膠體金技術(shù)簡介周軍BioDot中國1精選可編輯ppt膠體金技術(shù)的起源1971年,Faulk和Taytor在做免疫金電鏡實驗時引入膠體金：是一種分散相顆粒在1～100nm之間的分散體系，外觀透明不渾濁，在普通顯微鏡下看不見；顏色為紅色,指示劑膠體金復(fù)合物（conjugate）:與抗體連接2精選可編輯ppt膠體金技術(shù)的發(fā)展80年代：第一代產(chǎn)品，免疫滲濾法(FlowThrough)90年代：第二代產(chǎn)品，免疫層析法（LateralFlow）,女性妊娠

HCG21世紀(jì)：快速診斷方法適應(yīng)市場需要，膠體金技術(shù)進(jìn)入快速發(fā)展期，成為IVD的熱點(diǎn)（傳染病、毒品、食品安全、畜牧獸醫(yī)等領(lǐng)域）

3精選可編輯ppt兩種技術(shù)的比較4精選可編輯ppt免疫層析法技術(shù)優(yōu)勢:簡單/現(xiàn)場/快速1.打開包裝取出試紙條2.直接插入待測樣品中3.目測讀出結(jié)果（3-10分鐘內(nèi)）5精選可編輯ppt免疫層析法與常規(guī)診斷方法比較優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)快速：全部檢測過程僅需3-10分鐘簡便：不需其它任何儀器設(shè)備，操作簡單，無需專業(yè)人員，攜帶方便，可隨時隨地進(jìn)行。適合基層單位粗篩使用廉價：單個測試條成本極低

可單人份檢測：對標(biāo)本既能成批檢測，又可單份檢測，可立刻拿到結(jié)果，不必等待穩(wěn)定性好：金標(biāo)試劑穩(wěn)定，可長期室溫保存

檢測標(biāo)本種類多：既可用于測血清/血漿/全血，又可用于測尿或唾液,或處理后的組織等固體樣品定量問題靈敏度問題（ng級）固體樣品處理6精選可編輯ppt免疫層析法應(yīng)用領(lǐng)域類別應(yīng)用領(lǐng)域檢測的物質(zhì)人類醫(yī)學(xué)各級醫(yī)院,血站,CDC,防疫站,診斷中心；家庭自檢；商檢系統(tǒng)；邊檢口岸；公安系統(tǒng).女性妊娠（hCG,LH等)傳染病（乙肝五項、艾滋,、梅毒、流感等）腫瘤標(biāo)志物（AFP、、糞便血紅蛋白等）心梗系列(肌鈣蛋白、肌紅蛋白、肌酸激酶）毒品（嗎啡,K粉,搖頭丸,冰毒等）農(nóng)牧業(yè)畜牧獸醫(yī)站,商檢系統(tǒng),邊檢口岸,農(nóng)牧類院系和研究所傳染病（禽流感、獸瘟疫等）病毒（煙草花葉病毒、犬細(xì)小病毒等）環(huán)境環(huán)保監(jiān)測部門,研究機(jī)構(gòu)有害物質(zhì)超標(biāo)食品安全食品安全檢測中心,各監(jiān)管部門農(nóng)獸藥殘留（磺胺類、瘦肉精等）、大腸桿菌、黃曲霉素7精選可編輯ppt免疫層析法試紙條結(jié)構(gòu)測試線（T線）質(zhì)控線（C線）膠體金墊吸水濾紙樣品墊NC膜（硝酸纖維素膜）層析方向PVC底板8精選可編輯ppt免疫層析法原理視頻9精選可編輯ppt免疫層析法檢測原理分類介紹

（雙抗體夾心法）（以大分子HCG檢測為例）10精選可編輯ppt免疫層析法檢測原理分類介紹

（競爭法）（以小分子嗎啡檢測為例）11精選可編輯ppt

免疫層析法檢測原理分類介紹

（間接法，標(biāo)記proteinA）

（以HIV抗體檢測為例）12精選可編輯ppt免疫層析法檢測原理分類介紹

（雙抗原夾心法，標(biāo)記抗原）同上，測抗體13精選可編輯ppt技術(shù)流程AssembledCardsTeststripscutFINALPRODUCTProcessesReagentsMaterialsDesiccantAdhesiveCardsTopLaminateAbsorbentPadMembraneConjugatePadSamplePadPouchHousingPackagingCaptureReagentsDetectorReagentSalts+14精選可編輯ppt平臺準(zhǔn)備與技術(shù)分項材料準(zhǔn)備:樣品墊、膠體金墊、NC膜、吸水紙試劑準(zhǔn)備:免疫試劑如抗原抗體等生物活性原料；生化試劑如氯金酸、檸檬酸三納、氯化納、Tween20、BSA等儀器準(zhǔn)備：常規(guī)儀器pH計、加熱平臺、冷凍離心機(jī)等；專用儀器噴膜儀、切條機(jī)等膠體金標(biāo)記技術(shù)NC膜與溶液噴點(diǎn)膠體金墊與溶液噴點(diǎn)干燥方法15精選可編輯ppt抗體Antibody來源差異:鼠抗,兔抗和羊抗種類差異:單抗,多抗腹水的處理:飽和硫酸銨沉淀法特異性:親和層析柱溶解液:不含鹽,例如PB抗原抗體生物原料

