的疫苗流入市場，致使非洲豬瘟的防控局面被破壞，同時造成了許多非洲豬瘟病毒的變異株出現，給我國對抗非洲豬瘟的問題上增加了難度[2]。1非洲豬瘟的病原學分析1.1基本組成非洲豬瘟病毒是非洲豬瘟病毒科非洲豬瘟病毒屬里的唯一成[3，該病毒有許多基因型，其中散布在中、西非的屬于I型非洲豬瘟病毒，于上世紀五十年代末傳入歐洲，現在意大利是其基因型的主要分布地區；俄羅斯和東歐的病毒主要是II型。非洲豬瘟病毒是雙鏈DNA病毒，其遺傳物質是尾端閉合的單分子線狀，整個基因組包含可以編碼近兩百種蛋白質的遺傳信息[1]。P72蛋白是構成其病毒體的主要蛋白之一，主要存在于衣殼表面，能夠刺激機體免疫系統產生免疫物質。通常在病毒感染的晚期表達。此外，它還能夠與感染豬的血清發生反應，這一特性通常用于各類血清學檢測技術中。非洲豬瘟病毒表面具有囊膜包被，所以有較強的外界適應能力，可在分泌物和環境中長期存活。非洲豬瘟病毒粒子是由囊膜、衣殼、內膜、內核心殼、含病毒基因組DNA的擬核五部分組成[4]。1.2生命周期非洲豬瘟病毒的生命周期可以分為5個階段，分別是病毒吸附、入侵機體、病毒復制、包裝和出芽[5]。病毒入侵后，最先感染單核巨噬細胞，病毒通過胞吞進入細胞，并進行早期核糖RNA的轉錄，目前，非洲豬瘟病毒早期在核內復制的遺傳物質被轉運到細胞質進行復制加工同時進行病毒粒子的包裝，最后通過出芽生殖的方式形成囊膜這一觀點受到大眾認同。1.3免疫逃逸機體在長時間的進化過程中逐步形成了一定的抵抗外來病原入侵的能力，這一能力稱為機體的固有免疫機制。根據物競天擇，適者生存的規則，病原體通過改變形態和結構或合成某些生物代謝物質，對宿主的免疫應答產生抑制影響，從而入侵感染目標細胞，完成病毒的定殖目的，這一生理過程就是免疫逃逸。免疫逃逸機制可以簡單的分成三個類型：a.抗原突變。病毒簡單的結構組成可以持續性的進行抗原的突變，從而逃避宿主細胞的天然免疫應答。b.持續感染。病原體可以在宿主細胞內持續的存在，平時不會致病也不會被細胞自身的免疫反應清除。c.免疫抑制[6]。非洲豬瘟疾病早在上世紀已經出現，但直至現在，全球仍沒有安全有效的疫苗來對抗這一疾病，造成這一問題的主要原因就是非洲豬瘟病毒粒子復雜的免疫逃避機制。非洲豬瘟病毒能夠合成許多與免疫逃逸機制相關的蛋白，通過調節宿主相關細胞活動或相關蛋白合成從而避免被宿主的固有免疫應答清除。目前研究對非洲豬瘟病毒的免疫逃逸機制還沒有足夠清晰的了解，但有學者推測[7]，非洲豬瘟病毒主要通過調節細胞內具有抗病毒能力的分泌蛋白、影響宿主細胞的炎癥反應、調節宿主細胞程序性死亡進程、合成蛋白抑制宿主細胞自噬，并影響宿主的蛋白合成等方面進行免疫逃逸。除此以外，非洲豬瘟還可可以影響宿主細胞的抗原呈遞過程以及宿主的細胞和體液免疫過程。但是目前我們對病毒具體的免疫逃避原理及相關結構的作用仍不清楚，這還需要我們科研人員的繼續探索。2非洲豬瘟的診斷方法2.1臨床診斷2.1.1臨床特征非洲豬瘟發病早期臨床特征不明顯，易與其他疾病混淆，不易區分，當出現明顯臨床癥狀時，機體已經存在大量病毒。非洲豬瘟主要表現為高熱(42℃)、嘔吐、腹瀉便秘，甚至出現便血，發病豬極度虛弱，常趴臥，體表呈紅、紫或藍色，以耳、鼻、腹部和臀部最為明顯，呼吸困難，孕期感染后會出現流產[8]。根據特征表現，把該病分為四個類型。最急性型和急性型死亡率極高，通常發病即死亡。其中最急性型多表現急性死亡且無其他臨床癥狀。急性型出現典型臨床癥狀，體溫升高達42℃，精神持續低迷，食欲和飲欲不高，部分可出現絕食，耳、前肢腹部及后肢皮膚出血，眼、鼻內常流出粘稠的膿性分泌物，并伴有臭味，便秘甚至是便血，呼吸困難甚至出現神經癥狀。