BVDV-GS01-2010株的分離鑒定及表達(dá)E2的gE--TK-重組偽狂犬病毒的構(gòu)建

摘要：

本研究旨在對(duì)BVDV/GS01/2010株進(jìn)行分離鑒定，并構(gòu)建表達(dá)E2的gE-/TK-重組偽狂犬病毒。首先，通過(guò)采用組織培養(yǎng)和PCR技術(shù)，成功分離鑒定BVDV/GS01/2010株。然后，通過(guò)重組技術(shù)將E2基因插入gE-/TK-病毒中，構(gòu)建了表達(dá)E2的重組偽狂犬病毒。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，成功構(gòu)建的重組偽狂犬病毒能夠表達(dá)E2蛋白。

1.引言

偽狂犬病毒（Pseudorabiesvirus，PRV）是一種廣泛感染豬科動(dòng)物的病毒，其主要病變是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)和破壞。近年來(lái)，PRV的研究逐漸引起人們的關(guān)注。PRV的E2糖蛋白是PRV的主要表面抗原，其在PRV的感染和免疫過(guò)程中起著重要作用。因此，構(gòu)建表達(dá)E2的重組偽狂犬病毒對(duì)于研究PRV的生物學(xué)特性以及免疫接種的發(fā)展具有重要的意義。

2.材料與方法

2.1BVDV/GS01/2010株的分離鑒定

從感染豬上采集皰疹樣皮疹組織，并通過(guò)組織培養(yǎng)方法制備病毒液。然后，利用PCR技術(shù)檢測(cè)病毒液中是否存在BVDV。最后，通過(guò)序列比對(duì)和系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建，確定分離物為BVDV/GS01/2010株。

2.2構(gòu)建表達(dá)E2的重組偽狂犬病毒

將E2基因克隆到重組表達(dá)載體中，并經(jīng)過(guò)酶切鑒定。然后，將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)染至gE-/TK-病毒感染的細(xì)胞中。最后，通過(guò)PCR和Westernblot等方法檢測(cè)重組偽狂犬病毒是否成功表達(dá)E2蛋白。

3.結(jié)果

3.1BVDV/GS01/2010株的分離鑒定

通過(guò)組織培養(yǎng)和PCR技術(shù)，成功從皰疹樣皮疹組織中分離到BVDV/GS01/2010株，并通過(guò)序列比對(duì)和系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建確定其株系。

3.2構(gòu)建表達(dá)E2的重組偽狂犬病毒

成功將E2基因插入gE-/TK-病毒中，并經(jīng)過(guò)PCR和酶切鑒定確認(rèn)構(gòu)建成功。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證明，重組偽狂犬病毒能夠表達(dá)E2蛋白。

4.討論

本研究成功分離鑒定了BVDV/GS01/2010株，并構(gòu)建了表達(dá)E2的重組偽狂犬病毒。其中，分離鑒定主要通過(guò)組織培養(yǎng)和PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)；重組偽狂犬病毒的構(gòu)建則是通過(guò)將E2基因插入gE-/TK-病毒中實(shí)現(xiàn)的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，成功構(gòu)建的重組偽狂犬病毒能夠表達(dá)E2蛋白，為進(jìn)一步研究PRV的生物學(xué)特性及免疫接種奠定了基礎(chǔ)。

5.結(jié)論

本研究成功分離鑒定了BVDV/GS01/2010株，并構(gòu)建了表達(dá)E2的重組偽狂犬病毒。該研究的結(jié)果為進(jìn)一步研究PRV的生物學(xué)特性、免疫接種方法的改進(jìn)提供了重要依據(jù)本研究成功分離鑒定了BVDV/GS01/2010株，并構(gòu)建了表達(dá)E2的重組偽狂犬病毒。通過(guò)組織培養(yǎng)和PCR技術(shù)，成功從皰疹樣皮疹組織中分離到BVDV/GS01/2010株，并通過(guò)序列比對(duì)和系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建確定其株系。重組偽狂犬病毒的構(gòu)建是通過(guò)將E2基因插入gE-/TK-病毒中實(shí)現(xiàn)的，并經(jīng)過(guò)PCR和酶切鑒定確認(rèn)構(gòu)建成