XXXX大學(xué)--------------------實(shí)驗(yàn)報(bào)告年級：2010級系：XX醫(yī)學(xué)班：1班組：1組姓名：XXXxxxxxxxxxx教師簽名：日期：2012-13-32實(shí)驗(yàn)一鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵笳莆兆贤饪梢姺止夤舛扔?jì)的基本操作；掌握鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵的原理和方法；掌握吸收曲線繪制及最大吸收波長選擇；掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)原理鄰二氮菲（1,10—鄰二氮雜菲）是一種有機(jī)配位劑，可與Fe2+形成紅色配位離子：在pH=3～9范圍內(nèi)，該反應(yīng)能夠迅速完成，生成的紅色配位離子在510nm波長附近有一吸收峰，摩爾吸收系數(shù)為1.1×10-4，反應(yīng)十分靈敏，F(xiàn)e2+濃度與吸光度符合光吸收定律，適合于微量鐵的測定。實(shí)驗(yàn)中，老師我們又見面了采用pH=4.5～5的緩沖溶液保持標(biāo)準(zhǔn)系列溶液及樣品溶液的酸度；采用鹽酸羥胺還原標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液及樣品溶液中的Fe3+并防止測定過程中Fe2+被空氣氧化。實(shí)驗(yàn)儀器與試劑752S型分光光度計(jì)標(biāo)準(zhǔn)鐵儲(chǔ)備溶液（1.00×10-3mol/L）鄰二氮菲溶液（0.15%，新鮮配制）鹽酸羥胺溶液（10%，新鮮配制）NaAC緩沖溶液50ml容量瓶7個(gè)1cm玻璃比色皿2個(gè)鐵樣品溶液實(shí)驗(yàn)步驟標(biāo)準(zhǔn)系列溶液及樣品溶液配制，按照下表配制鐵標(biāo)準(zhǔn)系列溶液及樣品溶液。編號(hào)1234567(鐵樣品溶液)1.00×10-3mol/L標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液0.00ml1.00ml2.00ml3.00ml4.00ml5.00ml2.50ml10%鹽酸羥胺溶液1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml1.00ml0.15%鄰二氮菲溶液5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00mlNaAC緩沖溶液5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml5.00ml說明以上溶液均用移液管移取至50ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度并搖勻。系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（mol/L）02×10-54×10-56×10-58×10-51×10-4——吸收曲線繪制用1cm比色皿，以1號(hào)溶液作為參比溶液，測定4號(hào)溶液在各個(gè)波長處的吸光度，繪制吸收曲線，并找出最大吸收波長。測定波長480nm482nm484nm486nm488nm490nm492nm494nm496nm498nm吸光度0.6270.6280.6300.6320.6340.6360.6380.6450.6510.657測定波長500nm502nm504nm506nm508nm510nm512nm514nm516nm518nm吸光度0.6600.6660.6730.6790.6820.6840.6850.6780.6690.661測定波長520nm522nm524nm526nm528nm530nm532nm534nm536nm538nm吸光度0.6450.6160.5910.5660.5380.5060.4710.4360.3950.356選擇的最大吸收波長為：λmax=512nm繪制吸收曲線如下：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作在選定最大吸收波長處，用1cm比色皿，以1號(hào)溶液作為參比溶液，分別測定2至7號(hào)溶液的吸光度，平行測定3次，計(jì)算吸光度平均值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。編號(hào)234567（樣品溶液）吸光度A10.2330.4600.6850.9121.1280.5337樣品溶液4.65×10-57樣品溶液4.65×10-5mol/ml實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理樣品中鐵的計(jì)算Cx=4.65×10-5×50.00/2.50=9.30×10-4mol/L摩爾吸光系數(shù)計(jì)算在標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線部分選擇量兩點(diǎn)，讀取對應(yīng)的坐標(biāo)值，計(jì)算鄰二氮菲配位物在最大吸收波長出的摩爾吸光系數(shù)：ε=(0.460-0.233)/(0.00006-0.00004)=2.00×10-5

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)1、測定系列標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液時(shí)，必須使用同一只比色皿。2、比色皿放入分光光度計(jì)樣品室前，必須使用吸水紙將外表面擦拭干凈。3、比色皿在換裝不同濃度溶液時(shí)，必須使用待測溶液潤洗至少三次。4、在比色皿未放入分光光度計(jì)測定光路時(shí)，必須將樣品室艙打開。討論及思考如果繪制你的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不好或者標(biāo)準(zhǔn)曲線有部分發(fā)生偏離，請分析原因。答：標(biāo)準(zhǔn)曲線部分偏離的原因可能是：我感覺的數(shù)據(jù)如果有問題主要是感覺分光光度計(jì)不夠精確，使用旋鈕每次旋出相同的測定數(shù)值可能都不一樣，有時(shí)小范圍內(nèi)甚至可能發(fā)生往大旋，波長數(shù)