亞急性型的死亡率較低，但發病過程較長，體溫變化無明顯可循的規律，但常高于40℃，呼吸困難，有濕咳表現，關節出現腫脹和疼痛，通過治療后可康復或轉為慢性型，康復后的豬仍能帶毒。慢性型表現呼吸不暢，幼畜常表現發育緩慢，關節腫大，皮膚潰瘍壞死，發病后病情輕緩，病豬能存活數月，但不易康復，通常將慢性病豬進行淘汰。2.1.2剖檢病變我國非洲豬瘟疫病發生早期對病豬進行剖檢后總結出以下病變特征：脾臟顯著增大，一般可增大至正常的6倍，質地脆，顏色發暗；淋巴結水腫增大出血，其中以胃腸和腎臟的淋巴結表現最為典型；各器官出現充血出血，心外膜、膀胱、腎臟表面出現點狀瘀血，肺部充血和瘀血，氣管內有泡沫樣粘液，伴隨心包積液和腹水發生。2.2實驗室診斷2.2.1動物接種試驗非洲豬瘟與豬瘟的臨床癥狀十分相似，為更好的區分這兩種疾病，通常采用動物接種的實驗方式，將病毒接種于豬瘟的易感豬群和免疫豬群兩組做對照，若均不出現癥狀則可斷定該病毒不是豬瘟病毒和非洲豬瘟病毒，若兩組均出現癥狀則該病毒為非洲豬瘟病毒，若只有一組出現癥狀且該組為易感豬群則可判定為豬瘟病毒[8]。這一方法雖然理論上簡便直觀但是由于疫病的突發性和復雜性，具體的實用價值并不高。2.2.2聚合酶鏈式反應PCR技術適用于非洲豬瘟病毒任何毒力的毒株檢測，且對于感染時期沒有要求，同時該技術還可以檢測多種樣本種類，如病豬全血、組織、骨髓等。世界衛生組織推薦的常規PCR技術主要是用于擴增B646L基因的高度保守區域。曾少靈對VP73蛋白進行引物設計并創立的檢測非洲豬瘟病毒的PCR技術和世界衛生組織推薦使用的相比，在特異性相當的情況下，靈敏度高出至少100倍。PCR技術敏感性高、特異性強，是現在應用最廣泛的非洲豬瘟實驗室診斷方法，對于各種毒株均能很好的檢測，所以可用于非疫區國家的出入境檢疫或疫情檢測方面。2.2.3實時熒光定量PCR該技術與常規PCR實驗原理基本相同，僅是在其反應體系的基礎上多添加了熒光基團，從而克服了常規PCR僅能對終點產物進行分析的缺點。通過儀器對熒光基團光信號的收集并轉化為標準曲線，從而對PCR反應進程和起始模板量進行實時的監測。該技術主要分為染料法和探針法。該方法對于整個實驗進程均能控制和觀測，實驗結果數值化和圖像化，更為直觀，同時特異性高于常規PCR，更加的靈敏和穩定，此外熒光定量大多采用三復孔，從而提高的實驗結果的可信度，排除偶然性[10]，同時可以降低電泳產物分析帶來的污染。王華青等人對非洲豬瘟疑似病豬的淋巴結、全血等進行了實時熒光定量PCR，結果顯示這些組織均能檢測到非洲豬瘟病毒的擴增曲線，這說明該方法可以用于對非洲豬瘟的分子流行病學檢測。2.2.4紅細胞吸附試驗紅細胞吸附試驗是非洲豬瘟的常用確診方法，該試驗方法是利用非洲豬瘟病毒感染后的白細胞能夠與其紅細胞發生吸附反應，呈現玫瑰花環形狀的特性進行的，絕大多數毒株都能產生紅細胞吸附現象，尤其是以從非、歐兩地分離出來的毒株最為典型[21]但這一觀點在上世紀被Tubiash等人的發現改變了，他們發現了不能產生吸附現象的毒株故對紅細胞吸附試驗呈陰性的毒株需進一步做聚合酶鏈式反應或熒光抗體試驗從而更有可信度[11]。由于紅細胞吸附試驗對環境要求較高，且觀察時間長短與病料中的病毒含量相關，實用性較差，通常應用范圍不廣。