優(yōu)質(zhì)的原料是優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品的保證抗原Antigen天然抗原,重組抗原,合成抗原偶聯(lián)抗原物質(zhì):BSA,OVA等16精選可編輯ppt膠體金標(biāo)記技術(shù)容器清潔或硅化處理膠體金顆粒制備(負(fù)電)顏色與顆粒的關(guān)系.最佳標(biāo)記顆粒大小40nm.蛋白質(zhì)最適用量測定:鹽析法17精選可編輯pptNC膜與溶液噴點(diǎn)-NC膜NC膜的性能NC膜的選擇爬速對靈敏度的影響底襯的作用不同膜廠家的產(chǎn)品差異(Pall/Whatman/Millipore/Sartorius)18精選可編輯pptNC膜與溶液噴點(diǎn)---溶液噴點(diǎn)

C\T線溶液前處理:1.過濾,0.2um孔徑濾膜2.離心1萬轉(zhuǎn)10分鐘噴點(diǎn)過程頭尾去除,噴點(diǎn)中的報廢標(biāo)志C\T線噴點(diǎn)工藝(BJQ3000噴頭)與接觸劃線(FL1000噴頭)工藝比較19精選可編輯ppt膠體金墊與溶液噴點(diǎn)膠體金墊1.材料選擇2.糖的作用3.緩沖溶液的作用噴點(diǎn)法與浸泡法的比較(AJQ3000噴頭)1.釋放快慢2.液體量不同，干燥快慢，邊緣效應(yīng)3.生產(chǎn)方便性20精選可編輯ppt樣品墊

材料選擇各成分的作用1.緩沖溶液的作用(PH)2.鹽的作用3.大分子蛋白BSA\PVP4.表面活性劑Tween-20,TritonX-10021精選可編輯ppt吸水紙吸水效率進(jìn)口與國產(chǎn)紙的差異22精選可編輯ppt粘性底板原理作用供應(yīng)商的選擇對NC膜的影響23精選可編輯ppt干燥方法干燥方法的比較1.冷凍干燥法2.烘箱3.烘房溫濕度的控制1.溫度對蛋白的影響2.濕度的控制辦法24精選可編輯ppt溶液體系分析各環(huán)節(jié)緩沖溶液的選擇與統(tǒng)一鹽的作用表面活性劑的作用糖的作用大分子蛋白的作用其他作用物質(zhì)25精選可編輯ppt注意事項試劑原料耗材的批號控制，確保來源可靠有保障設(shè)置關(guān)鍵控制點(diǎn)，確保流程無差錯儀器定期維護(hù)校準(zhǔn)研發(fā)時即考慮一定生產(chǎn)量的工藝問題，避免上量后不匹配均一性，穩(wěn)定性26精選可編輯ppt膠體金技術(shù)在中國的發(fā)展---回顧1995年：國內(nèi)基本空白，沒有研發(fā)，1-2家生產(chǎn)單位僅是大包裝分切1997年：杭州艾康起步，依靠美國技術(shù)轉(zhuǎn)讓快速發(fā)展為國內(nèi)第一品牌，2007年因?qū)＠m紛被Inverness收購1998年：美國BioDot公司第一臺RR3000儀器進(jìn)入中國，國內(nèi)單位開始少量研發(fā)與生產(chǎn)1999年：基因公司代理BioDot，開始大力推廣膠體金技術(shù)2000年：“第一屆膠體金技術(shù)培訓(xùn)班”在北京生物制品研究所成功舉辦2008年：BioDot中國辦事處成立，全權(quán)負(fù)責(zé)中國區(qū)市場/銷售/售后2010年：星星之火已經(jīng)燎原---國內(nèi)已有約150多家單位從事膠體金技術(shù)的研發(fā)與生產(chǎn)，HCG產(chǎn)品全球市場的70-80%在中國生產(chǎn)27精選可編輯pptRR3000---中國第一臺BioDot儀器(1998年)28精選可編輯ppt膠體金技術(shù)在中國的發(fā)展---機(jī)遇中國具有行業(yè)優(yōu)勢：前端大量的生物學(xué)人才+科研，后端廉價的勞動力+生產(chǎn)OTC、家庭自檢市場保持穩(wěn)定需求食品安全、畜牧獸醫(yī)、生物反恐、流行性傳染病等領(lǐng)域需要現(xiàn)場快速檢測，會有較快增長臨床醫(yī)療市場將向全自動儀器與簡約化快速化檢測這兩級發(fā)展，基層社區(qū)服務(wù)中心、中西部地區(qū)對快速檢測產(chǎn)品會有一定的需求29精選可編輯ppt膠體金技術(shù)在中國的發(fā)展---挑戰(zhàn)關(guān)鍵材料NC膜均為進(jìn)口優(yōu)質(zhì)的上游原料（抗原抗體）依賴進(jìn)口，僅少部分實現(xiàn)國產(chǎn)化，但質(zhì)量不穩(wěn)定穩(wěn)定的生產(chǎn)儀器及關(guān)鍵配件，大部分進(jìn)口專利：基本被國外公司壟斷30精選可編輯ppt膠體金技術(shù)發(fā)展展望(一)標(biāo)記物的發(fā)展:乳膠微粒、熒光微粒(Merck)、順磁微粒、量子點(diǎn)31精選可編輯ppt膠體金技術(shù)發(fā)展展望(二)檢測儀的發(fā)展：膠體金定量儀（ESE）、熒光定量儀(ESE，Biosite)；磁微粒檢測儀（MagnaBiosciences）32精選可編輯ppt膠體金技術(shù)發(fā)展展望(三)新材料的使用：WhatmanFusion5材料不吸附或極低吸附蛋白材料“四和一”，節(jié)約了60%的組裝勞動力檢測線和質(zhì)控線上的包被試劑，需先與乳膠微粒共價，或pH<4時直接包被