2.2.5熒光抗體試驗熒光抗體試驗是通過對能夠與感染豬涂片中的抗原特異性結合的非洲豬瘟的二抗進行異硫氰酸熒光素進行標記，通過熒光對抗原進行檢測，該方法可以準確區分非洲豬瘟病毒和其他病毒，并可用于疑似感染的豬群進行抗原檢測，但該試驗方法容易在亞急性型或慢性型非洲豬瘟的檢測中出現敏感性降低的問題，從而容易出現假陰性結果，所以該方法通常用于抗原檢測的輔助檢測，如對紅細胞吸附試驗結果的進一步驗證。2.2.6酶聯免疫吸附實驗酶聯免疫吸附實驗是非洲豬瘟血清學診斷中最常用的方法，它是對豬的血清和組織液進行檢測，這種方法可以用于大批次的豬群進行篩查，適用于較低或中等毒力的病毒檢測，是I.T.O指定的官方診斷方法之一，目前被廣泛應用的ELISA試驗分為競爭法和間接法兩種，競爭法是通過包被后的非洲豬瘟病毒中，某些蛋白與病毒抗體產生反應，體系中的氧化物酶標記物也能與非洲豬瘟病毒反應，兩者形成競爭關系，通過氧化物酶標記物的顏色顯示來實現抗體的檢測，其中陽性樣本的顏色反應較淺，吸光度低，且阻斷效率與抗體效價呈負相關。間接法是通過單克隆抗體捕捉非洲豬瘟病毒粒子的這一特性，將病毒的VP73蛋白單克隆抗體包被在酶標板上，利用抗體和病毒粒子的特異性結合從而可以根據顯色判斷非洲豬瘟病毒存在與否，目前該方法最低可以檢測到的VP73蛋白質量濃度為0.05mg/L。現行的廣泛使用的試劑盒除了VP72蛋白外還有VP73蛋白和p54蛋白。但是對于亞急性型和慢性型病例的脂肪樣本，由于感染組織中的抗原抗體復合物阻斷了抗原與蛋白的交互作用，抗原ELISA方法的敏感度降低，需使用其他的檢測技術進行進一步的結果確認。3非洲豬瘟的防治措施3.1疫苗目前由于人類對非洲豬瘟病毒認識不夠全面，對其免疫過程不清楚，以及非洲豬瘟病毒不能使機體產生中和抗體等問題，國際上對于非洲豬瘟病毒疫苗的研制與否存在較大爭議，有人認為疫苗研制成功后勢必會對其他防控措施的重視程度造成影響，且非洲豬瘟病毒即使在完全保護狀態下仍不能避免強毒株的感染，反而會造成更大范圍的蔓延和更高的經濟損失[12]。此外，弱毒疫苗的使用可能會導致變異毒株的產生。但是由于我國的生豬養殖特點和國際貿易一體化進程的推進，疫苗的研制還是很有必要的。3.1.1滅活疫苗雖然滅活疫苗是大部分疾病最開始的疫苗研究的首選，但目前對于非洲豬瘟并沒有有效的滅活疫苗[13]。據研究推測，滅活疫苗沒有保護作用的原因可能是由于非洲豬瘟病毒內病毒顆粒和外病毒顆粒表面蛋白差異。3.1.2減毒活疫苗減毒活疫苗是將原有毒株在適宜的環境中傳代培養，從子代毒株中挑選出毒力較弱的病毒制成疫苗。減毒活疫苗是各類疾病疫苗研制的首要選擇。現有的疫苗類型根據其原有毒株的來源分為天然分離的減毒活疫苗和基因重組減毒活疫苗。據研究[14]，現有的減毒活疫苗僅對同源的病毒有保護作用。此外，減毒活疫苗接種后會有在宿主體內恢復毒力的風險，所以生物安全性較差。3.1.3基因缺失疫苗基因缺失疫苗是利用生物技術清除強毒株內管控毒力的基因片段，使其喪失毒力。同時利用刺激機體產生抗體的特性，從而達到保護機體的目的的技術手段。目前由于非洲豬瘟病毒基因組龐大，所以基因缺失疫苗領域龐大且存在有許多空白。目前國際上研究較多的是MGF和CD2v兩種基因的缺失疫苗。張艷艷[15]等人對該兩種基因均進行了試驗，結果發現，單缺失CD2v基因的病毒仍具有很強的毒性，只缺失MGF基因的雖然毒力降低，但高劑量時仍能引起豬的體溫升高；而同時將兩個基因都剪切后,病毒的毒力大大減弱，接種后發熱癥狀得到顯著改善。目前基因缺失疫苗被證實對具有同源性基因的毒株均有保護作用。基因缺失疫苗的安全性也是疫苗臨床應用與否的重要指標。在這方面的研究也需要我們廣泛關注。3.2消毒技術消毒技術是通過物理或化學方法，在保證病原微生物的免疫原性的基礎上消除病原微生物的感染毒性。由于目前還未有針對非洲豬瘟病毒的有效疫苗，所以主要依靠消毒檢測的方式及時發現病毒并消滅，防止病毒大肆蔓延。目前的消毒方法主要分化學、物理和生物消毒法以及生態修復法。3.2.1物理消毒法高溫消毒法和紫外消毒法是應用較為廣泛的兩種物理消毒技術，紫外消毒法主要是利用紫外線能夠破壞病毒的核酸從而殺死病原體。紫外線消毒法是目前最常用的方式之一，但是紫外線波長短，穿透力弱，且對人體有損傷作用，甚至可以致癌，所以用紫外線消毒時應嚴格控制人員進入消毒區域；由于非洲豬瘟病毒耐低溫不耐高溫的這一特性，高溫消毒法被廣泛應用于感染豬群的清除，如焚燒病死豬體，Mazur等根據數據統計預測非洲豬瘟病毒在零下二十攝氏度能夠存活的時間至少是353天；在四攝氏度可至少存活35天；二十三攝氏度則大約能夠存活十四天左右。在火焰溫度下非洲豬瘟病毒粒子可瞬間被滅活[16]。除了以上兩種常見的物理消毒法外，1983年γ射線被證實了具有消滅病毒微生物的作用[38]，且γ射線與紫外線相比具有穿透力強、滅活速度快且不會對病毒的免疫原性和反應原型產生影響的優點。3.2.2化學消毒法化學消毒劑中醛類和鹵素化學消毒劑對大多數的病毒都起作用，其消毒效果比較普遍，他們的作用方式是a.醛類化學消毒劑破壞病毒囊膜結構，與DNA作用干擾病毒粒子的基本代謝反應。b.鹵素消毒劑通過氧化蛋白質，中斷氧化磷酸化過程的原理來達到消毒的目的，具有很強的抗有機物能力。但是醛類消毒劑有致癌、致呼吸道過敏的缺點，而鹵素消毒劑沒有很好的穩定性。除了以上兩種消毒劑外，據研究結果顯示，多聚甲醛、戊二醛、次氯酸、過氧化物和苯酚等均對非洲豬瘟病毒作用效果明顯。3.2.3生物消毒劑理論上，生物消毒劑對囊膜病毒作用明顯，但是由于具有消毒作用的天然活性物質數量較少，故而不能進行大規模的應用。消毒技術不僅在疾病發生前期對疾病進行預防方面具有很高的價值，對于疫病發生中期防止進一步蔓延和疫病發生后期的復產工作均有很好的保障，所以做好消毒工作對于養殖有巨大意義，目前我國的消毒技術防控主要面臨的問題有a.科學養殖觀念不強。由于近幾年生豬養殖行業蒸蒸日上導致許多小型養殖戶紛紛加入進來，從而導致的養殖行業的參差不齊，許多基層養殖戶過度追求利益，無限縮小成本導致消毒問題無法解決，疫病復發頻出；b.消毒劑使用。消毒劑量和使用不規范也導致消毒不夠徹底，同時多種消毒劑混合使用等錯誤手段，不僅起不到消毒的作用，部分消毒劑反應還會引起中毒事件；c.存放問題。消毒劑的存放問題也是不能忽視的重要因素，大多數的消毒劑需放置在陰涼通風處，避免陽光直射。不同消毒劑之間存在差異。總結目前我國的生豬市場趨向平穩，非洲豬瘟疫情得到了初步的控制，對其病毒的認識也更加清晰和完善，同時加上國家和民眾對非洲豬瘟相關研究的大力支持和持續關注，越來越多的優秀科研人員加入到研究隊伍中來，此外科學飼養的觀念逐步出現在大眾的視野并為他們所接受，民眾經濟來源多樣化的發展以及我國養殖行業的不斷壯大和規范，使得以前的小戶型養殖逐漸退出舞臺，越來越多的大規模養殖企業崛起，同時隨著民眾思維觀念的改變，以及養殖環境的改善，越來越多的人消除了對養殖方面的臟亂差的偏見，愈來愈多的高學歷人才加入到養殖隊伍，這更進一步促進了規模化和科學養殖的進程。此外，受此次疫情的影響，我國的許多養殖短板暴露出來，未來幾年內突發疫病的應急響應措施和相關部門的聯動只會越來越好，應對突發的大型疫情也會越來越得心應手。日常的疾病和預防工作在此次疫情中更加被證實了其重要性。從嚴格控制傳染源和傳播途徑兩方面是能夠將疫情徹底清除的，這一點在西班牙